体外受精1

c. 卵母细胞的成熟培养
成熟卵母细 胞的获得
超数排卵
抽取法
（活体卵巢） （屠宰母畜）
未成熟卵母 细胞的获得
卵泡剥离法
腹腔镜采卵法（人和灵长类）
通过人工注射激素，刺激暂时处于休止状态的卵母细胞进 入成熟发育期，成熟后排放于输卵管，由此获得比自然排 卵多得多的卵母细胞，这一过程就称为超数排卵。
•定义:
卵母细胞－卵丘细胞复 合物采集示意图
卵母细胞的成熟度:
√ A级: 细胞质均匀,外有三层以上卵丘细胞包围 √ B级: 细胞质均匀,卵丘细胞层低于三层或部分 包围 C级:外无卵丘细胞包围 D级:死亡或退化
卵母细胞的成熟培养
制作培养滴
预平衡
移入卵泡卵母细胞
观察成熟情况
培养(20-24h)
液滴示意图
成 熟 卵 母 细 胞 图
腹 腔 镜 仪 器
1.获能的目的：使精子质膜发生生化变化，从而 引起顶体反应,促进精子入卵。 2.获能的方法：
体内获能:同种或异种动物子宫和输卵管 体外获能:人工获能液获能 3.获能精子的检查： 精子超激活。即：头对头凝集后，凝集精子 分开，尾部呈强有力的拍打运动。
步骤：
1.配制获能液
高离子强度液:置换精子表面抗原物质或去能因子。 钙离子载体：携带钙离子进入精子内。 肝素：清除精胺，促进钙离子的吸收。 血清蛋白：改变胆固醇的含量。
研究历史
1858年： 德国 兔、豚鼠
1951年： 美籍华人张明觉、澳大利亚Austin 精子获能 1959年：张明觉 试管兔 1963年：张明觉 获能液 1978年：试管婴儿
技术方法：
１．卵母细胞的采集和成熟培养 ２．精子的获能处理 ３．体外受精 ４．受精卵的体外培养 ５．胚胎移植
a. 卵母细胞的采集 b. 卵母细胞的选择
•存在雌雄原核
•存在两个极体
显微操作仪
胞 质 内 精 子 注 射
受精卵
二细胞期
四细胞期
八细胞期
桑葚胚
胚泡
受精卵的体外培养
１．早期胚胎发育的阻断问题
体外受精的早期胚胎在体外发育中，往往会停止在某
Fra Baidu bibliotek
个阶段不再发育，这种现象称发育阻滞
２．克服阻断的方法 改变培养液中的有关成分 输卵管上皮细胞 与体细胞共同培养 颗粒细胞
•方法:
FSH （滤泡刺激素） +其它激素
PMSG(孕马血清)
促进滤泡的生长和 发育。
1. 供体的年龄
•影响超排的因素
2. 激素的剂量
3. 卵巢发育的状况
从小鼠输卵管中收集卵母细胞或胚胎
脂肪体 卵巢 输卵管
A、将生殖器官与肠系膜等分开
B、切下输卵管
容器
C、自输卵管伞口冲得胚胎
抽取 3－5mm 卵 泡的卵泡液及卵 母细胞－卵丘细 胞复合物
手术法
A、由输卵管冲向伞部
B、子宫冲洗法
胚胎质量鉴定:
取: 外形整齐,大小一致,分布均匀,外膜完整.
弃:
无卵裂和异常卵
胚胎移植
1
4 2
5
3
6
1、2、3：气泡 4：培养液 5：胚胎 6：石蜡油
卵巢和脂肪体 输卵管 子宫 针
小鼠子宫的胚胎移植
人工授精
胚胎移植
牛的胚胎移植过程
牛的人工授精
2.精子的洗涤，以去除精浆 3.获能处理 制作受精滴
精子移入受精滴
获能
体外 受精 常规体外受精技术 与分离精子相结合的体外受精技术
透明带下注射 显微受精技术
卵胞质内单精子显微注射
卵母细胞的体外受精
1.步骤：
精卵入受精液
2.受精后的判别
共作用８h
受精判别
•卵周隙可见到精子尾部 •胞质中有膨大的精子头部
第三章
体外受精
一、定义与意义 二、原理
三、研究历史
四、技术方法
定义：
是指哺乳动物的精子和卵子 在体 外人工控制的环境中完 成受精过程的技术．
•研究受精机制与早期胚胎发生 •有利于家畜动物改良和优良家畜 遗传资源的开发和利用 •治疗人类的不孕症 •拯救和保护濒危动物
意义：
原理：
是人工模拟体内环境，使初级卵母细 胞成熟，同时使精子获能，完成受 精．
技术方法
1.供体受体的选择 2.超数排卵 3.同步发情 4.人工受精 5.胚胎采集 6.胚胎的检查与鉴定
7.胚胎移植
同步发情
利用某些激素制剂人为地控制一群母畜发情周期 的进程,使之在预定时间内集中发情.
方法: 1.使用孕激素，抑制卵泡的发育。 2.中断黄体的发育(前列腺素F2α,即:PG F2α)
胚胎移植
1.定义: 2.意义:
3.技术方法
定义:
即:受精卵移植,是指良种母畜配种后,从其生 殖道(输卵管或子宫角)取出受精卵或早期胚 胎,移植到同种生理状态相同的母畜体内,使 之继续发育成为新个体的技术.(借腹怀胎)
意义：
•发挥优良母畜的繁殖潜力 •促进家畜改良的速度
•作为胚胎操作的基础
•可以保存遗传资源 •濒危动物的拯救与保护