样品采集及注意事项

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五、采样时注意事项
注意人畜共患病：做好自身防护，不直接接触动物
样品。 注意人为的传播疫病：采样工具和防护用品，随身 带走，统一消毒。 采样动物的健康状况（饮食，免疫，用药等） 采集的病料应该包装好，防止污染环境，防止无意 的传播疾病，做好环境消毒和病害肉的处理。 对于突发事件中急性死亡的动物，如怀疑是炭疽， 不能随意解剖，可以采血，或局部解剖做触片。
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样本\样品的数量
样本：总体中的一部分代表；样品：检测的原始材料。 概率抽样（随机抽样）：是按照随机原则进行抽样，不加主
观因素，组成总体的每个单位都有被抽中的概率（非零概率 ） 比例抽样：按养殖规模成比例抽样。 多阶段抽样：全市分区，每个区随机选县，每个县选乡镇， 每个乡镇选养殖场。 样本量，符合统计学要求，决定因素：疫病在群体中的发生 率，可信水平，检测方法 的敏感性和特异性。 样品的量要足够检测使用。
二、猪的采血方法
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猪前腔静脉采血
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1.选取合适的针筒和针头
通常都是用一次性5毫升注射用针筒。由于猪 的大小不同，前腔静脉的深浅不一样，要求使用的 针头也是不一样的。 若针头太短，刺不到前腔静脉；针头太长，可 能刺穿整条前腔静脉，也是采不到血的。 种公母猪选用16#×100毫米针头； 30千克以上的中猪选择用12#×72毫米针头； 10～30千克小猪选用9#×50毫米针头； 10千克以下乳猪选用9#×30毫米针头。
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4.下针和抽血
小猪：对准以上描述的部位，用针垂直刺入，拉紧针筒活塞
，若针头扎中前腔静脉，可见血液自血管源源流出，一直抽 取到所需的血量即可。如果抽不到血液，说明针头没有扎中 血管，此时可上下移动针头，直到针筒中见血液流出为止。 种公母猪和中大猪：对准下针部位，使针头偏向气管约 15 度方向下针，拉紧针筒活塞，若针头扎中前腔静脉，可见血 液流出。如果不见血液流出，说明针头没有扎中，有可能是 前腔静脉较深，可用手顶紧针筒，使针头扎深一点。若仍采 不到血，可以把针头往后稍退，或左右摇摆针头，直到有血 流出为止。实际上，操作熟练后，针头有没有扎中是可以感 觉到的，当针头扎破静脉壁时，可以感觉到轻微的“扑”的 一声。
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6.1样品的保存
血清：4-8℃冷藏，不超过2周；
抗凝血： 4-8℃冷藏，不超过1周；
病毒检验材料：短时间可冷藏，否则须-20 ℃或-70 ℃以下保存，无条件的可置灭菌50%甘油-PBS液中冷
藏，不宜反复冻融。 细菌检验病料：冷藏，不宜冷冻，可置灭菌的30%甘 油-PBS液/盐水中冷藏。 所有冻存样品忌反复冻融
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4.1样品的包装和编号
单个样品的包装 动物血清、全血、棉拭子、水泡液，加有PBS的粪便等液体 样品用用1.5ml，2ml，5ml带盖的塑料离心管； 组织病料等固体样品用自封口样品袋，或放入1.5ml及2ml塑 料离心管； 每次送样的同一种样品进行编号，每个样品都要有唯一编号 ，标识清楚，不易丢失。 每组样品的包装 以镇或每个采样点为单位分组，每组一个大包装，用自封口 样品袋包装，并贴有标签，注明样品名、样品编号、采样日 期等。
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溶血程度不一的血清样
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二、样品的种类
血液样品：血清，全血抗凝血，血浆
组织样品：心肝脾肺肾脑，淋巴结，扁桃体
粪便样品：新鲜，湿润的 生殖道和精液样品 皮肤样品：皮屑 分泌液和渗出液样品：舌面或蹄部的水泡液
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血液样品
血液：最常用的样品，可以做血清学试验的样品，
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3. 翅静脉采血 在翅下静脉处消毒，手持采血针，从无血管处向翅 静脉丛刺入，见有血液回流，即把针芯向外拉使血 液流入采血针。 也可保定禽只，使翅膀展开，露出腋窝部，用消毒 棉消毒。拇指压近心端，待血管怒张后，用装有细 针头的注射器，由翼根向翅方向平行刺入静脉，方 向反了？放松对近心端的按压，缓慢抽取血液。采 血完毕用棉球按压止血。
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6.2样品的运输
关键是：容器（密闭）温度（低温）时间（越快越好） 容器：密封容器，防止渗漏，造成环境污染或疫情扩散。 温度：样品应在低温下保存和运输（放置冰块）。 （拭子样品和组织样品应作暂时的冷藏或冷冻处理，然后运送 。血清样品，若 24h内运达实验室，冷藏运输；若超过 24h ，要先冷冻后，再冷藏运输，途中不能超过 48h。） 时间：若能在4h内送到实验室，可用冰袋冷藏运输。如果超 过4h，应置于-30 ℃冷冻处理，再在保温箱内加冰袋运输， 在24h内送到。若 24h不能送到实验室，则运输过程中环境 温度应保持在-20 ℃以下（干冰）。
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2.猪只的保定
种公母猪需要用保定绳固定，并且要求尽可能 吊得高一点，使猪的头颈与水平面呈 30度以上（如 图），既方便采血人员察看采血部位，又使前腔静 脉向外突出，静脉血充胀。 20千克以上的中大猪，由 1～2名饲养员用捉 猪器(或保定绳)拉住，头昂起，偏向右侧(如图)。 20千克以下的小猪，可由 1～2名饲养员抓起 、倒立，后背紧靠在栏架上（如图）。
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3.找准下针部位
猪的前腔静脉越往头部越浅，但也越细；越靠胸部
越粗，但也越深，所以，采血应选择适当的部位。 若小猪采血的部位太靠头部，血管太细，很难扎中 ，即使扎中了也很难抽出血，所以，小猪的采血部 位应稍靠后。 中大猪和种母猪血管比较粗，靠胸部较深，针头够 不到血管，所以，应略靠前。 20千克以下的小猪应采两前肢与气管交汇处种公母 猪和 20千克以上的中大猪可选颈部最低凹处。
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5、样品追溯
样品编号和填写采样单目的是对检测结果的追溯。
《动物防疫法》规定动物免疫抗体监测、动物疫病 病原监测、动物疫病应急流行病学调查等均实行可 追溯制度。 追溯内容：家禽来源、饲养周期、防疫情况、免疫 程序、疫苗及兽药的使用情况。
抗体监测要求追溯到每栋，每舍。
病原学监测必须追溯到每只，每头。
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粪便、棉拭子和O/P液样品的采集
泄殖腔拭子的采集：将棉拭子插入泄殖腔内约1.5-
2cm,旋转后沾上粪便。 咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：将灭菌的干棉拭子插 入口腔至咽的后部或鼻腔，轻轻擦拭并慢慢旋转将 拭子拔出，将棉拭子放入缓冲液内。 O/P液是从动物食道/咽喉刮取的黏膜样品，用特制 的食道探环刮取黏膜，放入样品保存液中。
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一、禽的采血方法
1. 雏鸡心脏采血 左手抓鸡，术者手持采血针，平行颈椎从胸腔前口插入回抽 见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。 2. 成年禽心脏采血 成年禽只采血可取侧卧或仰卧保定。 (1)侧卧保定采血 助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定， 在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1 ／2处消毒，垂直或稍向前方刺人2～3厘米，回抽见有回血 时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。 (2)仰卧保定采血 胸骨朝上，用手指压离嗉囊，露出胸前 口，用装有长针头的注射器，将针头沿其锁骨俯角刺入，顺 着体中线方向水平穿行，直到刺入心脏。
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2、采样前准备—采样技术
血液样品：牛、马、羊从颈静脉或尾静脉采血；猪
从前腔静脉采血，用量少时也可从耳静脉抽取；家 禽从翅静脉抽取。 棉拭子样品：泄殖腔，咽喉，鼻腔 水泡皮及水泡液： O/P液：保定，左手拉出舌头或从嘴的一侧按住舌头 ，右手缓慢放入探杯。 组织样品：解剖，洁净取样。
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4.2样品的记录
单个样品的小塑料离心管外用油性记号笔标记
每组样品自封袋外用钢笔填写样品标签和封条
编号与采样单一致，具有唯一性和可追溯性。 填写采样单：被采样畜主的联系方式和采样人的联
系方式；被采样动物的健康状况和免疫状况；被采 样动物的联系方式（畜种，日龄，标识号等）；样 品运输方式；日期，签名（采样人，畜主）。 每类样品要求填写一份采样单。
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几种重要疫病的采样时机
禽流感、新城疫：发病初期采全血，泄殖腔\咽喉棉
拭子；后期采集新鲜粪便；剖剪后的气管，肺脏， 肾脏等 口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，O/P液及口腔分泌 物和咽喉棉拭子 猪瘟，猪伪狂犬，蓝耳病：全血，血清，组织病料 ：肺脏，脾脏，淋巴结，扁桃体，流产胎衣等，新 鲜精液或冷冻精液 猪流感：在发热期采集鼻咽棉拭子和肺组织病料。
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水泡液及水泡皮的采集
用75%酒精消毒水泡表皮，用灭菌生理盐水擦
去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于含 抗生素的PBS缓冲液中；然后用剪刀将水泡皮 剪下，放入含抗生素的PBS缓冲液中。
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3、采样的准确性和时效性
代表性：应该考虑到整个监测区域的地理分布，选取有代表
性的点。如动物品种分布、日龄、饲养密度、地势特点、交 通特点、动物迁徙习性等因素。如禽流感采样时，疫区交接 处，野鸟迁徙途径，水禽家禽混合饲养处等。 时效性：如抗体监测，免疫后14天左右才可以采集；监测病 原时，注意排毒时间和病原的易嗜细胞和组织，在监测时要 根据不同时期，采集不同部位的组织进行检测。如口蹄疫病 毒首先是在咽喉部和肺上皮细胞扩增，然后进入血液，通过 分泌物、水泡排毒。
室为最好。无菌采集，冷藏，保存液中不加任何抗生素。 病毒学检测样品：病毒检测应在动物病初、体温升高期间采 集。以组织脏器、血液、粪便等样品为主 。冷藏或冷冻， 保存液中加抗生素。 血清学检测样品：静脉采血3 ml左右，注射器内留一定空间 ，静置过程或已凝固的血液应低温冷冻，以免溶血。短时间 内，可在4度左右保存；如时间较长应冻结保存，注意不能 反复冻融. 病理学检测样品：保证样品新鲜，应选择病变最典型最明显 的部位，且连同部分健康组织一并采集。 浸泡于酒精或福 尔马林溶液中，冷藏保存和运输。
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也可以作为病原学试验的样品。 全血（抗凝血）：抗凝剂有肝素，阿氏液，枸橼酸 钠和4%EDTA，或者用玻璃珠，脱纤维蛋白。 血清：不加抗凝剂的血液，在室温静置2~4h（或 37℃1h）待血液完全凝固后，析出上清即为血清。 血浆：抗凝血混匀后，静置，上清即为血浆。
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检测样品的分类
细菌学检测样品：采集发病典型或刚死亡的整体动物送实验
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血液样品的分离方法
抗凝血：采血前在试管或注射器内按比例加抗凝 剂，运输时必须减少震荡以免溶血。 非抗凝血：分离血清 血清析出好的因素：容器：玻璃试管优于塑料离 心管；斜面：与空气接触面要大。温度：最佳温 度是体温；时间：室温静置最短2小时；离心： 转速要低，2000转。 胶冻状血清的成因：采血前刚喂食(没有空腹)； 凝血时间不够；脂肪血（营养过剩）
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1. 耳缘静脉采血 站立保定，助手用力在耳根捏压静脉的近心端，手指轻弹后 ，用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张。沿血管刺入，见 有血液回流，缓慢抽取所需量血液或接入真空采血管。用棉 球按压止血。 2. 前腔静脉采血 (1) 站立保定，保定器保定让猪头仰起，露出右腋窝，从 右侧向心脏方向刺人，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使 血液流入采血针。 (2)仰卧保定，把前肢向后方拉直。如何操作？是否向上 向外一般用装有20号针头的注射器采血，其穿刺部位在胸骨 端与耳基部连线上胸骨端旁2厘米的凹陷处，向后内方与地 面呈60度角刺入2～3厘米，当进入约2厘米时可一边刺入一 边回抽针管内芯；刺入血管时即可见血进入针管内，采血完 毕，局部消毒。
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一、样品存在的问题
样品的真实性（假样品，一个或几个样品分开、混 合），浪费检测试剂。 样品的质量（溶血，腐败，反复冻融）。 采样单填写的信息不全（畜禽日龄，免疫情况等） 组织样品采集的太少，不具有代表性。
各种类的样品用一个采样单填写。
样品编号不能追溯回去。 样品编号没有标准，经常是从1开始，时间久了无法 区分。 样品采集后没有及时处理，导致溶血等。
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三、高品质样品的特征
样本\样品数量适当
样品新鲜
样品标记明确
采样单填写规范
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四、如何得到高质量的样品
高质量样品
采样前准备
采样的时效性
样本的数量
样品的标记
样品的保存 和运输
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1、采样前的准备-器具
采样工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，镊子，
酒精灯，酒精棉，棉签，保定动物专用工具 样品存放用具：塑料离心管（1.5，2，5ml），自封 口样品袋，试管架，塑料样品盒，胶布，封口膜， 冰袋。 防护用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔离衣等。 记录用具：不干胶标签、圆珠笔、油性记号笔、采 样单、记录本等