硝酸甘油注射液含量检验方法验证(++定量限)

验证方案

编号：Z-V-AQ004-03硝酸甘油注射液含量检验方法验证方案

目录

1、起草、审核与批准 (2)

2、目的 (2)

3、范围 (2)

4、职责 (2)

5、概述 (3)

6、执行标准和规范 (3)

7、验证前的支持性确认 (3)

8、验证内容 (5)

9、数据分析 (9)

10、偏差 (9)

11、确认结果评定与结论 (9)

12、再验证周期 (9)

1、起草、审核与批准：

2、目的：

硝酸甘油注射液在产品生产过程中，需用高效液相色谱法测定其含量，为确定其对含量测定检验方法的适用性，特制定本验证方案。

3、范围：

本方案适用于硝酸甘油注射液含量检验方法的验证。

4、职责：

5、概述：

高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)系采用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入注内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。

硝酸甘油注射液的质量标准中规定，在产品生产过程半成品和成品检验，需用高效液相色谱法测定其含量。

6、执行标准与规范：

本方案以《LC-20A高效液相色谱仪标准操作规程》、《PC-2001高效液相色谱仪标准操作规程》、《硝酸甘油注射液质量标准》为依据，制定了硝酸甘油注射液验证方案。

7、验证前的支持性确认：

仪器确认前应确认与本次确认相关联的完成情况。

7.1 文件的检查确认：

7.2 仪器仪表的检查确认：

7.2.1 仪器仪表量程、规格必须符合测试及设计规范要求。

7.2.2 仪器仪表使用前必须经具有相应资质机构校验，且在有效期内。

7.3 公用工程系统的检查确认：

7.4 相关人员的培训：

7.4.1 文件培训

文件培训表

7.4.2 人员培训

人员培训表

8、验证内容：

8.1 硝酸甘油注射液含量测定方法

8.1.1 仪器与用具：电子天平、高效液相色谱仪、容量瓶、移液管。 8.1.2 试剂与试液： 乙腈-水（50：50）、硝酸甘油对照品。 8.1.3 条件：照高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（50∶50）为流动相；检测波长为215nm 。

取硝酸甘油对照品约1.25g ，置25ml 量瓶中，加0.1mol/L 盐酸溶液溶解并稀释至刻度，即得（每1ml 中约含0.5mg 的溶液）。置水浴中加热10分钟，放冷，用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调节pH 值至中性，取20µl ，注入液相色谱仪中，记录色谱图，在相对保留时间约0.4处应出现两个降解产物峰（1,2-二硝酸甘油和1,3-二硝酸甘油峰），两峰之间的分离度应大于1.0。理论板数按硝酸甘油峰计算不低于2000。

样品溶液制备：精密量取本品1ml ，置50ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml 中约含硝酸甘油0.1mg 的溶液）。

对照溶液制备：取硝酸甘油对照品约0.5g ，置50ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

测定方法：精密量取样品溶液与对照溶液各20ul 注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。

计算公式： 含量（％）＝％100

51/50A 1.0

C A R

R x ⨯⨯⨯⨯⨯ 式中： A x ------表示供试品溶液所得色谱图中主成分的峰面积；

A R ------表示对照品溶液的峰面积；

C R ------表示对照品的浓度。

判定标准：本品含硝酸甘油（C3H5N3O9）应为标示量的90.0％～110.0％。

8.2 重复性试验：

8.2.1 取同一批硝酸甘油注射液样品，按硝酸甘油注射液含量测定方法同一人共制备6份供试液测定，所得结果的相对标准偏差≤2.0％。

重复性试验记录

8.3 中间精密度试验

8.3.1 同一批硝酸甘油注射液，由2个不同的人在不同时间不同仪器分别测定2次的结果，所得结果的相对标准偏差≤2.0％。

表1 中间精密度试验记录

表2 中间精密度试验记录

表3 中间精密度验证结果（两人）

8.4. 定量限确认

8.4.1. 定义

定量限是指样品中被测物质能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。 8.4.2. 方法

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（50∶50）为流动相；检测波长为215nm 。

取硝酸甘油对照品约1.25g ，置25ml 量瓶中，加0.1mol/L 盐酸溶液溶解并稀释至刻度，即得（每1ml 中约含0.5mg 的溶液）。置水浴中加热10分钟，放冷，用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调节pH 值至中性，取20µl ，注入液相色谱仪中，记录色谱图，在相对保留时间约0.4处应出现两个降解产物峰（1，2-二硝酸甘油和1，3-二硝酸甘油峰），两峰之间的分离度应大于1.0。理论板数按硝酸甘油峰计算不低于2000。

对照品溶液制备：取硝酸甘油对照品约0.5g ，置50ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液制备：精密量取硝酸甘油对照品 g ，置 ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml 中约含硝酸甘油0.1mg 的溶液）。

测定法：精密量取上述两种溶液各20µl ，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

计算公式： 含量（％）＝％100

51/50A 1.0

C A R

R x ⨯⨯⨯⨯⨯ 式中：

A x ------表示供试品溶液所得色谱图中主成分的峰面积； A R ------表示对照品溶液的峰面积； C R ------表示对照品的浓度。 8.4.3. 可接受标准

以 S / N ＝ 10 时的相应浓度作为本品含量检测的定量限。 8.4.4. 定量限确认记录见附表5。 附表5

定量限确认记录