【CN109971726A】杂交瘤细胞株及其产生的抗体和制备方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910201070.6

(22)申请日 2019.03.18

(83)生物保藏信息

CGMCC No.16695 2018.11.08

CGMCC No.16696 2018.11.08

(71)申请人 中国农业科学院生物技术研究所

地址 100081 北京市海淀区中关村南大街

12号

(72)发明人 刘卫晓　金芜军　张哲　高进　

董美　王迪　

(74)专利代理机构 北京华仲龙腾专利代理事务

所(普通合伙) 11548

代理人 李静

(51)Int.Cl.

C12N 5/20(2006.01)

C07K 16/12(2006.01)G01N 33/569(2006.01)C12R 1/91(2006.01) (54)发明名称

杂交瘤细胞株及其产生的抗体和制备方法

(57)摘要

本发明公开了杂交瘤细胞株1D11 1A5和2G4

1B8及其产生的抗体和制备方法。所述杂交瘤细

胞株于2018年11月08日保藏于中国微生物菌种

保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为

CGMCC No.16696和CGMCC No.16695。所述细胞株

分泌单抗腹水纯化后得到的抗体间接ELISA效价

分别为1:768000和1:640000，抗体亚型分别为

IgG2a和IgG1，所述单抗可以特异识别原核表达

的重组Cry2A蛋白及转基因水稻中的内源Cry2A

蛋白，为转基因水稻中该蛋白的检测提供了物质

和技术支撑。权利要求书1页 说明书7页 附图4页CN 109971726 A 2019.07.05

C N 109971726

A

权　利　要　求　书1/1页CN 109971726 A

1.杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株于2018年11月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.16696和CGMCC No.16695。

2.根据权利要求1所述杂交瘤细胞株，其特征在于，包括生物保藏编号为CGMCC No.16696的杂交瘤细胞株1D11 1A5以及生物保藏编号为CGMCC No.16695的杂交瘤细胞株2G4 1B8。

3.根据权利要求1所述杂交瘤细胞株，其特征在于，杂交瘤细胞株1D11 1A5以及杂交瘤细胞株2G4 1B8所产生的单克隆抗体的类型分别为IgG2a和IgG1。

4.根据权利要求1所述杂交瘤细胞株，其特征在于，杂交瘤细胞株1D11 1A5以及杂交瘤细胞株2G4 1B8所产生的单克隆抗体通过间接ELISA检测所得到的效价依次为1:768000和1:640000。

5.根据权利要求1所述杂交瘤细胞株，其特征在于，将杂交瘤细胞株接种到小鼠腹腔中制备腹水，然后进行Protein A-琼脂糖亲和层析柱纯化，得到单克隆抗体。

6.权利要求5所述单克隆抗体在检测Cry2A抗虫蛋白中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述单克隆抗体用于制备ELISA法检测Cry2A抗虫蛋白的试剂。

8.一种杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)通过原核表达得到Cry2A重组蛋白；

b)免疫动物：将Cry2A重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；

c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；

d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5-7天进行ELISA检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述小鼠的脾细胞与SP2/0细胞的融合比例为1:5-1:10。

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