实验4、植物组织中过氧化氢酶的活力测定

三、材料、试剂与器具
1.材料：小麦叶片 2.试剂 （1）10% H2SO4； （2）0.2mol/L磷酸缓冲液pH7.8； （3）0.02mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g， 用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标 定； （4）0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取 30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定； （5）0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4 · 2O 12.607g，用 2H 蒸馏水溶解后，定容至1L。
3.滴定

五、计算

酶活力用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示 酶活(mgH2O2/g· min)= ( A B ) VT 1.7 式中：
FW V 1 t
A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数；
VT—酶液总量（ml）；
V1—反应所用酶液量（ml）； F W—样品鲜重（g）；
1.7—1ml 0.1mol/L的KMnO4相当于1.7mg H2O2
六、研讨题

1.影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些? 2.过氧化氢酶与哪些生化过程有关? 3.过氧化氢酶的活力测定还有另外一种方法，即紫外吸收 法，原理是H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢 酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间 而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶 的活力。请你查阅资料设计一个应用该方法测定过氧化氢 酶活力的实验。
3.器具 （1）恒温水浴； （2）研钵；三角瓶50ml×4；酸式滴定管 （10ml）；容量瓶25ml×1等
四、实验步骤
1.酶液提取

取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量， 研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液 冲洗研钵，并将缓冲洗液转入容量瓶中，用同一 缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为 过氧化氢酶的粗提液。

据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测
定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量
（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，
用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多 余的H2O2，即可求出消耗的H2O2的量。

5 H2O2 +2KMnO4+4H2SO4
=5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4
2.反应

取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照），测定 瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入煮死酶液 2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时， 于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。
用0.02mol/L KMnＯ4标准溶液滴定H2O2，至出现 粉红色（在30S内不消失）为终点。
实验七、植物组织中过 氧化氢酶活力测定
——高锰酸钾滴定法
一、实验目的
百度文库
1.掌握酶活力测定的方法

2.了解过氧化氢酶在生物体中的作用原理
二、实验原理

过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶，含有铁，
它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过
程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化
剂又是还原剂。

R(Fe2+)+H2O2 = R(Fe3++OH－) R(Fe3+OH－)2+H2O2 = R(Fe2+)2+2H2O+O2