人P16ELISA试剂盒使用说明书
Human IL-6 ValukineTM ELISA操作手册说明书
PRODUCT INFORMATION&MANUAL Human IL-6Valukine TM ELISAVAL102For the quantitative determination of natural and recombinant human Interleukin6(IL-6)concentrationsFor research use only.Not for diagnostic or therapeutic procedures.Bio-Techne China Co.LtdP:+86(21)52380373P:8009881270F:+86(21)52381001**********************Please refer to the kit label for expiry date.Novus kits are guaranteed for3months from date of receiptVersion202209.5TABLE OF CONTENTSI.BACKGROUND (2)II.OVERVIEW (3)III.ADVANTAGES (4)IV.EXPERIMENT (7)V.KIT COMPONENTS AND STORAGE (8)VI.PREPARATION (10)VII.ASSAY PROCEDURE (12)VIII.REFERENCES (13)I.BACKGROUNDInterleukin6(IL-6)is a pleiotropicα-helical22-28kDa phosphorylated and variably glycosylated cytokine that plays important roles in the acute phase reaction, inflammation,hematopoiesis,bone metabolism,and cancer progression(1-5).Mature human IL-6is183amino acids(aa)in length and shares41%aa sequence identity with mouse and rat IL-6(6).Alternate splicing generates several isoforms with internal deletions,some of which exhibit antagonistic properties(7-10).Cells known to express IL-6include CD8+T cells,fibroblasts,synoviocytes,adipocytes,osteoblasts, megakaryocytes,endothelial cells(under the influence of endothelins),sympathetic neurons,cerebral cortex neurons,adrenal medulla chromaffin cells,retinal pigment cells,mast cells,keratinocytes,Langerhans cells,fetal and adult astrocytes,neutrophils, monocytes,eosinophils,colonic epithelial cells,B1B cells,and pancreatic islet beta cells(2,7,10-33).IL-6production is generally correlated with cell activation and is normally kept in control by glucocorticoids,catecholamines,and secondary sex steroids (2).Normal human circulating IL-6is in the1pg/mL range,with slight elevations during the menstrual cycle,modest elevations in certain cancers,and large elevations after surgery(34-38).IL-6induces signaling through a cell surface heterodimeric receptor complex composed of a ligand binding subunit(IL-6R)and a signal transducing subunit(gp130).IL-6binds to IL-6R,triggering IL-6R association with gp130and gp130dimerization(39).Gp130 is also a component of the receptors for CLC,CNTF,CT-1,IL-11,IL-27,LIF,and OSM (40).Soluble forms of IL-6R are generated by both alternative splicing and proteolytic cleavage(3).In a mechanism known as trans-signaling,complexes of soluble IL-6and IL-6R elicit responses from gp130-expressing cells that lack cell surface IL-6R(1,3). Trans-signaling enables a wider range of cell types to respond to IL-6,as the expression of gp130is ubiquitous,while that of IL-6R is predominantly restricted to hepatocytes,monocytes,and resting lymphocytes(1-3).Soluble splice forms of gp130 block trans-signaling from IL-6/IL-6R but not from other cytokines that use gp130as a co-receptor(3,41).IL-6,along with TNF-αand IL-1,drives the acute inflammatory response,is almost solely responsible for fever and the acute phase response in the liver,and is important in the transition from acute inflammation to either acquired immunity,or chronic inflammatory disease(1-4).It contributes to chronic inflammation in conditions such as obesity,insulin resistance,inflammatory bowel disease,inflammatory arthritis and sepsis when dysregulated,often involving IL-6trans-signaling(1,2).It also plays an important role in the differentiation of naive T cells to Th17inflammatory cells in the presence of TGF-β.IL-6modulates bone resorption and is a major effector of inflammatory joint destruction in rheumatoid arthritis through its promotion of Th17T cell activity(1).It contributes to atherosclerotic plaque development and destabilization(2). However,IL-6can also have anti-inflammatory effects,such as in skeletal muscle where it is secreted in response to exercise(2).It promotes hematopoiesis by being a growth factor for hematopoietic stem cells,induces B cell maturation to plasma cells and perpetuates multiple myeloma(1,42).IL-6also promotes,but probably does not initiate,other types of inflammation-associated carcinogenesis,such as colitis-associated cancer(1).II.OVERVIEWA.PRINCIPLE OF THE ASSAYThis assay employs the quantitative sandwich enzyme immunoassay technique.A monoclonal antibody specific for IL-6has been pre-coated onto a microplate.Standards and samples are pipetted into the wells and any IL-6present is bound by the immobilized antibody.After washing away any unbound substances,an enzyme-linked polyclonal antibody specific for IL-6is added to the wells.Following a wash to remove any unbound antibody-enzyme reagent,a substrate solution is added to the wells and color develops in proportion to the amount of IL-6bound in the initial step.The color development is stopped and the intensity of the color is measured.B.LIMITATIONS OF THE PROCEDURE♦FOR RESEARCH USE ONLY.NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.♦This kit is suitable for cell culture supernate,serum and plasma.♦The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.♦Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.♦If samples generate values higher than the highest standard,dilute the samples with Diluent and repeat the assay.♦Any variation in operator,pipetting technique,washing technique,incubation time or temperature,and kit age can cause variation in binding.III.ADVANTAGESA.PRECISIONIntra-assay Precision(Precision within an assay)Three samples were tested twenty times on one plate to assess intra-assay precision. Inter-assay Precision(Precision between assays)Three samples were tested in twenty separate assays to assess inter-assay precision.Intra-assay Precision Inter-assay PrecisionSample123123Mean(pg/mL)20.677.817523.983.3177Standard Deviation 1.20 3.517.33 4.2013.325.5CV% 5.8 4.5 4.217.615.914.4B.RECOVERYThe recovery of human IL-6spiked to levels throughout the range of the assay in various matrices was evaluated.Sample Type Average%Recovery RangeCell culture media(n=4)9581-104%Serum(n=3)9380-99%Plasma(n=4)9681-109%C.SENSITIVITYThe minimum detectable dose(MDD)of IL-6is typically less than1.56pg/mL.The MDD was determined by adding two standard deviations to the mean optical density value of twenty zero standard replicates and calculating the corresponding concentration.D.CALIBRATIONThis immunoassay is calibrated against highly purified E.coli-expressed recombinant human IL-6produced at R&D Systems.The NIBSC/WHO1st International Standard for IL-6(89/548),which was intended as a potency standard,was evaluated in this kit.The NIBSC/WHO standard is a CHO cell-derived recombinant human IL-6.The dose response curve of the International Standard(89/548)parallels the Valukine standard curve.To convert sample values obtained with the Valukine Human IL-6kit to approximate NIBSC89/548units,use the equation below.NIBSC(89/548)approximate value(IU/mL)=0.109×Valukine Human IL-6value (pg/mL)E.LINEARITYTo assess the linearity of the assay,samples were spiked with high concentrations of human IL-6in various matrices and diluted with Diluent1×to produce samples with values within the dynamic range of the assay.Dilution Cell culture media(n=4)Serum(n=3)Plasma(n=4)1:2Average%of Expected11210299 Range(%)105-117101-10289-106 1:4Average%of Expected111106101 Range(%)104-119102-11195-107 1:8Average%of Expected9710899 Range(%)91-105103-11693-104 1:16Average%of Expected8910998 Range(%)81-98102-11790-107 F.SAMPLE VALUESCell Culture Supernates-Human peripheral blood mononuclear cells(1×106cells/mL) were cultured in RPMI supplemented with10%fetal calf serum,50μM β-mercaptoethanol,2mM L-glutamine,100U/mL penicillin,and100μg/mL streptomycin sulfate and stimulated for3days with10μg/mL PHA.An aliquot of the cell culture supernate was removed,assayed for levels of natural IL-6,and measured6640 pg/mL.Serum-Three human serum samples were evaluated for the presence of human IL-6 in this assay.All samples measured ranged from20.5to62.5pg/mL with an average of 48.0pg/mL.Plasma-Four human plasma samples were evaluated for the presence of human IL-6 in this assay.All samples measured ranged from73.5to105pg/mL with an average of 88.6pg/mL.G.SPECIFICITYThis assay recognizes both natural and recombinant human IL-6.The following factors were prepared at50ng/mL and assayed for cross-reactivity.Preparations of the following factors at50ng/mL in a mid-range rhIL-6control were assayed for interference.No significant cross-reactivity or interference was observed.Recombinant human Recombinant mousesgp130IL-6IL-6sRIL-6sR/sgp130IV.EXPERIMENTEXAMPLE STANDARDThe standard curve is provided for demonstration only.A standard curve should be generated for each set of samples assayed.V.KIT COMPONENTS AND STORAGEA.MATERIALS PROVIDEDParts Description SizeHuman IL-6 Microplate 96well polystyrene microplate(12strips of8wells)coated with a mouse monoclonal antibodyagainst human IL-61plateHuman IL-6 Conjugate Solution of polyclonal antibody againsthuman IL-6conjugated to horseradishperoxidase1vialHuman IL-6 Standard recombinant human IL-6in a buffered proteinbase;lyophilized1vialCalibrator Diluent(5×)a5×concentrated buffered protein base1vialWash BufferConcentrate(25×)a25×concentrated solution of buffered surfactant1vial TMB Substrate TMB ELISA Substrate Solution2vials Stop Solution2N sulfuric acid1vial Plate Sealers adhesive strip3stripsB.STORAGEUnopened Kit Store at2-8°C.Do not use past kit expiration date.Opened/ Reconstituted Reagents Diluted Wash BufferMay be stored for up to1month at2-8°C.*Stop SolutionDiluent1×ConjugateTMB SubstrateStandardAliquot and store for up to1month at-20°C in a manual defrost freezer.*Avoid repeated freeze-thaw cycles. Microplate WellsReturn unused wells to the foil pouchcontaining the desiccant pack,resealalong entire edge of zip-seal.May bestored for up to1month at2-8°C.**Provided this is within the expiration date of the kit.C.OTHER SUPPLIES REQUIRED♦Microplate reader capable of measuring absorbance at450nm,with the correction wavelength set at540nm or570nm.♦Pipettes and pipette tips.♦Deionized or distilled water.♦Squirt bottle,manifold dispenser,or automated microplate washer.♦500mL graduated cylinder.D.PRECAUTIONThe Stop Solution provided with this kit is an acid solution.Wear eye,hand,face,and clothing protection when using this materialVI.PREPARATIONA.SAMPLE COLLECTION AND STORAGECell Culture Supernates-Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at≤-20°C.Avoid repeated freeze-thaw cycles. Samples may require dilution with Calibrator Diluent1×.Serum-Use a serum separator tube(SST)and allow samples to clot for30minutes at room temperature before centrifugation for15minutes at1000x g.Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at≤-20°C.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Plasma-Collect plasma using EDTA,heparin,or citrate as an anticoagulant. Centrifuge for15minutes at1000x g within30minutes of collection.Assay immediately or aliquot and store samples at≤-20°C.Avoid repeated freeze-thaw cycles.B.SAMPLE PREPARATIONSerum samples require a5-fold dilution.A suggested5-fold dilution is40μL of sample +160μL of Diluent(1×).Plasma samples require a2-fold dilution.A suggested2-fold dilution is100μL of sample+100μL of Diluent(1×).C.REAGENT PREPARATIONNote:Bring all reagents to room temperature before use.Wash Buffer-If crystals have formed in the concentrate,warm to room temperature and mix gently until the crystals have completely dissolved.Dilute20mL of Wash Buffer Concentrate(25×)into deionized or distilled water to prepare500mL of Wash Buffer. Diluent1×-Add20mL of Calibrator Diluent Concentrate5×into80mL of deionized or distilled water to prepare100mL of Diluent1×.IL-6Standard-Refer to the vial label for reconstitution volume*.This reconstitution produces a stock solution of300pg/mL.Allow the standard to sit for a minimum of15 minutes with gentle agitation prior to making dilutions.*if you have any question,please seek help from our Technical Support.Pipette667μL of Diluent1×into the100pg/mL tube.Pipette500μL of Diluent 1×into each remaining e the stock solution to produce a dilution series (below).Mix each tube thoroughly before the next transfer.The undiluted standard serves as the high standard(300pg/mL).The Diluent1×serves as the zero standard(0 pg/mL).D.TECHNICAL HINTS●When mixing or reconstituting protein solutions,always avoid foaming.●To avoid cross-contamination,change pipette tips between additions of eachstandard level,between sample additions,and between reagent additions.Also, use separate reservoirs for each reagent.●It is recommended that the samples be pipetted within15minutes.●To ensure accurate results,proper adhesion of plate sealers during incubationsteps is necessary.●TMB Substrate should remain colorless until added to the plate.Keep SubstrateSolution protected from light.Substrate Solution should change from colorless to gradations of blue.●Stop Solution should be added to the plate in the same order as the SubstrateSolution.The color developed in the wells will turn from blue to yellow upon addition of the Stop Solution.Wells that are green in color indicate that the Stop Solutionhas not mixed thoroughly with the Substrate Solution.VII.ASSAY PROCEDURENote:Bring all reagents and samples to room temperature before use.It is recommended that all samples and standards be assayed in duplicate.1.Prepare all reagents and working standards as directed in the previous sections.2.Remove excess microplate strips from the plate frame,return them to the foil pouchcontaining the desiccant pack,and reseal.3.Add100μL of Standard,sample,or control per well.Cover with the adhesive stripprovided.Incubate for2hours at room temperature.A plate layout is provided for a record of standards and samples assayed.4.Aspirate each well and wash,repeating the process three times for a total of fourwashes.Wash by filling each well with Wash Buffer(400μL)using a squirt bottle, manifold dispenser,or plete removal of liquid at each step is essential to good performance.After the last wash,remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting.Invert the plate and blot it against clean paper towels.5.Add200μL of human IL-6Conjugate to each well.Cover with a new adhesive strip.Incubate for2hours at room temperature.6.Repeat the aspiration/wash as in step4.7.Add200μL of TMB Substrate to each well.Incubate for20minutes at roomtemperature.Protect from light.8.Add50μL of Stop Solution to each well.The color in the wells should change fromblue to yellow.If the color in the wells is green or if the color change does not appear uniform,gently tap the plate to ensure thorough mixing.9.Determine the optical density of each well within10minutes,using a microplatereader set to450nm.If wavelength correction is available,set to540nm or570nm.If wavelength correction is not available,subtract readings at540nm or570nm from the readings at450nm.This subtraction will correct for optical imperfections in the plate.Readings made directly at450nm without correction may be higher and less accurate.10.CALCULATION OF RESULTS：Average the duplicate readings for each standard,control,and sample and subtract the average zero standard optical density.Createa standard curve by reducing the data using computer software capable ofgenerating a four parameter logistic(4-PL)curve-fit.As an alternative,construct a standard curve by plotting the mean absorbance for each standard on the y-axis against the concentration on the x-axis and draw a best fit curve through the points on the graph.The data may be linearized by plotting the log of the IL-6 concentrations versus the log of the O.D.and the best fit line can be determined by regression analysis.This procedure will produce an adequate but less precise fit of the data.If samples have been diluted,the concentration read from the standard curve must be multiplied by the dilution factor.VIII.REFERENCES1.Naugler,W.E.and M.Karin(2008)Trends Mol.Med.14:109.2.Schuett,H.et al.(2009)Thromb.Haemost.102:215.3.Jones,S.A.(2005)J.Immunol.175:3468.4.Hodge,D.R.et al.(2005)Eur.J.Cancer41:2502.5.Rose-John,S.et al.(2006)J.Leukoc.Biol.80:227.6.Van Snick,J.et al.(1988)Eur.J.Immunol.18:193.7.Kestler,D.P.et al.(1995)Blood86:4559.8.Kestler,D.P.et al.(1999)Am.J.Hematol.61:169.9.Bihl,M.P.et al.(2002)Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.27:48.10.Alberti,L.et al.(2005)Cancer Res.65:2.11.May,L.T.et al.(1986)A83:8957.12.Sad,S.et al.(1995)Immunity2:271.13.Cichy,J.et al.(1996)mun.227:318.14.Miyazawa,K.et al.(1998)Am.J.Pathol.152:793.15.Fried,S.K.et 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Res.2:1405.38.Sakamoto,K.et al.(1994)Cytokine6:181.39.Murakami,M.et al.(1993)Science260:1808.40.Muller-Newen,G.(2003)Sci.STKE2003:PE40.41.Mitsuyama,K.et al.(2006)Clin.Exp.Immunol.143:125.42.Cerutti,A.et al.(1998)J.Immunol.160:2145.产品信息及操作手册人IL-6Valukine TM ELISA试剂盒目录号：VAL102适用于定量检测天然和重组人白介素6（IL-6）的浓度科研专用，不可用于临床诊断Bio-Techne China Co.LtdP:+86(21)52380373P:8009881270F:+86(21)52381001**********************有效期详见试剂盒包装标签Novus试剂盒确保在你收货日期3个月内有效目录I.背景 (18)II.概述 (19)III.优势 (20)IV.实验 (23)V.试剂盒组成及储存 (24)VI.实验前准备 (26)VII.操作步骤 (28)VIII.参考文献 (29)白细胞介素-6（IL-6）是一个具有α螺旋结构、22-28kDa的磷酸化和不同程度糖基化的多功能细胞因子，它在疾病急性期反应、炎症、造血、骨代谢以及癌症恶化等方面起重要作用（1-5）。
用ELISA试剂盒检测人白介素6IL-6的浓度
双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-6的浓度人IL-6简介：白介素6（IL-6）是一类多功能的蛋白，在宿主防御，急性期反应，免疫反应，造血功能，神经系统等方面起到重要的作用。
白介素6根据来源不同是分子量从21到28kDa不同的单链蛋白。
白介素6在多种细胞中都有表达，如T细胞、巨噬细胞、纤维原细胞、肝细胞、血管内皮细胞等。
由于IL-6具有不同的活性，所以IL-6也被称为干扰素β2(IFN-β2)、B细胞刺激因子-2(BSF-2)、杂交瘤细胞生长因子、肝细胞刺激因子、毒性T细胞分化因子、巨噬细胞粒细胞诱导因子(MGI-2A)。
白细胞介素6在B-细胞向Ig分泌细胞的转化过程起到重要的作用，参与了淋巴细胞和单核细胞的分化，诱导神经细胞在B-细胞，T-细胞，肝细胞，造血干细胞以及中枢神经系统的分化作用。
此外，肌肉运动收缩作用后白细胞介素6会被释放到血液中，进而能促进脂肪的分解并改善机体的胰岛素耐受性。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-6的浓度。
IL-6捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-6会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入生物素化的抗人IL-6抗体后，抗人IL-6抗体与IL-6接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。
生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在IL-6将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-6浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-6浓度。
标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
elisa试剂盒实验说明书
PRRSV N蛋白抗体检测间接ELISA方法的建立1 材料：1.1 蛋白、血清、酶标二抗原核表达PRRSV N蛋白；标准阳性血清和阴性血清，待检血清；自制HRP标记兔抗猪IgG；1.2 主要试剂和溶液包被液（50 mmol/L pH9.6的碳酸盐缓冲液）Na2CO3 1.59 gNaHCO3 2.93 g准确称取后，溶于950 mL的蒸馏水中，调pH值为9.6，定容到1 L；PBS-T洗涤液1000 mL 10 mmol/L pH7.4的PBS中加入0.5 mL Tween-20；封闭液和血清稀释液含10%小牛血清的PBS-T缓冲液，10%马血清的PBS-T缓冲液，含5%BSA的PBS-T缓冲液，含10%BSA的PBS-T缓冲液，含5%脱脂奶的PBS-T缓冲液；底物溶液100 mmol/L的柠檬酸溶液（21 g柠檬酸C6H6O7•H2O溶于去离子水，定容至1 L）24.3 mL，200 mmol/L Na2HPO4•12H2O（71.6 g Na2HPO4•12H2O溶于去离子水，定容至1 L）25.7 mL混匀，加入50 mg的四甲基联苯胺（TMB），临用前加入50 μL的30% H2O2；终止液（2 mol/L H2SO4）每200 mL终止液，由蒸馏水177.8 mL和浓硫酸22.2 mL 混和而成。
1.3 主要仪器设备电热恒温培养箱；4℃冰箱；酶标仪。
2 步骤：2.1抗原包被浓度和二抗稀释度的确定将原核表达的N蛋白分别作2.0 μg/mL，1.0 μg/mL，0.5 μg/mL，0.25 μg/mL，0.1μg/mL，0.05 μg/mL连续稀释6个稀释度，每个稀释度重复两孔，100 μL/孔，4℃包被酶标反应板过夜。
将自制HRP标记的兔抗猪二抗分别做1:50、1:100、1:200和1:400一系列倍比稀释，南京金益柏生物技术有限公司Tel:025-********Fax*************每个稀释度重复两孔，100 μL/孔，组成方阵确定重组蛋白的最佳包被浓度和二抗稀释度。
人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程
1、 检验申请单独检验项目申请：人类免疫缺陷病毒抗体{缩写抗HIV （1+2）]测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2、 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml ，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。
也可采集血浆，用肝素、EDTA 或枸橼酸盐抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml 的全血标本，或少于0.1ml 的血清或血浆。
2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h 后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。
离心必须达到3000rpm 15min ，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h ，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d ，在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
不可使用热灭活的标本。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d 。
2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。
医院检验科免疫室 体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 页，共 页3．方法原理本实验采用HIV 特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板，用gp36、gp41标记辣根过氧化物酶。
当待测标本中存在HIV 抗体时，该抗体和固化的抗原结合于反应板上，并进一步与酶结合物相结合，在TMB 底物参与反应的情况下，产生显色反应。
人乳头状瘤病毒抗体IgG(HPV IgG)ELISA试剂盒使用说明书
本试剂盒可同时检测重组或天然的人 HPV IgG，且与其它相关蛋白无交叉反应。 计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD 值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线 ， 根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲 线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓 度。 注意事项 1． 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 2． 一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 3． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。 4． 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 5．在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。 6．底物请避光保存。 检测范围： 156 U/mL -10000 U/mL 说明 1. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到 微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。 2. 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时， 第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响 到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。 3. 试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于 2-8℃，具体以标签上的标示为准。 4. 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 5. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 6. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 7. 所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。 8. 有效期. 依序每孔加终止溶液 50ul，终止反应（此时兰色立转黄色）。用酶联仪在 450nm 波长依序测量各孔的 光密度（OD 值）。 注： 1． 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及 2NH2SO4。测量时先用 此孔调 OD 值至零。 2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。 洗板方法 手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下 用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少 0.4ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟，根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 特异性
人P21蛋白(P21)定量检测试剂盒(ELISA)使用说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
人P21蛋白（P21）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】人P21蛋白（P21）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测人血清、血浆及相关液体样本中P21蛋白（P21）的含量。
【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被人P21蛋白（P21）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人P21蛋白（P21）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人P21蛋白（P21）含量。
【试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7显色剂A液6mL2标准品0.3mL×6管8显色剂B液6mL320倍浓缩洗涤液25mL9终止液6mL4样本稀释液6mL10说明书1份5特殊稀释液6mL11封板膜2张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：48、24、12、6、3、1.5ng/L【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
人促红细胞生成素(EPO)-酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
仅供科研使用，不得用于临床检验。
人促红细胞生成素（EPO ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书黄石市艾恩斯生物科技有限公司【产品名称】通用名称：人促红细胞生成素（EPO ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）英文名称：Human Erythropoietin（EPO ）ELISA KIT【包装规格】48人份/盒，96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人促红细胞生成素（EPO ）的浓度。
【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。
在预包被抗人促红细胞生成素（EPO ）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人促红细胞生成素（EPO ）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人促红细胞生成素（EPO ）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。
加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人促红细胞生成素（EPO ）的浓度正相关。
拟合校准品曲线，可以计算出样本中人促红细胞生成素（EPO ）的浓度。
【主要组成成分】主要成分校准品检测范围：47-3000pg/ml。
校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材1、酶标仪2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套【储存条件及有效期】1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
人(Human)白细胞介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人白细胞介素6（IL-6）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被人白细胞介素6（IL-6）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人白细胞介素6（IL-6）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品（48 pg/ml）0.6mL 0.6mL 按说明书进行稀释标准品稀释液6mL 3mL 无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：48、24、12、6、3、1.5 pg/ml试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
欧蒙过敏原总IgE说明书
总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）说明书[产品名称][通用名称] 总IgE检测试剂盒(酶联免疫法)[英文名称] Total IgE ELISA适应症：过敏性疾病、蠕虫病、湿疹性或非湿疹性皮炎、IgE骨髓瘤等。
临床意义：1）过敏反应和特应性疾病的诊断：除了皮肤和激发实验、检测特异性IgE外，变态反应性疾病的诊断还包括检测总IgE水平。
但是，过敏反应并不总伴有总IgE水平的升高（成人>100 IU/ml）。
相反，低水平的IgE（成人<25 IU/ml）也不能排除患有特应性过敏反应。
通过长期脱敏治疗和远离过敏原，总IgE滴度通常会下降。
通过测定总IgE水平可以区分过敏性哮喘和内源性哮喘，过敏性鼻炎和血管舒缩性鼻炎以及婴儿特应性皮炎和脂溢性皮炎。
在特应性皮炎患者中可见极高浓度的IgE（数千IU/ml）。
其他过敏性（和高IgE水平）的疾病包括急性复发性或慢性荨麻疹、复发性Quincke水肿（血管神经性水肿）、胃肠道不耐受和不明原因的疹病。
检测总IgE 也可用于鉴别诊断肺部嗜酸性粒细胞浸润、变态反应性曲霉病、外源性变态反应性肺泡炎（农夫肺和养鸽者肺）和Churg-Strauβ 综合征。
2）其他疾病中的IgE：高IgE水平的非变态反应性疾病包括多种形式的蠕虫病，如弓蛔虫病、蛔虫病、血吸虫病、钩虫病、利什曼原虫病、毛线虫病。
然而，在绦虫病和蛲虫病中未见有IgE水平升高。
对于大多数病例，经有效治疗后，IgE水平可降至正常值范围内。
在下列疾病中可检测出高浓度的IgE：•湿疹性或非湿疹性皮炎；•IgE骨髓瘤；•急性系统性红斑狼疮（SLE）；•移植物抗宿主反应；•T细胞缺陷（Wiskott-Aldrich 综合征）；•2度或3度烧伤；•耳鼻喉肿瘤；•肝病（尤其与酒精滥用有关）；•AIDS晚期阶段（CD4+ T细胞明显下降）。
在下列疾病中可有IgE缺陷：•X-染色体相关低丙种球蛋白血症；•严重的联合免疫缺陷（SCID）；•毛细管扩张性运动失调；•肺纤维化疾病；•极少数的健康人。
ELISA步骤、试剂及注意事项
ELISA步骤、试剂及注意事项操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法：1.包被：用0.05M PH9。
牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。
在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0。
1ml,4℃过夜。
次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
（简称洗涤，下同)。
2.加样:加一定稀释的待检样品0。
1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。
然后洗涤.（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3。
加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度)0。
1ml。
37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0。
1ml,37℃10～30分钟。
5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深,阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。
也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm （若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2。
1倍，即为阳性.方法二用于检测未知抗体的间接法:用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0。
1ml，4℃过夜.次日洗涤3次。
加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。
(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体）0。
1ml,37℃孵育30—60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
试剂器材1.试剂（1）包被缓冲液（PH9。
6 0。
05M碳酸盐缓冲液)：NaCO3？1.59克NaHCO32。
93克加蒸馏水至1000ml（2）洗涤缓冲液(PH7。
4 PBS）:0.15M KH2PO4 0.2克Na2HPO4·12H2O 2.9克NaCl 8。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备：根据实验要求，准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。
例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。
3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。
Elabscience 人促红细胞生成素(EPO)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书
2022年修订第一版（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!）产品货号：E-EL-H3640c产品规格：96T/48T/24T/96T*5Elabscience 人促红细胞生成素(EPO)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书Human EPO(Erythropoietin) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话技术部电话************电子邮箱（销售）********************电子邮箱（技术）**************************网址：具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
Copyright ©2021-2022 Elabscience Biotechnology Co.,Ltd. All Rights Reserved目录用途 (3)基本性能 (3)检测原理 (3)试剂盒组成及保存 (4)试验所需自备物品 (5)样品收集方法 (5)注意事项 (6)■ 试剂盒注意事项 (6)■ 样品注意事项 (6)样本稀释方案 (6)检测前准备工作 (7)操作步骤 (8)结果判断 (10)技术资源 (10)典型数据 (10)性能 (11)■ 精密度 (11)■ 回收率 (11)■ 线性 (11)声明 (12)Intended use (13)Character (13)Test principle (13)Kit components & Storage (14)Other supplies required (15)Sample collection (15)Note (16)■ Note for kit (16)■ Note for sample (16)Dilution Method (17)Reagent preparation (17)Assay procedure (18)Calculation of results (20)Technical resources (20)Typical data (20)Performance (21)■ Precision (21)■ Recovery (21)■ Linearity (21)Declaration (22)用途该试剂盒用于体外定量检测人 血清、血浆或其他相关生物液体中EPO浓度。
ELISA检测p16_INK4a_蛋白用于宫颈癌筛查方法建立及应用
过氧化物酶溶液 ( SP 免疫组化染色试剂盒) 均购于 福州迈新 生物技术 开发公司。酶标 仪为 Multiskan Ascent ELISA reader( Labsystems) 。 1. 2 免疫组化方法检测宫颈活检组织中 p16INK4a的 表达 用活检组织的石蜡标本切片 4 m, 烤片并脱 腊至水。一抗为 16INK4a单克隆抗体, 显色用 DAB 显 色液, 苏木素复染, 中性树胶封片, 显微镜下观察。 1. 3 ELISA 方法检测宫颈脱落细胞 p16INK4a的表达
将棉签拭子插入装有 1 ml 生理盐水的试管中震 荡洗脱宫颈细胞, 离心洗涤一次去上清, 加入 300 l 蒸馏水于- 20 ∀ 充分冻融 2 次以裂解细胞, 取上清 - 20 ∀ 保存备用。以 p16INK4a多克隆抗体包被酶标 板, 检测时 取出标本蛋白样品, 酶标板 中每孔加入 100 l 样品, 然后加入检测单克隆抗体, 四甲基联苯 二胺( TMB) 显色液, 450/ 620 nm 双波长测定吸光度。 每个样本设 2 个重复, 以 PBST 为阴性对照, 已知免 疫组化 p16INK4a蛋白强阳性的宫颈癌细胞样本设为 阳性对照。
( 收稿日期: 2009- 11- 11)
文章编号: 1007- 4287( 2010) 10- 1632- 03
ELISA 检测 p16INK4a蛋白用于宫颈癌筛查方法 建立及应用
丁 莉, 邹先进* , 蔡 兰, 姚爱香
( 荆门市第一人民医院, 湖北 荆门 448000)
பைடு நூலகம்
宫颈癌是由人类乳头瘤病毒( HPV) 感染所致, 持续感染 HPV 的 宫颈 上皮细 胞内 p16INK4a 表达 升 高[ 1] 。P16INK4a是宫颈癌及癌前病变的生物标志物, 与宫颈癌 的预后[ 2- 3] 、分级密 切相关[ 4] , p16INK4a 的 表达水平越高, 宫颈上皮病变 越重[ 5, 6] 。我们 用免 疫组化方法检测宫颈活检组织标本 p16INK4a的表达, 并用 ELISA 方法检测宫 颈脱落细胞中 p16INK4a 的表 达。 1 材料与方法 1. 1 标本收集与试剂来源 2006 年7 月至 2008 年 1 月到我院妇科就诊的活体组织 学检查标本 1 356 例。在进行活检之前, 所有病例先用无菌棉签拭子 在宫颈口旋转 2 周提取脱落细胞。在阴道镜下行宫 颈活体组织取材送病理组织学检查。ELISA 检测使 用的 p16INK4a抗体购自 abcam 公司; 免疫组织化学检 测使用的 p16INK4a单克隆抗体为 Neomarkers 公 司生 产, 生物素标记的第二抗体及链霉菌抗生物素 ! ! !
ELISA_kit使用说明书
微囊藻毒素ELISA检测试剂盒使用说明书Microcystin Plate Kit一、基本原理酶联免疫（ELISA）是免疫酶技术的一种，是将抗原抗体反应的特异性与酶反应的敏感性相结合而建立的一种新技术。
ELISA的技术原理是：将酶分子与抗体（或抗原）结合，形成稳定的酶标抗体（或抗原）结合物，当酶标抗体（或抗原）与固相载体上的相应抗原（或抗体）结合时，即可在底物溶液参与下，产生肉眼可见的颜色反应，颜色的深浅与抗原或抗体的量成比例关系，使用ELISA 检测仪，即酶标仪，测定其吸收值可做出定量分析。
此技术具有特异、敏感、结果判断客观、简便和安全等优点，日益受到重视，不仅在微生物学中应用广，而且也被其他学科领域广为采用。
本试剂盒工作原理如下图所示。
二、已配试剂ELISA试剂盒中配备以下条目：1、96孔已包被好的酶标板2、1只阴性对照即0孔溶液3、标准1：0.1ng/mL的MC-LR标准溶液4、标准2：0.2ng/mL的MC-LR标准溶液5、标准3：0.5ng/mL的MC-LR标准溶液6、标准4：1ng/mL的MC-LR标准溶液7、标准5：2.5ng/mL的MC-LR标准溶液8、1瓶溶液1 (单抗)9、1只溶液2(二抗稀释液)10、一只二抗（小管乘装）11、1瓶溶液3（底物溶液）12、1瓶溶液4 （终止液）13、1袋固体PBS（配置洗涤液用）三、需配器材及试剂除试剂盒内的物品外，还需配备以下器材和试剂：1、酶标仪（若可能，可配有洗板机）2、微量移液器（100 L）（若可能，可配8道或12道微量移液器）3、吸管、橡皮吸头（洗板时用，若有洗板机，无需准备此项）4、纯水（用于配置洗涤液）5、玻璃瓶（盛装洗涤液）6、记时器（准确控制每步操作时间）7、封口膜（防止孔内液体挥发）四、酶标二抗的配置将小管中二抗用溶液2按1:3000稀释，充分溶解混匀，现用现配。
五、洗涤液的配置将固体PBS以纯水配置成1L溶液，加1mL Tween 20（PBS-T, pH7.4-7.6），室温保存。
人白介素6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
人白介素6（IL-6）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：15.6pg/ml-1000pg/ml最低检测限：3.9pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-6，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-6含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述白细胞介素或白介素（interleukin，IL）是一组细胞因子（分泌的信号分子）。
最早发现在白细胞中表达作为细胞间信号传递的手段。
实际上，白细胞介素可以由多种细胞产生。
免疫系统的功能，在很大程度上依赖于白细胞介素。
一些罕见的白细胞介素缺陷不足都常出现自身免疫性疾病或免疫缺陷。
IL-6是一种分子量为26ｋＤ的蛋白质，由184个氨基酸组成。
最初人们只发现其在白细胞中合成并在白细胞间发挥作用而命名。
随研究的不断进展，人们逐渐发现不仅激活的淋巴细胞、单核巨噬细胞可以合成和分泌IL-6，而且骨髓细胞和部分肿瘤细胞等也可以产生IL-6。
其作为一种机体在免疫应答中产生的重要介质,具有多种生物学活性。
IL-6是一种多效性细胞因子，能调节多种细胞功能，包括细胞增殖、细胞分化、免疫防御机制及血细胞生成等。
IL-6与多种肿瘤发生、发展关系密切，它通过干预细胞的黏附性和活动力、血栓形成、肿瘤特异性抗原的表达及肿瘤细胞的增殖,从而影响肿瘤的进展。
它还能调节多种细胞功能,包括细胞增殖、细胞分化、免疫防御机制及血细胞生成等。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-6抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-6抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
IL-6ELISA试剂盒操作说明（RD）
IL-6 ELISA试剂盒操作说明（R&D）注意：1.Calibr ator Diluen t RD6F 包含叠氮化钠（可能与铅和铜的管道）形成爆炸的金属叠氮化合物。
处理期间用大量的水冲洗。
2.该盒的终止液为酸溶液。
使用时戴眼睛、手、脸和衣服的防护。
试剂准备：1.使用前将所有试剂平衡至室温。
2.洗液（Wash Buffer）：如果浓缩液中已经形成结晶，平衡至室温，并轻轻地摇晃直到结晶完全溶解。
加入去离子水或蒸馏水稀释20ml浓缩洗涤液至500m l。
3.底物溶液（Substr ate Soluti on）：显色试剂A和B应该在使用前15m in以等体积混合。
避光保存。
每孔需要200ul生成的混合物。
4.IL-6标准品（IL-6 Standard）：使用5ml标准稀释液R D5T（Calibr atorDiluen tRD5T）（适用于细胞培养上清液样本）或标准稀释液R D6F（Calibr atorDiluen t RD6F）（适用于血清/血浆样本）重新配制IL-6标准品。
重新配制的产品为300pg/ml贮存液。
稀释前允许将标准品至少轻轻搅拌15min。
5.吸取适当的标准稀释液667ul到100pg/ml EP管，500ul稀释液到其它EP管中。
适用贮存液配制一系列的稀释液（如下）。
进行下一次转移前充分地混匀各个E P管。
没有稀释的标准品作为高标准。
适当的标准稀释液作为0标准（0pg/ml）。
测定步骤：使用前将所有试剂和样本平衡至室温。
推荐所有的样本、标准和对照测定双份。
1.如前所示，准备所有的试剂和工作标准品。
2.取下多余的微量培养板条，放回装有干燥剂的锡箔袋中，重新密封。
3.每孔加入100ul AssayDiluen t RD1W。
人淋巴细胞因子ELISA试剂盒说明书
人淋巴细胞因子ELISA试剂盒说明书
人淋巴细胞因子ELISA定量检测试剂盒等ELISA试剂盒检测类型：双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞争法测抗原、捕获包被法测抗体、ABS-ELISA法。
我司人淋巴细胞因子ELISA定量检测试剂盒等ELISA试剂盒，灵敏性高，高效性，原装进口抗体，吸附均匀、吸附性好，回收利用率高、可靠性强，无效包退包换，公司提供免费代测服务，各种种属ELISA 试剂盒产品齐全，质量可靠。
详情可来电咨询销售人员或咨询我司在线客服。
人淋巴细胞因子ELISA定量检测试剂盒操作步骤：
1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl （样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2、温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
6、显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
7、终止：每孔加终止液50µl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
试剂盒使用说明书
大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1使用目的：本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），药物、血清和尿样中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）残留的定量检测。
2实验原理本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原，加入大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品或样品，游离大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）与微孔条上预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原互相竞争抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）含量成反比，通过标准曲线计算样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）的含量。
3试剂盒组成3.1预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ug/ml, 0.1ug/ml,0.3ug/ml,0.9ug/ml,2.7ug/ml,8.1ug/ml3.3抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
3.4显色液A：1瓶（6ml）。
3.5显色液B：1瓶（6ml）。
3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7样本稀释液：1瓶（10×,6ml），用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9说明书一份。
4需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波长450nm酶标仪。
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人P16ELISA试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人P16的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P16水平。
用纯化的人P16抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入P16，再与HRP标记的P16抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的P16呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人P16浓度。
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备
用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为120ng/L，80ng/L ，40ng/L，20ng/L，10ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
5ng/L -150ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。