氯霉素ELISA检测试剂盒说明书模板
氯霉素检验方法 文档
氯霉素检验方法1. 试剂与材料1.1氯霉素试剂盒，德国r-Biopharm公司。
1.2乙酸乙酯，分析纯。
1.3双蒸水。
2.仪器与设备2.1微孔板酶标仪，MuLtisKan Ascent,芬兰Labsystens公司。
2.2 8道移液器，50-300uL。
2.3 单道移液器，5-50ul,20-200ml,100-1000ul,1-5ml。
2.4 离心机。
2.5 旋转蒸发器，配真空冷却系统。
2.6 液体混匀器。
3.样品前处理3.1样品提取称取约2g（准确至0.01g）蜂蜜于20ml具塞试管中，加入用4ml双蒸水溶解，再加4ml乙酸乙酯，在混匀器上混匀10分钟。
将上述样液转至10ml离心管中，以4000转/分离心12分钟。
3.2净化从上述离心管中移取1ml上层的乙酸乙酯（相当于0.5样品）至另一试管中，60℃以下减压旋转蒸干，残留物用0.5ml缓冲液1溶液，此为样品溶液，供酶标仪测定。
4.测定4.1 酶标仪测定条件酶标仪测定波长为450nm。
4.2 酶标测定（以下操作在20-24℃室温条件下进行）。
4.2.1测定之前的准备工作将氯霉素酶试剂盒附带的所有试剂回升至室温20-24℃。
其中氯霉素酶标记物、氯霉素抗体用缓冲液1以1；11的比例稀释，在吸取浓缩液之前，要仔细振摇使之充分混匀。
4.2.2 标准应用的制备；50uL标准浓缩液（氯霉素试剂盒附带）用450uL缓冲液1稀释并混合均匀用玻璃不能用塑料瓶。
标准应用液1：50uL标准浓缩液1用450uL缓冲液1稀释oppt标准应用液2：50uL标准浓缩液2用450uL缓冲液1稀释50ppt标准应用液3：50uL标准浓缩液3用450uL缓冲液1稀释150ppt标准应用液4：50uL标准浓缩液4用450uL缓冲液1稀释450 ppt标准应用液5：50uL标准浓缩液5用450uL缓冲液1稀释1350ppt标准应用液6：50uL标准浓缩液6用450uL缓冲液1稀释4050ppt4.2.3.测定程序：取出实验需要数量的微孔板条，按顺序加入50ul标准或处理好的样品到各自的微孔中，加入50ul稀释了的酶标记物到微孔底部，加入50ul稀释了的抗体溶液到每一个微孔中充分混合（轻轻振荡板并在桌面上做圆周运动以混均）用薄膜覆盖板上在室温孵育2小时（注意在加入抗体的过程中移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体，避免交叉污染）。
氯霉素说明书(简化版)
RIDASCREEN® Chloramphenicol酶联免疫法定量检测氯霉素摘要RIDASCREEN®Chloramphenicol（编号：R1505）竞争酶标免疫分析法定量检测尿液、血清的氯霉素。
试剂盒中包含有酶联免疫试验所需的所有试剂，包括标准溶液。
试剂盒足够进行96次检测（包括标准）。
定量检测需要微孔板酶标仪。
检测限：尿液、血清………………………………………………..………75ppt回收率：尿液、血清 (80)特异性：RIDASCREEN®Chloramphenicol检测的特异性，是通过分析相应抗生素的交叉反应性而得到的。
Chloramphenicol..................................................................100 %Chloramphenicol base ......................................................... 75 %Thiamphenicol.................................................................. < 0.1 %1. 用途RIDASCREEN®Chloramphenicol竞争酶标免疫分析法定量检测牛奶，奶粉，蜂蜜，虾，肉，鱼粉和鸡蛋中的氯霉素。
2. 概要氯霉素是一种广谱抗生素，具有很好的抗菌效果，常用于畜牧业生产中，然而，氯霉素会造成人的再生障碍性贫血，而且诱发浓度还没有确定，所以目前已经禁止在动物及食品中使用氯霉素。
3. 测定原理测定的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对氯霉素的抗体，加入氯霉素标准或样品溶液和氯霉素酶标记物，游离的氯霉素与氯霉素酶标记物竞争氯霉素抗体（竞争性酶联免疫法）。
没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。
氯霉素检测试剂盒说明书
氯霉素检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3001一、概要:氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素，对畜禽疾病控制和治疗有重要功效。
但由于氯霉素存在严重的副作用，可抑制人体骨髓的造血功能，从而引起再生障碍性贫血，粒细胞缺乏等疾病，欧美等发达国家已相继禁止使用于动物饲料中。
本公司研发的氯霉素(Chloramphenicol)檢測試劑盒是應用抗原，抗体特异性的免疫学原理而建立的一种敏感，特异，简便及快速的檢測产品。
主要應用於檢測蜂蜜、蛋类、牛奶、奶粉、水產品、动物组织(肌肉、肝臟等)、饲料、血清、血浆及尿液樣本中存在的氯霉素。
二、检测原理:本试剂盒利用竞争酶联免疫方法，预先在微孔中包被羊抗兔抗体，实验时先后加入氯霉素标准品或待测样本，氯霉素酶标抗原和兔抗氯霉素抗体。
经过室温温育，反应液中的兔抗氯霉素抗体与微孔板上的羊抗兔抗体结合，待测样品中的抗原与氯霉素酶标抗原竞争微孔板上的兔抗氯霉素抗体。
洗涤后，没有与抗体结合的待测样品中的抗原或酶标抗原被洗去，再加入反应底物，结合的酶标抗原的酶将底物转化为蓝色产物，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色。
反应完成后，样品中氯霉素含量越多，反应呈色就越浅；反之，样品中氯霉素含量越少，则呈色越深。
利用标准曲线可计算出样品中氯霉素含量。
三、试剂盒提供试剂:1.羊抗兔抗体包被的微孔板:96孔。
2.氯霉素参考标准品:0，0.025，0.05，0.10，0.25，0.75ppb (ng/ml);1.5ml/瓶(黄色)，一套共6瓶。
3.氯霉素酶标抗原试剂(1X):7ml/瓶。
4.兔抗氯霉素抗体:7ml/瓶。
5.样品稀释液：100ml/瓶。
6.显色剂/底物：11ml/瓶。
7.反应终止液：11ml/瓶。
8.洗涤液(20X)：50ml/瓶，使用前稀释20倍。
四、实验需要但试剂盒不提供的试剂和仪器:1.试剂∙乙酸乙酯∙正己烷或正庚烷2.仪器∙均质机(Ultra-turrax)∙微孔板酶标仪∙振荡器∙离心机∙氮气吹干仪或旋转蒸发器∙20µl,50µl,100µl,200µl,及1ml 移液器五、待测样品处理方法:1.蜂蜜a)称取2g 样品加入4ml 蒸馏水溶解均匀。
0.3ppb氯霉素检测卡
氯霉素快速检测试纸卡使用说明书
规格：40份/盒
用途：检测牛奶中氯霉素的残留。
试纸条的存放：
1、试纸卡应于4~30°密封、干燥、避光存放。
2、有效期为6个月
检测原理：
当样品溶液滴入样品孔后，样品溶液中的氯霉素与金标抗体相结合，进而封闭金标抗体上氯霉素的抗原结合点，阻止金标抗体与纤维素膜上氯霉素偶联物结合，使之显色较弱，甚至不显色；反之，如样品溶液中没有氯霉素，则不能阻止金标抗体与纤维素膜上的氯霉素偶联物结合，从而显色较强。
在试纸卡的中央判读区喷有2条线，上面一条为对照线（C线），下面一条为测试线（T线）。
若样品中氯霉素的浓度大于检测限时，则T线显色比C线浅很多或完全不显色。
产品标准配置：
1、氯霉素快速检测试纸卡40份
2、使用说明书1份
3、缓冲液2瓶
4、离心管3个
样品液制备：
取一定量的液态奶（200vl）于1.5ml离心管中，再加入相同体积（200vl）的缓冲液做2倍稀释，混匀后待检。
操作步骤：
1、取出所需试纸卡，多余试纸卡放在干燥避光处保存：
2、有移液器取样80vl（或用滴管取
3、4滴）滴入样品孔中：
3、15分钟开始观察结果，30分钟内结果有效。
检测限：
牛奶检测灵敏度：0.3ppb
注意事项：
1.试纸条在室温下打开后请立即使用。
2.出现阳性结果建议用本试纸条复查一次。
3. 本产品用于大量样本的快速筛查。
由于生物试验存在人为及不可预知的影响因素，呗试纸卡得到的检测结果仅为参考.。
氯霉素免疫亲和纯化富集柱说明书
氯霉素免疫亲和纯化富集柱说明书用途 此免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的氯霉素，从而对氯霉素样品起到特异性纯化和富集的作用。
样品过柱后的洗脱液既可结合ELISA测试盒或胶体金试纸条进行检测，也可联合液相色谱进行精确定量。
亲和色谱柱的使用可以改善信噪比，提高检测方法的准确度。
富集原理亲和柱富集的原理是抗原抗体的特异性反应。
样品经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过氯霉素免疫亲和柱，样品中的氯霉素与偶联在琼脂糖珠上的抗体结合，洗涤掉杂质后，根据后续检测需要选用洗脱液洗脱，收集的洗脱液可以用于仪器分析，或用于免疫学检测方法检测。
产品包装组成1.氯霉素免疫亲和纯化富集柱10支2.10ml注射器1支3.说明书1份4.洗脱液A(供仪器分析用）10mL5.洗脱液B（供ELSIA/胶体金检测用）10mL6.10×PBS 50mL7.10×PBST 5mL8.饱和Tris-base溶液 5mL注意事项1 亲和柱在不使用时，需放置在于2～8℃保存，并确保在有效期之前使用。
2 柱子的填料应保持湿润，在保存、清洗、上样、洗脱的过程中不能出现填料干燥的情况。
3在操作中，每次需使亲和柱内上一步的液体全部滴净方能进入下一步操作，填料里不应有气泡4 实验完后需对所用材料、容器、设备做适当处理。
样品处理组织样品：将样品捣碎，取5.0 g（精确到1mg）于50 mL离心管中并加入20 mL乙酸乙酯，充分混匀后放入离心机5000 r/min离心10 min，取10 mL上清液于45℃下氮气吹干，残留物用10 mL的10%甲醇水溶解后,于4000 r/min离心5 min，并用定性滤纸过滤。
收集滤液，用饱和tris-bsae调节PH=7.0±0.5，待净化。
操作程序1.自冰箱取出免疫亲和柱，在室温（22～25℃）平衡10 min，将上方塞和下方塞子取出。
上方接上已经去掉活塞的注射器。
2.清洗1：将亲和柱固定好，往注射器内依次加入1 mL PBST、2 mL PBS、200 μL 洗脱液（A或B）、1 mL PBST、大约5 mL PBS；每次加完清洗液后套上注射器活塞以控制流速为1滴/2s，滴净后再加入下一个清洗液；最后流出的PBS的 PH应为7±0.5，若尚未达此PH值，适当增加PBS量来清洗。
氯霉素胶体金试纸卡说明书(组织)
氯霉素胶体金检测试纸卡（组织）使用说明书【产品名称】氯霉素胶体金检测试纸卡（组织）【产品用途】本产品用于快速检测动物组织（含水产品、畜禽）、蜂蜜中的氯霉素残留，整个检测过程只需要10分钟，适用于各类企业及检测机构定性或半定量筛查。
【产品性能】试纸条灵敏度：1 ng/mL【产品组成】1、氯霉素胶体金检测试纸卡（40份/盒）2、5×样品处理液30ml3、产品说明书1份【检验原理】本产品应用竞争抑制胶体金免疫层析的原理，将氯霉素抗原先固定于硝酸纤维素膜的测试区，根据金标垫上的金标抗体迁移到该测试区后，能被T线捕获的多少来定性判断待测样品中氯霉素的含量。
【样品处理方法】根据样品数量将5×浓缩样品处理液用超纯水（或纯净水）稀释至1×（例：1mL 5×样品处理液加入4mL超纯水）。
1.鸡肉、猪肉、鱼肉：法一：适用于现场粗测，备用工具（普通天平、剪刀、刻度离心管）（1）称取约1g瘦肉组织，用剪刀剪成直径约2～3mm的肉丁。
（2）根据刻度预先在离心管中加入约3mL 1×样品稀释液，将肉丁转移至离心管中，上下用力颠倒震摇20次。
（3）用一次性滴管吸取液体检测。
法二：适用于实验室、质量监督机构，备用工具（电子天平、均质器、移液器、离心管）（1）取待测样本的瘦肉部位，尽量剔除脂肪和结缔组织，将组织剪碎（直径约1cm）；（2）称取10 g 组织用均质器均质至呈乳白色糊状物；（3）称取1 g均质样品于5mL离心管内，加入3mL 1×样品处理液，上下用力颠倒震摇20次；（4）静置5min或3000r/min离心5min；（5）用一次性滴管吸取上层液体检测。
2．蜂蜜取0.3mL蜂蜜加入2.7mL 1×样品处理液，充分混匀、直接用一次性滴管吸取液体检测。
【使用步骤】1、在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将试纸卡和待检样本溶液恢复至室温。
2、从原包装袋中取出试纸卡，打开后请在一个小时内尽快地使用。
氯霉素酶联免疫检测试剂盒(组织、生乳、蜂蜜、饲料、蛋)
氯霉素酶联免疫检测试剂盒说明书【反应原理】氯霉素酶联免疫检测试剂盒，主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的，换句话说，就是利用酶标记物与样品中的氯霉素与微孔中的抗体进行竞争反应。
在整个反应当中，如果样品中的氯霉素残留的越多，相对地就会竞争反应越多的酶标记物，使得能结合上抗体的酶标记物相对地减少，用TMB底物显色，样品中的氯霉素含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出氯霉素含量。
【试剂盒组份】1、酶标板：8孔/条，12条/板2、氯霉素标准溶液(1.5 mL / 瓶)：0 ppb、0.025 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.6 ppb ; 10ppb3、10倍浓缩样品稀释液………………………………30 mL4、10倍浓缩清洗液……………………………………30 mL5、氯霉素酶标记物……………………………………8 mL6、显色液………………………………………………12 mL7、反应终止液…………………………………………12 mL【试剂盒技术指标】试剂盒灵敏度：0.025ppb样本检测下限：生乳…………………………………………………0.1 ppb蜂蜜…………………………………………………0.1 ppb蜂王浆………………………………………………0.1 ppb血清………………………………………………0.025 ppb 鱼虾、蟹、鸡肉、猪肉……………………………………0.025 ppb 饲料…………………………………………………0.25 ppb 蛋…………………………………………………0.025 ppb交叉反应率：氯霉素………………………………………………100%左旋霉素…………………………………………… 1.4% 庆大霉素……………………………………………<0.1% 甲砜霉素…………………………………………… 3.1% 四环素………………………………………………<0.1% 青霉素………………………………………………<0.1% 磺胺甲嘧啶…………………………………………<0.1%回收率：生乳………………………………………70~130%蜂蜜………………………………………70~130%蜂王浆……………………………………70~130%鱼、虾、蟹、乌贼、鸡及猪肉……………70~130%饲料………………………………………70~130%血清………………………………………70~130%蛋………………………………………70~130%批间、批内变异系数：CV≤10%【所需仪器和试剂】所需仪器：酶标仪、离心机、均质机、微量移液器(单道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl)所需试剂：乙酸乙酯、正己烷、0.5 N 盐酸溶液、0.5 N 氢氧化钠溶液【注意事项】1、使用前请先将试剂盒回温至室温(置于室温60分钟以上)，各溶液皆摇匀后方可使用。
氯霉素快速检测试剂条说明书20140311
氯霉素快速检测试纸条说明书
【产品简介】
本产品用于快速检测生鲜乳中的氯霉素药物残留，操作简单快速，整个检测过程只需要15分钟左右，灵敏度为0.1ppb。
【产品组成】
氯霉素快速检测试纸条（48份/盒）
【操作步骤】
1. 撕开包装，取出金标微孔。
2. 用配套的吸管吸取适量奶样，将吸管垂直在微孔上方，加入5滴奶样在微孔中，并将吸管中的剩余奶样弃去。
2分钟后用吸管吹打样品数次使微孔中的试剂和样品充分混匀，再等2分钟后，将试纸条划有箭头线的一端插入微孔，箭头方向朝下。
3. 等待8～10分钟后判读结果。
【结果判断】
阴性（—）：T线（检测线，靠近加样孔一端）显色比C线（对照线）深或一样深，表明样品中氯霉素浓度低于检出限或者无氯霉素残留。
阳性（+）：T线比C线浅，表明样品中氯霉素浓度高于检出限。
T线比C线越浅，表明样品中氯霉素浓度越高。
无效：C线未出现，可能操作不当或试剂条已失效，应用新的试纸条，参照说明说方法重新测试。
【注意事项】
试纸条一次性使用；
请勿触摸试纸条中央的白色膜面；
切勿重复使用配备的滴管，以免交叉污染；
【特异性】
本产品与喹诺酮、四环素、链霉素、磺胺类等药物无交叉反应。
【贮存条件】
4℃～30℃避光保存，切勿冷冻。
【有效期】
12个月。
【生产日期及批号】
详见包装袋。
上海圣蓝生物技术有限公司
地址：上海市沪宜公路1868弄13号102室。
氯霉素残留免疫胶体金快速检测试剂板概要
氯霉素残留免疫胶体金快速检测试剂板使用说明书（产品编号: CAP－216h3）本产品用于野外快速检测原蜜中的氯霉素残留，整个检测过程只需要30分钟左右，灵敏度为0.3μg/kg （ 0.3ppb ）。
本说明书中涉及的样本处理方法不适用于浓缩蜜。
【产品组成】氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板（20个/盒）【配套试剂】CAP专用PBST缓冲液（1瓶/盒）【配套器具】滴管（80个/盒）15ml刻度离心管（20个/盒）5ml刻度冷冻管（20个/盒）注：客户可根据自身需要进行删减。
【需使用但未提供试剂、器具】乙酸乙酯（分析纯）、电吹风（850W左右即可，鼓风温度不宜过高）、试管夹【样品处理】无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀；有结晶的样品，在密闭情况下，置于60-80℃的热水中温浴，待样品全部融化后搅匀。
【配套简单工具的样品处理】♦于15ml离心管中加入蜂蜜至“3ml”标志线以上，切勿超过“5ml”标志线；♦使用滴管加入8ml（参照刻度）乙酸乙酯于离心管中；♦剧烈振荡8min后，静置至上层有机溶剂澄清，用滴管转移5ml（参照刻度）上清液于5ml刻度冷冻管中；♦用电吹风吹干溶剂，使用滴管垂直滴加5滴CAP专用PBST缓冲液于冷冻管中，溶解残留物，待检。
【配套精准工具的样品处理】采用该处理方法还需配套如下的器具：天平、20μl～200μl定量可调移液枪＋枪头、移液管、吸耳球。
♦称取4g蜂蜜于15ml刻度离心管中；♦再加入8ml乙酸乙酯于离心管中；♦剧烈振荡8min后，静置至上层有机溶剂澄清，转移5ml 上清液于5ml刻度冷冻管中，用电吹风吹干；♦吸取160μl CAP专用PBST缓冲液于冷冻管中，振荡溶解残留物，待检。
【使用步骤】在进行测试前先完整阅读使用说明书。
♦从原包装袋中取出试剂板，打开后请在一个小时内尽快地使用。
♦用滴管吸取待检样品溶液，滴加3滴于加样孔中，加样同时开始计时；♦结果应在3～5分钟读取，其他时间判读无效；读取结果时，试剂板应如上图所示摆放方式置于观察者正面。
氯霉素(CAP)快速检测试剂盒
氯霉素氯霉素（（CAP CAP））酶联免疫酶联免疫分析分析分析（（ELISA ）试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1 使用目的使用目的：：本试剂盒用于水产、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉）中氯霉素（CAP ）残留的定量检测。
2 实验原理本试剂盒采用竞争ELISA 方法，在微孔板包被有氯霉素（CAP ）偶联抗原，加入氯霉素（CAP ）标准品或样品，游离氯霉素（CAP ）与微孔条上预包被的氯霉素（CAP ）偶联抗原互相竞争抗氯霉素（CAP ）抗体酶标记物，用TMB 底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm 波长下进行检测，吸光值与样品中氯霉素（CAP ）含量成反比，通过标准曲线计算样品中氯霉素（CAP ）的含量。
3 试剂盒组成3.1 预包被的氯霉素（CAP ）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2 氯霉素（CAP ）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml3.3抗氯霉素（CAP ）抗体酶结合物：1瓶（6ml ）。
3.4显色液A ：1瓶（6ml ）。
3.5显色液B ：1瓶（6ml ）。
3.6终止液：1瓶（6ml ），2M 硫酸。
3.7样本稀释液：1瓶（10×, 6ml ），用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml ），用于洗板。
3.9说明书一份。
4 需要而未提供的材料4.1 设备4.1.1波长450nm 酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2 试剂4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5 贮存5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存6 注意事项6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
氯霉素免疫胶体金速测盒
使用说明书 宁波美成生物科技有限公司
撕开氯霉素免疫胶体金快速检测试剂条包装，取出金标微孔。（实验 环境的温度必须20度以上。冷冻过的原奶，明显出现颗粒的，容易导 致跑板不完全，此时必须使用加热器或者离心取中间层样本进行检测） 用移液枪取0.2ml生乳金标微孔中，2分钟后用滴管吹打生乳，使微孔 中的金和生乳充分混匀，（必须使孔中红色物质充分溶解，一般为2 分钟，不充分溶解会使检测结果显示假阳性，吹打不 少于10下），将试剂条箭头指向的一端插到微孔中。 8-10分钟后判读结果
试剂条一次性使用
不要使用过期试剂条，废弃物应妥善处理 请勿触摸试剂条中央的白色膜面
切勿重复使用配备的滴管，以免交叉污染
切勿食用配备的试剂 若需直接检测标准品，我方可提供配置液 试验遇到的任何问题，请与供应商联系
氯霉素检测试剂盒
氯霉素检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）原理及用途本试剂盒采用间接竞争方法检测水产组织、畜禽组织、肝脏、蛋类、蜂蜜、牛奶及饲料等样本中的氯霉素药物（，），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。
检测时，加入标准品或样本溶液，样本中的氯霉素药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗氯霉素药物抗体，加入酶标记物后，用底物显色，样本吸光度值与其所含氯霉素药物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中氯霉素药物的残留量。
矚慫润厲钐瘗睞枥庑赖賃軔。
技术指标试剂盒灵敏度：()反应模式：℃，～～检测下限：组织、肝脏、蜂蜜、牛奶……………蛋类……………………………………尿液、血清、肠衣、饲料、奶粉……交叉反应率：氯霉素…………………………………甲砜霉素、氟甲砜霉素………………＜样本回收率：组织、肝脏……………………………±蜂蜜、肠衣……………………………±牛奶、饲料……………………………±尿液、血清……………………………±试剂盒组成酶标板……………………………孔标准液：各、、、、、高标准液（红盖）：………酶标记物（红盖）…………………抗体工作液（蓝盖）………………底物液（白盖）……………………底物液（黑盖）……………………终止液（黄盖）………………………浓缩洗涤液（白盖）……………复溶液（黄盖）…………………说明书………………………………份需要的器材和试剂仪器：酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量）聞創沟燴鐺險爱氇谴净祸測。
微量移液器：单道µµ，µµ、多道µ试剂：乙酸乙酯、正己烷、乙腈、醋酸钠、醋酸、亚硝基铁氰化钾（()()▪）、葡萄糖苷酸酶、硫酸锌（·）残骛楼諍锩瀨濟溆塹籟婭骒。
样本前处理样本处理前须知：实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。
氯霉素ELISA快速检测试剂盒
氯霉素ELISA快速检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12037f检测范围：0.312 ng/ml-10 ng/ml最低检测限：0.2 ng/ml特异性：本试剂盒可用于快速检测氯霉素。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定动物组织样品（虾、鱼及肉类）、饲料、蛋、血清、血浆、尿液、蜂蜜、牛奶等样品中的氯霉素残留。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理本试剂盒采用酶联免疫间接竞争法检测氯霉素。
微孔板上包被有氯霉素偶联物。
加入氯霉素抗体和氯霉素标准品或样品，游离氯霉素与微量反应板上的氯霉素结合物竞争结合抗氯霉素抗体，没有结合的抗体被洗去，再向微孔中加辣根过氧化物酶标记二抗，与结合在反应板上的抗体作用一定时间，洗去多余的辣根过氧化物酶标记二抗。
再向反应孔中加入相应反应底物TMB，作用一定时间后，结合的酶结合物将TMB转化为蓝色，转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的氯霉素呈负相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.已包被氯霉素偶联物的酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：6×250ul/瓶。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.辣根过氧化物酶标记二抗稀释液（HRP-anti-antibody Diluent）：1×20ml/瓶。
5.氯霉素单克隆抗体：1×60μl/瓶（1：100）6.辣根过氧化物酶标记二抗（HRP-anti-antibody ）：1×120μl/瓶（1：100）7.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
氯霉素竞争ELISA检测试剂盒的研制
氯霉素竞争ELISA检测试剂盒的研制杨丽丽,胡红芳,高志贤*(军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津300050)摘要:目的应用抗氯霉素多克隆抗体,建立竞争E LISA分析方法,研制氯霉素残留快速检测试剂盒,并对其性能进行测定。
方法选用抗氯霉素高特异性抗体,直接包被抗体后,将酶标记氯霉素和氯霉素标准品或样品加入预先包被了特异性抗体的孔内,建立直接竞争ELISA检测试剂盒。
结果所选用的抗体对氯霉素亲和力高,与链霉素、四环素、土霉素、青霉素4种抗生素及克伦特罗的交叉反应率均小于0.01%;抗体的特异性强;检测质量浓度为50、10.5、0.5mg/ml样本时,平均变异系数为11.4%;对氯霉素残留检测的标准曲线为y=-14.843log x+56.692,R2 =0.9965,线性范围为0.02~64.0ng/ml,检测限IC10为0.451ng/ml,灵敏度IC50为2.82ng/ml,样品的加标回收率为72%~113%。
结论试剂盒检测的准确性和重现性较好,可用于批量虾肉、鸡肉、牛奶等样品中氯霉素残留的检测。
关键词: 氯霉素; 酶联免疫吸附分析; 试剂盒中图分类号:R978.13 文献标志码:A 文章编号:1001-5248(2010)04-0248-05随着经济的发展,人们的生活质量日益提高,对食品卫生安全问题更加重视。
食品中药物残留问题是食品卫生安全问题之一。
氯霉素(Chlorampheni col,C AP)是一种应用广泛的广谱抗生素,对多种病原菌具有较强的抑制作用 1。
但由于氯霉素存在严重的毒副作用,其在动物的肉、奶、蛋中的残留,威胁着人类的健康。
目前,许多国家严格规定了氯霉素的残留限量 2,美国,芬兰规定了畜禽、水产中C AP 的最高残留限量为0,欧共体规定为10 g/kg,我国规定为2 g/kg。
目前,氯霉素残留分析主要采用高效液相色谱法 3 4和气相色谱法 5 6。
高效液相色谱法操作简单,但检出限较高,无法满足当前对氯霉素低残留限量的要求;气相色谱法灵敏度较高,但样品前处理过程复杂,而且仪器价格昂贵,不适合在基层推广使用。
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氯霉素( Chloramphenicol) ELISA检测试剂盒说明书
一、概要
氯霉素( chloramphenicol, CAP) 是应用广泛的抗菌素, 曾对畜禽疾
病控制和治疗起到了重要作用。
但由于氯霉素存在严重的副作用, 能
引起人的再生障碍性贫血, 粒细胞
缺乏症等疾病, 欧美等发达国家已
相继禁止或严格禁止使用。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品, 能最大限度地减少操作误差和工作强度。
操作时间仅需1.5小时。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA 方法, 在酶标板微孔条上预包被偶联抗原, 样本中残留的氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氯霉素抗体, 加入酶标二抗后, 用TMB底物显色, 样本吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关, 与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数, 即可得出样品中氯霉素的含量。
三、适用范围
可定性、定量检测动物组织( 肌肉、肝脏等) 、尿液、血清、肠衣、牛奶、奶粉等样本中氯霉素的残留量。
四、交叉反应率
氯霉素……………………………………100%;
琥珀氯霉素…………………………………92%;
氯霉素-葡萄糖苷酸………………………57%。
五、使用单位需自备的设备及试剂设备:
┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置
┅┅均质器
┅┅振荡器
┅┅涡旋仪
┅┅离心机
┅┅天平: 感量0.01g
┅┅刻度移液管: 10ml
┅┅洗耳球
┅┅容量瓶: 100ml、500ml
┅┅玻璃试管: 10ml
┅┅聚苯乙烯离心管: 10ml、15ml、50ml
┅┅微量移液器: 单道20ml～200ml、100ml～1000ml
多道250ml
试剂:
┅┅乙酸乙酯( 分析纯)
┅┅乙腈( 分析纯)
┅┅正己烷( 分析纯)
┅┅二水合亚硝基铁氰化钠( 分析纯) ( 供奶样用)
┅┅七水合硫酸锌( 分析纯) ( 供奶样用)
┅┅葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)( 供尿样本用) ┅┅醋酸钠( 分析纯) ( 供尿样本用)
┅┅肝素钠( 分析纯) ( 供血样本用)
┅┅醋酸( 分析纯) ( 供尿样本用) ----去离子水
六、提供的材料与试剂
1、96孔酶标板×1块( 包被有偶联抗原)
2、标准液×6瓶: ( 2ml/瓶)
0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb, 0.675p p b,2.025p p b 3、高浓度标准品: ( 2ml/瓶) 100ppb
4、酶标二抗…………………………7m l
5、抗体工作液…………………………7m l
6、底物液A 液…………………………7m l
7、底物液B 液…………………………… 7ml
8、终止液……………………………7ml
9、20×浓缩洗涤
液………………………40ml 10、2×浓缩复溶液………………50m l 七、溶液的配制
配液1: C液( 供奶样专用)
0.36M 二水合亚硝基铁氰化钠( Na2Fe(CN)5·NO·2H2O) 溶液
称取10.7g二水合亚硝基铁氰化钠加去离子水溶解定容
至100ml。
配液2: D液( 供奶样专用)
1M七水合硫酸锌( ZnSO4·7H2O) 溶液
称取28.8g七水合硫酸锌加去离子水溶解定容至100ml 。
配液3: pH4.8 100mM醋酸钠溶液
( 供尿样本用)
称取 2.4g醋酸钠, 加入
1.2ml 醋酸, 再加去离子水
溶解定容至500ml
配液4:乙腈-水溶液
量取84ml无水乙腈加入
到16ml去离子水中混匀配液5: 复溶工作液
用去离子水将2×浓缩复溶液
按1: 1体积比进行稀释( 1份2×
浓缩复溶液+1份去离子水) 用
于提取样本的复溶, 复溶工作
液在4℃环境可保存一个月。
配液6: 洗涤工作液
用去离子水将20×浓缩洗涤液按1: 19体积比进行稀释
( 1份20×浓缩洗涤液+19份去
离子水) 用于酶标板的洗涤,
洗涤工作液在4℃环境可保存
一个月。
八、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时, 都必须注意: ( a) 实验中必须使用一次性吸头, 在吸取不同的试剂时要更换
吸头。
( b) 实验之前须检查各种实验器具是否洁净, 必须使用洁净
实验器具, 以避免污染干扰
实验结果。
( c) 处理样本的同时, 做空白试剂对照, 样本的测定结果减
去空白试剂的测定结果为样
本中氯霉素的实际残留量。
组织样本空白对照试剂的制备
┅┅取4ml乙酸乙酯在氮气流下完全干燥;
┅┅用1ml正己烷充分溶解;
┅┅加入1ml复溶液工作液
( 见配液5) , 强烈振荡
1min, 静置分层后去除上
层正己烷相;
┅┅取100ml水相用于分析。
( d) 未处理的样本冷冻保存。
( e) 处理后的样本可在2-8℃避
光保存24h。
未加正己烷之
前, 吹干的样本保存效果
更好。
( f) 处理后的样本, 如出现乳化
现象, 可在去除部分上层
有机相, 60℃水浴5～
10min消除乳化后, 再重复
离心步骤。
( 一) 组织(鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等)前处理方法
┅┅用均质器均质组织样本;
┅┅称取3.0±0.05g均质物至50ml 聚苯乙烯离心管中, 加入6ml
乙酸乙酯, 用振荡器振荡
10min, 3000g以上, 室温
( 20-25℃) 离心10min;
┅┅移取4ml上层有机相( 约相当于2g的样本) 至10ml干净的
玻璃试管中, 于50～60℃水浴
氮气流下吹干;
┅┅加入1ml正己烷, 用涡旋仪涡动30s, 再加1ml复溶工作液
( 见配液5) , 用涡旋仪涡动
1min, 3000g以上, 室温
( 20-25℃) 离心15min;
┅┅除去上层有机相, 取下层100ull用于分析。
注: 在检测动物肝脏样品时, 加入
1ml正己烷溶解干燥的残留物,
再加1ml复溶工作液后, 只需振
荡10s, 离心后取下层即可分析;
在检测高脂肪样本时正己烷用
量可加大2ml－3ml。
( 二) 鸡血前处理方法
┅┅用加有肝素钠( 20-30单位/ml 血) 的离心管采集鸡血样本
( 建议采血注射器也用肝素钠
润洗) , 血样本室温静置
1h, 待析出血浆后, 3000g以上, 15℃离心10min;
┅┅取1ml血浆至10ml聚苯乙烯离心管中, 加2ml乙酸乙酯振荡
1min;
┅┅室温( 20-25℃) 下静置待水相与有机相完全分层或3000g以
上, 室温( 20-25℃) 离心5min; ┅┅移取上层的有机相至15ml干净的玻璃试管中, 于50～60℃
氮气流下吹干;
┅┅干燥的残留物加入1ml复溶工作液( 见配液5) , 用涡旋仪涡
动2min溶解干燥的残留物;
┅┅取100ml用于分析。
( 三) 尿液前处理方法
┅┅将尿液于3000g以上, 室温( 20-25℃) 离心5min, 直至尿
液样本清亮;
┅┅移取2ml清亮尿液样本至50ml 聚苯乙烯离心管中, 加0.5ml
pH4.8 100mM醋酸钠缓冲液
( 见配液3) 混合;
┅┅加40ml葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)至稀释的
尿液样本中, 置37℃水解至少
2h( 或过夜) , 取出室温
( 20-25℃) 放置;
┅┅该溶液恢复至室温( 20-25℃) 后加入8ml乙酸乙酯混合
1min;
┅┅3000g以上, 室温( 20-25℃) 离心10min, 取出4ml上层液体
至10ml干燥的玻璃试管中,
于50～60℃氮气流下吹干;
┅┅加入1ml复溶工作液( 见配液。