细胞沉默调节蛋白1SIRT1活性荧光定量检测试剂盒中文版
SIRT1参与肝细胞癌发生发展和治疗的研究进展
SIRT1参与肝细胞癌发生发展和治疗的研究进展张彩灵1 覃小珊1，2 黄赞松1，2，3▲1.右江民族医学院研究生学院， 广西百色 533000；2.右江民族医学院附属医院消化内科，广西百色 533000；3.广西肝胆疾病临床医学研究中心，广西百色 533000[摘要] 肝细胞癌是严重影响人类健康的疾病,其发生发展机制尚不完全明确,治疗也面临众多的难题。
SIRT1是Sirtuin 家族中定位于细胞核的基因,主要参与细胞代谢、衰老、凋亡、分化、应激反应、能量代谢等生理活动,并与人类的多种肿瘤密切相关。
研究显示，SIRT1在肝细胞癌中呈持续高表达，在肝癌的发生发展、侵袭、转移等多方面起到了重要的作用，并与肝细胞癌的诊治和预后相关。
本文对SIRT1在肝癌发生发展以及诊治中的作用作一综述,为肝癌的实验及临床治疗研究提供参考依据。
[关键词] SIRT1；肝细胞癌；癌基因；抑癌基因[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2021）01-0047-04Research progress of SIRT1 involved in the occurrence,development and treatment of hepatocellular carcinomaZHANG Cailing1QIN Xiaoshan1,2HUANG Zansong1,2,31. Graduate School, Youjiang Medical University for Nationalities, Guangxi, Baise 533000, China;2. Department ofGastroenterology, Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities, Guangxi, Baise 533000, China;3. Clinical Medical Research Center for Hepatobiliary Disease in Guangxi, Guangxi, Baise 533000, China[Abstract] Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease that seriously impacts human health. Its mechanism of occurrence and development is not completely clear yet, and its treatment also faces many difficulties. SIRT1 is a gene located in the nucleus of Sirtuin family, which is mainly involved in physiological activities such as cell metabolism, aging, apoptosis, differentiation, stress reaction, energy metabolism and other physiological activities, and is closely related to a variety of human tumors. Researches have shown that SIRT1 is persistently and highly expressed in HCC, which plays an important role in the occurrence, development, invasion and metastasis of HCC, and is related to the diagnosis, treatment and prognosis of HCC. The role of SIRT1 in the occurrence, development, diagnosis and treatment of liver cancer was reviewed, and reference for experimental and clinical treatment of liver cancer was provided in this paper.[Key words] SIRT1; Hepatocellular carcinoma; Oncogene; Tumor suppressor gene肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常见的原发性肝癌，也是世界范围内最常见的癌症相关死亡原因[1]。
实验中Sirt1靶点3大检测详解
Sirt1是什么？Sirt1是一个全长747aa的NAD依赖的脱乙酰化酶, 属于sirtuin家族。
翻译后修饰的SIRT1是一个110-130kda的蛋白质，包含一个脱乙酰酶sirtuin型结构域。
TNF-alpha处理可诱发C末端缺失的75-80kda的SirT1片段, 另外SirT1存在一个57-61kda的亚型。
SIRT1可能存在于核仁、核常染色质、异染色质和内膜中。
它能在细胞核和细胞质之间穿梭。
SIRT1通过催化关键蛋白的去乙酰化来调节细胞凋亡和肌肉分化等过程,在氧化应激和DNA损伤修复中发挥重要作用。
一、Sirt1的WB检测在Western Blot 实验中，样本准备是实验成功的第一步。
1.裂解样本时加入足量的蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。
2.该蛋白高度修饰，分子量达到130kd，可在转膜液中加入终浓度0.1% 的SDS 以提高转膜效率。
3.使用Bradford，Lowry 或BCA 法对总蛋白进行定量。
每个泳道加入20-50μg 总蛋白，确保sirt1含量在WB 检测限之上。
背景过高是Western Blot 中常常出现的问题。
对于此类问题，建议优化抗体浓度以获得最佳的信噪比，使用菲恩生物FNab07877 anti- SIRT1 antibody进行WB检测结果如下:二、Sirt1的IHC检测组织块从生物体上取下后由于酶的作用会迅速降解。
所以需要通过化学试剂的作用使蛋白交联（多聚甲醛，福尔马林等），防止组织自溶，维持抗原性并防止抗原弥散。
但是过度固定会封闭抗原表位，导致信号减弱甚至消失。
另外，一抗的浓度对于实验结果非常重要。
浓度过低得不到阳性信号，浓度过高可能产生非特异性结合，造成假阳性。
Sirt1定位于细胞核，为获得理想的染色结果，建议：1.根据组织块大小和类型确定固定时间，一般在4% 多聚甲醛（PFA）固定18-24 小时。
2.推荐使用pH 6 的枸橼酸钠，热修复20-30 分钟或使用胰蛋白酶、蛋白酶K 进行酶修复。
细胞沉默调节蛋白1SIRT1活性比色法定量检测试剂盒中文
细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量检测试剂盒（中文版）主要用途细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过比色探针对硝基苯胺标记人工合成的乙酰化p53多肽底物，经过SIRT1脱乙酰基后，被位点特异性氨基肽酶水解，释放黄色对硝基苯胺，即采用比色法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或完全纯化酶样品中SIRT1的活性定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景人体组蛋白脱乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（class I）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（class II）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述两大种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。
种类III（class III）为NAD+辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，为曲古菌素A（trichostatinA；TSA）不敏感型赖氨酸脱乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。
催化赖氨酸脱乙酰基反应，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基团转化产生的烟酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。
SIRT1位于细胞核内，与酵母Sir2同源性最高。
其功能在于调节p53活性和抑制细胞凋亡。
基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位点）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切离的功能，首先使用比色染料对硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）来标记乙酰化p53多肽底物，其次进行脱乙酰化，最后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈吸光值的黄色对硝基苯胺（波长405nm），由此来定量测定沉默调节蛋白1的活性。
SIRT1的调节及其在感染性疾病中的作用
SIRT1的调节及其在感染性疾病中的作用①周云张沛欣（空军军医大学第二附属医院传染科，西安710038）中图分类号R512.63文献标志码A文章编号1000-484X（2021）08-1008-04［摘要］沉默信息调节因子2相关酶1（sirtuin1，SIRT1）是一种NAD+依赖的组蛋白去乙酰化酶，参与多种生物学进程，如细胞分化、衰老、凋亡和能量代谢等。
SIRT1受到多种蛋白及miRNA的调节，对多种免疫性疾病、肿瘤性疾病及感染性疾病具有显著影响。
本文主要对SIRT1的调控及其在感染性疾病中的作用机制进行综述。
［关键词］SIRT1；感染；miRNARegulations of SIRT1and its mechanisms in infectious diseasesZHOU Yun，ZHANG Pei-Xin.The Second Affiliated Hospital of Air Force Medical University，Xi′an710038，China ［Abstract］Sirtuin1（SIRT1），a NAD+dependent histone deacetylase，is involved in various biological processes，such as cell differentiation，aging，apoptosis and energy metabolism.SIRT1is regulated by a variety of proteins and miRNAs，and has a signifi‑cant impact on a variety of immune diseases，neoplastic diseases and infectious diseases.This paper mainly reviews the regulations of SIRT1and its mechanisms in infectious diseases.［Key words］SIRT1；Infection；miRNASIRT1属于沉默信息调节因子（silent informa‑tion regulator2，SIR2）家族，是NAD+依赖的脱乙酰基酶，它由组蛋白和非组蛋白构成。
SIRT1通过CREB
网络出版时间：２０２３－０６－１５１４：１１：３３ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ２／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３０６１４．１５４５．０２１．ｈｔｍｌＳＩＲＴ１通过ＣＲＥＢ／ＢＤＮＦ通路调控吗啡诱导大鼠条件位置偏爱的机制研究刘 奔１，涂婉玉１，张腾腾１，姚志军２，易善勇１，赵 营３，雒国胜１，贾文歌１，李晨晨１，赵 斌１，魏 来１（新乡医学院１．法医学院、２．基础医学院、３．药学院，河南新乡 ４５３００３）收稿日期：２０２３－０２－２０，修回日期：２０２３－０４－１２基金项目：国家自然科学基金资助项目（ＮｏＵ２００４１１１，８１７０１８６２）；河南省教育厅高校重点科研项目（Ｎｏ１８Ａ３１００２４，１８Ａ３１００２５）；河南省生物精神病学重点实验室开放课题（ＮｏＺＤＳＹＳ２０１８００７）作者简介：刘 奔（１９９７－），男，硕士生，研究方向：药物成瘾机制，Ｅ ｍａｉｌ：２６９３１９８７７１＠ｑｑ．ｃｏｍ；赵 斌（１９７８－），男，博士，副教授，研究方向：药物成瘾机制，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｒｏｄｐｈｉｎｅ＠ｘｘｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ；魏 来（１９８２－），男，博士，副教授，研究方向：药物成瘾机制，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｗｅｉｌａｉ＠ｘｘｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０８０９６文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０７－１２６３－０８中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ３２２ ８１；Ｒ３３８ ２；Ｒ９７１ ２；Ｒ９７７ ６摘要：目的 研究腹外侧眶皮层（ｖｅｎｔｒｏｌａｔｅｒａｌｏｒｂｉｔａｌｃｏｒｔｅｘ，ＶＬＯ）内微量注射ｓｉｒｔｕｉｎ１（ＳＩＲＴ１）抑制剂ＥＸ５２７对吗啡诱导大鼠条件位置偏爱（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｐｌａｃｅｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，ＣＰＰ）的影响，并探讨ＣＲＥＢ／ＢＤＮＦ通路在其中的作用。
方法 应用脑立体定位术在大鼠双侧ＶＬＯ内留置导管，建立吗啡诱导大鼠ＣＰＰ模型，ｄ１为适应，ｄ２～４为前测，ｄ５～１４为条件性训练，隔日交替腹腔注射吗啡（１ｍＬ·ｋｇ－１，５ｍｇ·ｋｇ－１）或生理盐水（１ｍＬ·ｋｇ－１），提前３０ｍｉｎ通过导管向双侧ＶＬＯ内微量注射ＥＸ５２７（１μＬ，５ｇ·Ｌ－１）或ＤＭＳＯ（１％，１μＬ），ｄ１５为测试。
细胞沉默调节蛋白1 (SIRT1)活性比色法定量检测试剂盒说明书
保存 缓冲液（Reagent E）、 底物液（Reagent F）、 终止液（Reagent G）和 酶解液（Reagent H）在－20℃ 冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在 4℃冰箱里； 底物液（Reagent D）避免光照，有效保证 6 月
用户自备
1
磷酸盐缓冲溶液（PBS）：用于清洗细胞样品 15 毫升锥形离心管：用于样品处理的容器 1.5 毫升离心管：用于样品操作和保存的容器 （微型）台式离心机：用于细胞预处理 培养箱：用于反应物孵育 酶标板或比色皿：用于反应和比色的容器 酶标仪或分光光度仪：用于比色分析
（注意：样品须清澈） 5． 轻轻摇动 96 孔酶标板 30 秒 6． 放进 30℃培养箱里，孵育 2 分钟，避免光照 7． 分别加入 xx 微升 酶解液（Reagent H） 8． 轻轻摇动 96 孔酶标板 5 秒 9． 即刻放进酶标仪或转移到 100 微升比色皿，在分光光度仪里检测：间隔 5 分钟，读数 6 次（共 30 分钟）――
获得吸光读数 10．活性计算：
（1） 酶标仪检测
3
（2） 比色皿检测
注意事项
1． 本产品为 20 次操作，包括背景对照 2． 操作时，须戴手套 3． 系统操作过程中，背景测定只需 1 次 4． 样品须澄清，至关重要 5． 样品处理时，避免使用蛋白酶抑制剂、PMSF、烷基胺（alkyl amine）等 6． 孵育反应完成后即刻进行比色测定 7． 滤波器可以使用波长 400nm 替代 405nm 8． 测定值由低到高变化；酶动法测定可以持续 60 分钟 9． 测定值吸光读数越高，表明酶活性越高 10．比色测定后，比色皿须清洗彻底 11．待测样本为核蛋白样品，其蛋白浓度为 50 微克/20 微升；待测样本为细胞裂解悬液，其蛋白浓度为 200
SIRT1与神经细胞凋亡关系的研究进展
SIRT1与神经细胞凋亡关系的研究进展张艺; 邱珍; 夏中元【期刊名称】《《医学综述》》【年(卷),期】2019(025)015【总页数】6页(P3008-3013)【关键词】沉默信息调节因子1; 神经退行性疾病; 神经细胞凋亡; 沉默信息调节因子1/p53通路; 叉头蛋白转录因子O; 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α【作者】张艺; 邱珍; 夏中元【作者单位】武汉大学人民医院麻醉科武汉430060【正文语种】中文【中图分类】R329.2; Q255沉默信息调节因子1(silence information regu-lator 1，SIRT1)是哺乳动物沉默信息调节因子sir2(silent information regulator 2)超蛋白家族的成员之一，是依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的组蛋白去乙酰酶[1]。
随着世界人口老龄化的加重，神经退行性疾病的发病率逐年升高。
中国神经退行性疾病的发病率较高，其中最高的阿尔茨海默病预计到2020年、2030年、2040年及2050年患病人数将分别达到1450万、2075万、2687 万、3003万[2]。
神经系统疾病的发病机制尚未完全明确，目前仍缺乏有效的治疗手段。
阐明神经退行性疾病的发病机制是预防和治疗此类疾病的基础，对降低人口老龄化导致的医疗成本、提高老年人的生活质量具有重要意义。
SIRT1因具有限制能量代谢及延长寿命的作用而被研究人员所重视。
研究发现，SIRT1在神经元的发生、发展，正常神经功能维持以及神经元的保护中发挥重要作用[3]。
有研究表明，SIRT1通过调控神经细胞凋亡减轻神经退行性疾病造成的损伤[4]，神经细胞凋亡可能是研究神经退行性疾病的新方向。
现就SIRT1对神经细胞凋亡的影响及作用机制予以综述。
1 SIRT1概述1986年，Ivy等[5]从酵母菌中发现了一种与细胞寿命相关的基因，并将其命名为Sir2。
哺乳动物有7个sirtuins旁系同源物，分别是SIRT1～7，其中SIRT1与酵母Sir2同源性最高，是研究最多的sirtuin，并且在大脑中的表达水平较其他器官高[6-7]。
FoxO1的功能研究进展
FoxO1的功能研究进展陈小玲;黄志清;毛湘冰;吴秀群【摘要】FoxO proteins were unified nomenclature in 2000. Among them,FoxOl is one of the main member of the subfamily. This paper points out the structure and distribution of FoxOl, and highligts its biological function on biological metabolism, oxidative stress,differentiation of skeletal muscle cells and transformation of muscle fiber types in animals,and animal reproduction.%FoxO蛋白家族是2000年才公布统一命名的蛋白质家族,其中FoxO1是FoxO亚家族中的主要成员之一.作者在综述FoxO1的结构及其分布的基础上,重点探讨了其与生物代谢、氧化应激、动物肌细胞分化和肌纤维类型转化、动物繁殖等方面的生物学功能.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)009【总页数】4页(P90-93)【关键词】FoxO1;生物代谢;氧化应激;肌纤维发育;动物繁殖【作者】陈小玲;黄志清;毛湘冰;吴秀群【作者单位】四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养四川省重点实验室,四川雅安625014;四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养四川省重点实验室,四川雅安625014;四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养四川省重点实验室,四川雅安625014;四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养四川省重点实验室,四川雅安625014【正文语种】中文【中图分类】Q78Fox基因为Forkhead，来源于果蝇的“叉头”突变，于1990年首次发现，至今已发现了90多种Fox基因，在进化上高度保守，2000年正式统一命名的转录因子家族，广泛存在于从酵母到哺乳类的真核生物中。
细胞内氧化应激活性氧ROS初级荧光测定试剂盒产品说明书中文版主要用途
细胞内氧化应激活性氧（RoS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在细胞氧化条件下，产生荧光，来定量检测细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradica1：O2）＞过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxy1radica1：0H）、过氧化基（peroxy1radica1；R00'氢过氧自由基Chydroperoxy1;H00烷氧自由基（a1coxy!radica1）.氮氧基（niiricOxide；NO）、过氧亚硝基阴离子（PeroXyniIri1eanion；ONOO）次氯酸（hyρoch1orousacid；HoC1）、半酸自由基（semiquinoneradica1单线态氧气（Sing1etoxygen）等细胞内活性氧族（ReaciiveOxygenSpecies;ROS）的产生和增多，将导致细胞哀老或凋亡。
2,,7-二氯荧光乙酰乙酸盐（2'.7idich1orof1uOreSCeindiaCe1ate,DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。
一旦被过氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生荧光。
据此测定细胞内活性氧族的浓度。
产品内容清理液（Reagen1A）亳升染色液（Reagen1B）微升稀释液（Reagen1e）亳升保存液（Reagen1D）受升产品说明书1份保存方式保存染色液（Reagen1B）在一20七冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4C冰箱里，有效保证12月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMSI2052）：用于细胞操作所需的培养基15亳升锥形离心管：用于细胞操作的容器15亮升离心管：用于细胞染色的容器血细胞计数仪：用于细胞计数台式离心机：用于沉淀细胞细胞流式仪：用于细胞荧光分析（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光细胞荧光分光光度仪或衡标仪：用于定量检测荧光细胞实验步骤一、间接法实验开始前，将一20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（ReagentB）置入冰槽里融化，稀释液（ReagentC）放进37°C恒温水槽里预热。
sirt蛋白定位
sirt蛋白定位
sirt蛋白是一个广泛的蛋白家族，成员数量在不同的物种中有所不同。
在哺乳动物中，sirt蛋白家族有7个成员，分别命名为SIRT1-SIRT7。
这些蛋白具有不同的亚细胞定位和功能。
1. SIRT1：主要定位在细胞核和细胞质中，具有去乙酰化酶活性，参与细胞代谢、生长和衰老等过程。
2. SIRT2：主要定位在细胞质中，参与多种细胞过程，如细胞骨架的组装和细胞分裂等。
3. SIRT3：主要定位在线粒体中，参与氧化应激和能量代谢等过程。
4. SIRT4：主要定位在细胞质中，可能参与Akt等激酶的磷酸化调节。
5. SIRT5：主要定位在线粒体中，参与蛋白质的翻译后修饰和代谢等过程。
6. SIRT6：主要定位在细胞核中，参与DNA修复和炎症反应等过程。
7. SIRT7：主要定位在核仁中，参与rDNA的转录和核糖体的合成等过程。
SIRT1_对低氧诱导肺动脉内皮细胞损伤的保护作用及机制
SIRT1对低氧诱导肺动脉内皮细胞损伤的保护作用及机制龚琦1，陈婷1，周芝文2，周文胜21 湖南师范大学附属第一医院 湖南省人民医院，长沙 410000；2 湖南省人民医院 湖南师范大学附属第一医院摘要：目的 探讨沉默信息调节因子1相关酶（SIRT1）对低氧诱导肺动脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制。
方法 体外培养人肺动脉内皮细胞，将细胞分为8组：对照组、低氧组、SRT1720（SIRT1激动剂）组、EX -527（SIRT1抑制剂）组、低氧+ SRT1720组、低氧+ EX -527组、低氧+ TEMPOL （mitoROS 抑制剂）组和低氧+ NAC （ROS 抑制剂）组。
正常组细胞置于正常细胞培养箱中培养，低氧模型细胞置于3% O 2，5% CO 2低氧舱中处理24 h ，其余组分别予SRT1720、EX -527、TEMPOL 和NAC 处理24 h 后低氧处理。
DHE 和MitoSOX 染色法检测细胞内及线粒体活性氧水平，试剂盒检测细胞MDA 水平，免疫荧光法检测细胞沉默信息调节因子相关酶1（SIRT1）、核苷酸结合寡聚化片段结构域样受体蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase -1）、发动蛋白相关GTP 酶(Drp1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)水平，JC -1染色法检测细胞线粒体膜电位水平，ELISA 法检测细胞炎症因子IL -1β和IL -18水平，免疫印迹法检测细胞Gasdermin D （GSDMD ）蛋白水平。
结果 与对照组相比，低氧组肺动脉内皮细胞的SIRT1蛋白表达降低（P <0.01），胞内ROS 、mitoROS 、MDA 、NLRP3、Caspase -1、GSDMD 、Drp1蛋白表达和炎症因子IL -18和IL -1β水平均升高（P 均<0.01），线粒体膜电位（MMP ）水平、Mfn2蛋白表达均降低（P 均<0.01）。
去乙酰化酶SIRT1的表达及活性调控机制
去乙酰化酶SIRT1的表达及活性调控机制杨文嘉;王冬来;朱卫国【摘要】SIRT1是哺乳动物中重要的NAD+依赖性去乙酰化酶,参与许多重要的生理和病理过程,如衰老,细胞死亡和肿瘤发生.如何精确调节SIRT1的表达和活性对SIRT1执行其生物学功能至关重要.文章以基因表达的不同阶段为切入点,对调控SIRT1表达及活性的机制进行了论述.【期刊名称】《遗传》【年(卷),期】2010(032)010【总页数】6页(P1003-1008)【关键词】SIRT1;基因表达;活性;调控机制【作者】杨文嘉;王冬来;朱卫国【作者单位】北京大学基础医学院,北京,100191;北京大学基础医学院,北京,100191;北京大学基础医学院,北京,100191【正文语种】中文【中图分类】Q5哺乳动物 Sirtuin蛋白家族包含 7个成员(Sirtuin1～7), 它们均含有一个由约 275个氨基酸组成的保守的核心催化结构域, 依赖 NAD+作为辅酶,发挥去乙酰化酶或ADP-核糖基转移酶的活性, 参与许多重要生命过程的调控[1,2](表1)。
SIRT1是哺乳动物中第一个被发现的Sirtuin蛋白家族成员, 也是目前研究的最为深入的 Sirtuin蛋白。
SIRT1可以与染色质、许多重要的转录因子及转录共调控因子相互作用, 通过去乙酰化作用调节基因转录、染色体稳定性和靶蛋白活性, 进而参与代谢、衰老、肿瘤发生发展等一系列病理生理过程[3]。
作为一个重要的细胞内调控蛋白, SIRT1自身的表达和活性也受到精细的调控, 本文从SIRT1 的转录水平、转录后水平、SIRT1核-浆穿梭变化以及翻译后水平对其表达和活性的调控进行了综述。
p53是细胞中重要的肿瘤抑制因子, 当机体处在不同应激条件下, 具有广泛的抗增殖效应, 包括生长停滞、凋亡和细胞衰老。
研究发现, 在p53-/-小鼠脂肪组织细胞中, SIRT1 mRNA的基础表达量增高。
在其他多种组织细胞和p53−/−肿瘤细胞系中, 同样发现SIRT1转录水平增加的现象。
miRNA_在糖尿病肾病足细胞损伤中作用及其机制的研究进展
第 49 卷第 6 期2023年 11 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.6Nov.2023DOI：10.13481/j.1671‑587X.20230637miRNA在糖尿病肾病足细胞损伤中作用及其机制的研究进展Research progress in effect of miRNA on podocyte injury in diabetic nephropathy and its mechanism杨佳楠, 姜同连, 朱福彬, 汪婷, 周旭玲, 赵冰海, 李洪志（北华大学基础医学院吉林省肾脏病基因测序精准医疗创新中心，吉林吉林132013）［摘要］足细胞损伤在糖尿病肾病（DN）的发生发展过程中起重要作用，可导致肾小球滤过屏障功能障碍和蛋白尿的出现。
有关DN的综述报道多围绕肾脏组织纤维化、炎症反应和氧化应激等方面展开，而针对调控足细胞损伤的相关综述报道较少。
微小RNA（miRNA）作为重要的基因表达调控因子，可通过抑制或降解靶基因调控其表达。
部分miRNA表达水平变化与足细胞损伤有关联。
现结合近年来国内外相关研究进展，总结miRNA 的形成过程和生物学功能、DN足细胞损伤发生的可能机制及不同miRNA表达水平对DN足细胞损伤的影响，阐明其调控机制和作用途径，为DN的诊断、治疗和预防提供参考。
［关键词］微小RNA；糖尿病肾病；足细胞损伤；信号通路；肾小球［中图分类号］R587.2［文献标志码］A糖尿病是目前全球广泛流行的慢性病之一，已成为严重危害人类健康的全球性公共卫生问题。
糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）作为糖尿病最常见的微血管并发症，是引起终末期肾病的主要因素之一，其发病机制尚未完全阐明［1］。
既往研究［2］显示：炎症介质释放、细胞凋亡和氧化应激等可以通过破坏肾小球滤过屏障引起DN发生。
细胞沉默调节蛋白1SIRT1活性荧光定量检测试剂盒中文版
细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测试剂盒（中文版）主要用途细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针氨甲基香豆素标记人工合成的乙酰化p53多肽底物，经过SIRT1脱乙酰基后，被位点特异性氨基肽酶水解，释放黄色对硝基苯胺，即采用荧光法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或完全纯化酶样品中SIRT1的活性定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景人体组蛋白脱乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（class I）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（class II）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述两大种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。
种类III（class III）为NAD+辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，为曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型赖氨酸脱乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。
催化赖氨酸脱乙酰基反应，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基团转化产生的烟酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。
SIRT1位于细胞核内，与酵母Sir2同源性最高。
其功能在于调节p53活性和抑制细胞凋亡。
基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位点）多肽底物Ac-Arg—His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切离的功能，首先使用荧光染料氨甲基香豆素（aminomethylcoumarin；AMC）来标记乙酰化p53多肽底物，其次进行脱乙酰化，最后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈荧光的7-氨-4甲基香豆素（7-amino-4-methylcoumarin；AMC）（激发波长350-360nm；散发波长450-465nm），由此来定量测定沉默调节蛋白1的活性。
SIRT1_介导间歇性禁食改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织线粒体功能和炎症状态
DOI: 10.3969/j.issn.0253-9802.2023.04.005研究论著SIRT1介导间歇性禁食改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织线粒体功能和炎症状态邓小杰 王甜 徐芬 梁华【摘要】目的探讨间歇性禁食对高脂饮食诱导的肥胖小鼠白色脂肪组织线粒体功能和炎症状态的影响以及沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）在其中的作用。
方法将5~6周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为普通自由饮食组（CD组）、高脂自由饮食组（HFD组）和高脂间歇性禁食组（HFD-IF组，隔日禁食24 h），每组各5只，喂养12周。
用HE染色观察各组小鼠白色脂肪组织情况，并检测白色脂肪SIRT1、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、叉头转录因子1（FOXO1）、线粒体功能和炎症相关基因的表达情况。
在小鼠尾静脉注射腺相关病毒（AAV）-shSIRT1敲减SIRT1表达，分别给予小鼠高脂自由饮食和高脂间歇性禁食，检测上述指标。
结果 HE染色结果显示HFD-IF组脂肪细胞体积减小。
蛋白免疫印迹结果显示高脂自由饮食时脂肪组织SIRT1、p-AMPK、FOXO1蛋白表达均下调，间歇性禁食后均上调（P均< 0.05）。
定量PCR结果显示HFD组线粒体功能基因Tfam、Nrf1、Pgc-1a表达下调（P均< 0.001），炎症基因TNF-α、单核细胞趋化蛋白1、生长因子样模体黏液样激素样受体表达均上调（P均< 0.01），间歇性禁食后线粒体功能相关基因均上调（P均< 0.05），炎症相关基因均下调（P均< 0.05）。
敲减SIRT1后，HFD-IF组的上述指标上调或下降的趋势均有所减弱甚至消失（P均< 0.05）。
结论 SIRT1通过改善小鼠内脏白色脂肪组织线粒体功能和炎症状态从而介导间歇性禁食改善高脂喂养诱导的肥胖。
【关键词】间歇性禁食；沉默信息调节因子2相关酶1；高脂饮食；白色脂肪SIRT1-mediated intermittent fasting improves adipose tissue mitochondrial function and inflammation in high-fat diet-induced obese mice Deng Xiaojie△， Wang Tian， Xu Fen， Liang Hua.△Department of Endocrinology and Metabolism， the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510630，ChinaCorresponding author， Liang Hua， E-mail:******************【Abstract】Objective To investigate the role of SIRT1 in the e ff ect of intermittent fasting on mitochondrial function and inflammation in white adipose tissue（WAT） of obese mice induced by high-fat diet. Methods Male C57BL/6 mice aged 5-6 weeks were randomly divided into the control diet （CD） group （n = 5）， high‐fat diet （HFD） group （n = 5） and high-fat diet intermittent fasting （HFD-IF， alternate-day fasting 24 h） group （n = 5） and fed for 12 weeks. The pathological changes of WAT were observed by HE staining. The expression levels of SIRT1， p-AMPK， FOXO1 and mitochondrial function， inflammation-related genes in WAT of each group were detected. AAV-shSIRT1 virus was delivered by tail-vein injection into mice to knockdown SIRT1. HFD and HFD-IF were given. The parameters above were determined. Results HE staining indicated that the adipose cell volume was decreased in the HFD-IF group. Western blot showed that the expression levels of SIRT1， p-AMPK and FOXO1 in adipose tissues were signi fi cantly down-regulated in the HFD mice （all P < 0.05）， which were signi fi cantly up-regulated after intermittent fasting （all P < 0.05）. qPCR revealed that the expression levels of mitochondrial functional genes， including Tfam， Nrf1 and Pgc-1a were dramatically down-regulated in the HFD group （all P < 0.001）， whereas those of inflammatory markers， such as TNF-α，MCP-1 and F4/80， was signi fi cantly up-regulated （all P < 0.01）. After intermittent fasting， the expression levels of genes related to mitochondrial function were up-regulated （all P < 0.05）， whereas those of inflammatory markers were down-regulated （all P < 0.05）. After knockdown of SIRT1， the trend of up-regulating or down-regulating the expression levels of these parameters was weakened or even absent in the HFD-IF group （all P < 0.05）. Conclusion SIRT1 mediates intermittent fasting in improving high-fat diet-induced obesity via ameliorating adipose tissue mitochondrial function and inflammation.【Key words】 Intermittent fasting； SIRT1； High-fat diet； White adipose tissue基金项目：广东省自然科学基金（2020A1515010226，2022A1515012577）作者单位：510630 广州，中山大学附属第三医院内分泌与代谢病学科（邓小杰，王甜，徐芬，梁华）；528399 顺德，南方医科大学顺德医院（佛山市顺德区第一人民医院）内分泌与代谢科（梁华）通信作者，梁华，E-mail:******************肥胖是全球重大的公共健康问题［1］。
SIRT2在小鼠1-细胞期受精卵中的表达和定位研究
SIRT2在小鼠1-细胞期受精卵中的表达和定位研究庄妍;任丽芳;韩迪;孟峻【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2024(49)2【摘要】目的:探讨沉默信息调节蛋白2(SIRT2)在小鼠1-细胞期受精卵的表达和定位。
方法:利用qRT-PCR、Western blotting分别检测SIRT2在小鼠1-细胞期受精卵发育全过程中mRNA和蛋白表达谱;采用细胞免疫荧光法观察SIRT2和α-tubulin的共定位情况。
结果:小鼠1-细胞期受精卵SIRT2 mRNA和蛋白表达变化趋势一致,均由G 1向G 2期过渡时表达水平升高;由G 2期向M期过渡时表达水平下降(P<0.05)。
在G 2期向M期过渡过程中,SIRT2的定位由细胞质向细胞核转移,于M期中期进入细胞核并定位于纺锤体,在M期后期重新定位于细胞皮质。
结论:SIRT2蛋白在小鼠1-细胞期受精卵中的表达呈细胞周期时相依赖性,在1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂间期(G 1、S、G 2)中细胞质内表达增加,积累的SIRT2在某种条件下进入细胞核调节纺锤体微管动力学,在G 2/M过渡期发挥作用。
【总页数】5页(P152-156)【作者】庄妍;任丽芳;韩迪;孟峻【作者单位】内蒙古医科大学第一临床医学院;内蒙古自治区人民医院检验科;内蒙古医科大学附属医院检验科【正文语种】中文【中图分类】Q2【相关文献】1.蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵中的表达及其定位2.CDC14B在小鼠1-细胞期受精卵各细胞周期的动态表达及其定位3.蛋白激酶B在小鼠1-细胞期受精卵中活性及表达变化4.Wee1在小鼠1-细胞期受精卵中的表达和定位5.血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中的表达水平及其亚细胞定位因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测试剂盒（中文版）
主要用途
细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针氨甲基香豆素标记人工合成的乙酰化p53多肽底物，经过SIRT1脱乙酰基后，被位点特异性氨基肽酶水解，释放黄色对硝基苯胺，即采用荧光法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或完全纯化酶样品中SIRT1的活性定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
人体组蛋白脱乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（class I）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（class II）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述两大种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。
种类III（class III）为NAD+辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，为曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型赖氨酸脱乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。
催化赖氨酸脱乙酰基反应，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基团转化产生的烟酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。
SIRT1位于细胞核内，与酵母Sir2同源性最高。
其功能在于调节p53活性和抑制细胞凋亡。
基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位点）多肽底物Ac-Arg—His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切离的功能，首先使用荧光染料氨甲基香豆素（aminomethylcoumarin；AMC）来标记乙酰化p53多肽底物，其次进行脱乙酰化，最后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈荧光的7-氨-4甲基香豆素（7-amino-4-methylcoumarin；AMC）（激发波长350-360nm；散发波长450-465nm），由此来定量测定沉默调节蛋白1的活性。
其反应系统为：
产品内容
裂解液（Reagent A）毫升
分离液（Reagent B）毫升
清理液（Reagent C）毫升
萃取液（Reagent D）毫升
缓冲液（Reagent E）毫升
底物液（Reagent F）微升
终止液（Reagent G）微升
酶解液（Reagent H）微升
补充液（Reagent I）微升
标准液（Reagent J）微升
产品说明书1份
保存方式
保存缓冲液（Reagent E）、底物液（Reagent F）、终止液（Reagent G）、酶解液（Reagent H）和标准液（Reagent J）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里；底物液（Reagent D）和标准液（Reagent J）避免光照，有效保证6月
用户自备
磷酸盐缓冲溶液（PBS）：用于清洗细胞样品
15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
（微型）台式离心机：用于细胞预处理
培养箱：用于反应物孵育
酶标板或比色皿：用于反应和荧光分析的容器
荧光酶标仪或荧光分光光度仪：用于荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。
然后进行下列操作。
一、样品准备
1．准备好75cm2细胞培养瓶或100mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 107细胞）
2．小心抽去培养液
3．小心加入10毫升用户自备的磷酸盐缓冲溶液（PBS），覆盖生长表面
4．小心抽去清理液
5．使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：避免使用胰酶消化）
6．加入xx毫升裂解液（Reagent A），混匀细胞
7．移入到预冷的15毫升锥形离心管
8．强力涡旋震荡10秒
9．置于冰槽里孵育15分钟
10．加入xx毫升预冷的分离液（Reagent B），混匀
11．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1300g
12．小心抽去上清液
13．加入xx毫升预冷的清理液（Reagent C）
14．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1300g
15．小心抽去上清液
16．小心加入xx微升预冷的萃取液（Reagent D），混匀
17．转移到新的预冷的1.5毫升离心管
18．超声处理30秒
19．置于冰槽里孵育30分钟
20．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）21．小心移取上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
22．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HL30030.1）23．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、测定准备
1．准备好待测样品（例如核蛋白或纯化酶样品等），置于冰槽里
2．设定好荧光酶标仪或荧光分光光度仪（温度为30℃）：激发波长350-360nm；散发波长450-465nm 3．缓冲液（Reagent E）置于室温下均衡温度
4．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
5．分别加入xx微升缓冲液（Reagent E）到1至5号管
6．移取xx微升标准液（Reagent J）到1号管，混匀
7．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent J）到2号管，混匀
8．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent J）到3号管，混匀
9．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent J）到4号管，混匀
10．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
管号缓冲液（Reagent E）标准液（Reagent J）标准氨甲基香豆素浓度
1 xx微升xx微升xx微摩尔/升
2 xx微升xx微升1号管xx微摩尔/升
3 xx微升xx微升2号管xx微摩尔/升
4 xx微升xx微升3号管xx微摩尔/升
5 xx微升0 0
三、活性测定
1．在96孔酶标板上做好相应标记：标准样品1至5管
2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent E）到相应孔中
3．分别加入xx微升上述配制的标准液（Reagent J）
4．轻轻摇动96孔酶标板30秒
5．即刻放进荧光酶标仪或转移到100微升比色皿，在荧光分光光度仪里检测：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）读数
6．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准氨甲基香豆素浓度（微摩尔/升）
四、活性测定
1．在96孔酶标板上做好相应标记：背景空对照和待测样品
2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent E）到相应孔中
3．分别加入xx微升底物液（Reagent F）
4．分别加入xx微升补充液（Reagent I）或待测样品（50微克核蛋白或200微克细胞裂解萃取液总蛋白）（注意：样品须清澈）
5．轻轻摇动96孔酶标板30秒
6．放进30℃培养箱里，孵育60分钟，避免光照
7．分别加入xx微升终止液（Reagent G）
8．分别加入xx微升酶解液（Reagent H）
9．轻轻摇动96孔酶标板30秒
10．在30℃培养箱里，孵育30分钟
11．即刻放进荧光酶标仪或转移到100微升比色皿，在荧光分光光度仪里检测：获得相对荧光单位（Relative
Fluorescence Unit；RFU）读数
12．根据标准曲线获得样品对应氨甲基香豆素浓度（微摩尔/升）
四、计算样品活性
方法一：RFU直接法
方法二：标准氨甲基香豆素浓度测算法
注意事项
1．本产品为20次操作
2．操作时，须戴手套
3．系统操作过程中，标准测定只需1次
4．样品须澄清，至关重要
5．样品处理时，避免使用蛋白酶抑制剂、PMSF、烷基胺（alkyl amine）等
6．孵育反应完成后即刻进行荧光测定
7．测定值由低到高变化；测定持续60分钟
8．测定值荧光读数越高，表明酶活性越高
9．荧光测定后，比色皿须清洗彻底
10．待测样本为核蛋白样品，其蛋白浓度为50微克/20微升；待测样本为细胞裂解悬液，其蛋白浓度为200微克/20微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒HL30030.1）
11．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
12．样品活性计算根据用户要求，选择直接法或测算法；如果选择直接法，可以不必测定标准样品13．沉默调节蛋白1单位活性定义为：在30℃，pH 8.0条件下，每分钟内能够释放1纳摩尔氨甲基香豆素所需的酶量作为一个活性单位
14．本公司提供系列组蛋白脱乙酰基酶检测试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感。