化学检测技术

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(b)蒸馏：目的：碱化蒸馏使氨游离。加10～50ml 30%氢氧化钠，防止漏气。 (c)吸收：5mL 2％H3BO3吸收或一定量标准酸溶液（如25mL 0.05mol/L H2SO4)＋甲基红－溴甲酚绿几滴 (d)滴定计算： 若H3BO3吸收：0.01mol/L Hcl滴定至绿色→ 淡紫红色 样品中的总氮量（mg)=（A-B)×C×14×n 若标准硫酸接收：0.1mol/L标准NaOH滴定，甲基红→黄 色终点
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碘量瓶中，10mL0.1mol/L碘液＋15mL0.1 mol/LNaOH＋5mL空白 液，摇匀后暗反应15min＋1mL1mol/L硫酸溶液，用0.05mol/L 硫代硫酸钠滴定至浅黄色，加0.2mL0.5％淀粉液作指示剂，滴 定至蓝色消失，记录V0 (4)样品滴定：以5mL样品液代替空白液， V1 (5) 计算： 醛糖含量＝ （V0 － V1）C× M × n 注意：暗反应后需酸化再滴定，滴定时开始轻摇（碘挥发）， 后再摇（淀粉吸附碘）
配合次甲基蓝法测定某些糖含量（如：果糖）
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3、 铜试剂法
将还原糖与二价铜离子反应生成的Cu2O用碘氧化，再用 硫代硫酸钠滴定反应液中剩余的碘而测定样品还原糖的含量。

（1）铜试剂的配制
主要提供二价铜离子及碘

（2）标准曲线的制作
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(a)标准葡萄糖液的配制 0.1%或0.05％（根据所用铜离子试剂定） (b)三角瓶编号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液（mL ) 0 1 2 3 4 5 蒸馏水（mL ) 5 4 3 2 1 0 铜试剂（mL ) 5 5 5 5 5 5
样品中总氮量=（C1V1-C2V2) ×14×n

粗蛋白含量＝样品的总氮量×6.25
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2、双缩脲试剂法
一 、 糖类的化学检测

糖类包括多糖、双糖、单糖 单糖和某些双糖具有游离羰基——还原糖

多糖和蔗糖等无还原性——非还原糖
糖类化学检测主要是利用游离羰基的还原性质，与试剂 （氧化剂）进行氧化还原反应而进行测定的。


非还原糖必须转化为还原糖再进行测定
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最常用的试剂：斐林（Fehling）试剂
腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失， 耗标准葡萄糖液（0.1％或0.2％）V2mL。

（b）定糖
A、B各5mL＋10mL样品糖液（250mL三角瓶中）摇匀，补加
（V0-V2）mL水，并从滴定管中预先加入（V2-1)mL标准葡萄糖液，
摇匀后加热加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖 液滴定至蓝色消失（滴定在1min内完成），记录消耗标准葡萄糖 液的总毫升数V。
基本组成：
A：CuSO4溶液
B: NaOH和酒石酸钾钠溶液 使用时A、B等体积混合(生成酒石酸钾钠铜）

酒石酸钾钠铜是氧化剂，可与还原糖的游离羰基发生 氧化还原反应，而进行糖的测定。
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定糖常用方法

1、兰—爱农（Lane-Eynon）法 次甲基蓝（亚甲基蓝、四甲基蓝）法、
（置换法、直接滴定法）

Байду номын сангаас
反应终点用次甲基蓝指示剂显示（还原糖滴定斐林试剂，由 于次甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜全部还原后，过
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(3) 计算

还原糖含量（以葡萄糖计）
＝（V0-V) × c × (1/10 )×n
注意： （a）AB分开储存，防止Cu++变化，临用混合 （b）单标移液管吸液准确，外壁也需擦干净 （c）体积需控制在一定范围内，对pH有影响 （d）煮沸时间要一致 （e）注意指示剂加入时间和加入量一致 （f）滴定速度一致（后滴定0.5～1mL，1min内完成） （g）产物Cu2O不稳定，次甲基蓝变色也不稳定，暴露于空气 6 或沸腾颜色变化，滴定过程不能摇动，不可中途中止加热
量1D还原糖使次甲基蓝还原，蓝色消失）

多糖或其他非还原糖需转化为还原糖后再滴定如淀粉，可用 酸解或酶解
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操作要点

（1 ）斐林试剂的标定
（a）标定预备试验
A、B各5mL＋10mL水（250mL三角瓶中）摇匀，加热至沸腾，＋
2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失，耗标准葡 萄糖液（0.1％或0.2％）V1mL。
（b）标定
A、B各5mL＋10mL水（250mL三角瓶中）摇匀，从滴定管中预先
加入（V1-1)mL标准葡萄糖液，摇匀后加热至沸腾，＋2D1％次甲基
蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失（滴定在1min内完成）， 记录消耗标准葡萄糖液的总毫升数V0
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(2) 定糖
（a）定糖预备试验
A、B各5mL＋10mL样品糖液（250mL三角瓶中）摇匀，加热至沸

沸水浴10min，冷却至室温, (c)各加入0.5mol/L硫酸5mL，振荡，待红色Cu2O完 全溶解后，用硫代硫酸钠滴定至终点，记录耗用量V (d) 绘标准曲线 葡萄糖含量（mg）为纵坐标，（V0-V)为横坐标
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二、 蛋白质和氨基酸的化学检测

蛋白质含氮量几乎恒定，平均16％ 测出N含量×6.25，即为蛋白质量
含氮量 肉、蛋、豆 16％ 面粉 17.6％ 奶品 15.7％ 花生 18.2％ 鲑精蛋白 31.5％ 每克N相当蛋白质量 6.25 5.70 6.38 5.50 3.17
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eg：

蛋白质常用检测方法
1、定氮法（经典的，仲裁的）
凯氏定氮法或微量凯氏定氮法 （1）原理
消化、蒸馏、吸收、滴定计算 （2）操作要点 (a) 消化：目的：使样品中的蛋白质分解，其中氮与硫酸 反应生成(NH4)2SO4 凯氏定氮瓶，样品＋K2SO4-CuSO4、浓H2SO4, 通风厨 内进行，消化液全部移入100mL容量瓶定容。 13

斐林试剂快速法： 在斐林试剂中加入亚铁氰化钾（黄血盐）反应终点 为蓝色消失，淡黄色出现。反应终点比兰－爱农法更
为明显。
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2、 碘量法

I2→ NaIO(氧化剂）
其氧化能力较弱，仅适用于醛糖的测定，与酮糖不起反应 操作要点：

（1）标准硫代硫酸钠溶液配制，0.05 mol/L，沸腾后冷却水
配制，存放在棕色瓶中，一周后用标准重铬酸钾标定。 （2）标准碘液配制，0.1mol/L （3）空白滴定：空白液，用硫代硫酸钠滴定试剂中全部碘