其它革兰阴性杆菌

革兰染 色镜检
生化 反应
直接荧光 抗体染色
毒力试验
血清学试验
百日咳鲍特菌检验程序
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1．分离培养：B-G培养基、 CCBA
2．毒力试验：纯培养液注射动物 3．血清学试验： （1）玻片凝集：用Ⅰ相抗血清 （2）直接荧光抗体染色：外周绿色荧光，中心暗色的球杆菌 （3）ELISA快速诊断法：测患者血清中的IgM类抗体 4．核酸检测 ：PCR，具有高度的敏感性和特异性
化后再接种
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血液、脑脊液
增菌培养 35℃
鼻咽拭子、痰液、脓液
脑脊液
分离培养：巧 克力平板
直接涂片染色
革兰阴性小杆菌，多形性 初报
35℃
5%-10%CO2
可疑菌落 鉴定 菌落特征 菌体形态 卫星现象 X、V因子需求试验 报告 流感嗜血杆菌检验程序
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分型 吲哚、尿素酶、鸟氨酸脱羧酶（生物分型） 荚膜肿胀试验（荚膜多糖抗原分型）
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Legionella pneumophila
BCYE 平板（含 L-半胱胺酸和铁离子）
BCYE 平板（不含 L-半胱胺酸和铁离子）
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BCYE：3～5天形成1～2mm的灰白色、圆形凸起、湿润有光泽的菌落。
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+ 生化反应
氧化酶±或-，触酶+，水解明胶和淀粉，嗜肺军团菌能水解马尿酸盐， 硝还-，尿素酶-，不发酵糖类
+ 生化反应：
氧化酶（+）、触酶（+）、不发酵任何糖、枸（－）、 IND（－）、尿素（－）、硝（－） + 两种抗原： 耐热菌体抗原（O抗原，鲍特菌的共同抗原）和不耐热表 面抗原（K抗原） + 变异： Ⅰ Ⅱ－Ⅲ（过渡型） Ⅳ，即Ⅰ相菌变为无荚膜、无毒力的 Ⅳ相菌，可逆
（ 新分离的百日咳鲍特菌有荚膜、毒力强，菌落光滑，称Ⅰ相菌）
毒素混合，制成了“白百破”（DPT）三联疫苗进行人工主动免疫， 效果较好）
2、临床治疗首选红霉素类，次选氨曲南及磺胺
增效剂（SMZ-TMP）
3、对青霉素不敏感，大多数菌株对四环素耐药
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+ 军团菌属(Legionella)是一类需氧、革兰染色阴性杆菌。
本属细菌包括39个种，61个血清型。对人致病的主要是嗜 肺军团菌（Legionella pneumophila）。该菌最早发现于 1976年7月，在美国费城召开退伍军人大会期间，突然爆 发流行原因不明的肺炎，与会者149人，有34人死亡。 1977年从当时死者肺内分离到，命名为军团菌。1978年美 国CDC正式命名为嗜肺军团菌
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血清学试验
菌落特征 菌体形态 卫星现象 X、V因子需求试验 直接荧光抗体法 沉淀试验 荚膜肿胀试验
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+ 药敏试验：K-B法 + 培养基：HTM + 质控菌株：（ATCC49247） + 需常规检测β-内酰胺酶
+ 耐药机制是：
1.由质粒介导的β-内酰胺酶基因TEM-1型 2.由染色体介导的PBP（青霉素结合蛋白）的改变 3.对氯霉素、四环素耐药与R质粒相关
+ 抵抗力 ：
抵抗力不强，56℃30分钟或日光照射1h可杀死本菌，对 干燥及多种消毒剂敏感，对青霉素不敏感，培养基中加入 青霉素可抑制杂菌生长
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+ 标本采集
发病早期用咳碟法或鼻咽拭子采样
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检验程序
革兰染色镜检
直接荧光抗体染色 ELISA快速诊断 核酸检测
鼻咽分泌物、痰
分离培养
含青霉素的 35℃2-5天 B-G培养基、 CCBA 可疑菌落
分离培养 培养条件：
营养要求高 需要X、V因子 生长温度为35℃ 初分离需5%-10%CO2
X 、 因 子 需 求 试 验 V 流感 杜克雷
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巧克力琼脂培养基
菌落特征：巧克力琼脂培养基上较小、灰白、光滑、湿润、似露滴状
•流感嗜血杆菌巧克力琼脂养基菌落
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卫星现象
卫星现象：当流感嗜血杆菌与
金黄色葡萄球菌在BAP上共同 培养时，由于后者能合成V因 子释放于培养基中，故在金黄 色葡萄球菌周围，流感嗜血杆 菌菌落较大，远离金黄色葡萄 球菌菌落则小
继发于
流行性感冒 百日咳 麻疹 结核病
慢性支气管炎 临床表现 中耳炎 鼻窦炎
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标本采集
根据不同感染分别采集鼻咽拭子、痰液、脑脊液、脓液、
血液等
标本采集原则：
+ 在疾病早期采取标本，立即送检 + 在取鼻咽拭子标本时以肉汤湿润，防止干燥 + 对心内膜炎、菌血症患者取血液标本 + 痰液标本，应用无菌生理盐水洗涤，浓痰可用菠萝蛋白酶或胰蛋白酶消
1
+ 嗜血杆菌属 + 鲍特菌属 + 军团菌属
+ 布鲁菌属
+ 巴斯特菌属
+ 弗朗西斯菌属
2
返回
3
嗜血杆菌属为一群无动力、无芽胞、营养要 求高（人工培养需新鲜血液或X、V因子 ）的革兰 阴性小杆菌 分类
+ + + + + + + + +
嗜血杆菌属（Haemophilus）隶属于巴斯德菌科，包括多个种，其 中与临床有关的有以下9个种 流感嗜血杆菌（H.influenzae） 副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae） 溶血嗜血杆菌(H.haemolyticus) 副溶血嗜血杆菌（H.parahaemolyticus） 杜克雷嗜血杆菌（H.ducreyi） 埃及嗜血杆菌（H.aegyptius） 嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus） 副嗜沫嗜血杆菌(H.paraphrophilus) 迟缓嗜血杆菌（H.segnis）
其中百日咳鲍特菌是本属的代表模式菌株，是主要的致病菌，
引起百日咳。副百日咳鲍特菌可引起急性呼吸道感染，支气管败血鲍 特菌偶尔可感染人类，其他鲍特菌只感染动物
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+ 是百日咳的致病菌 + 一年四季均可发病，冬春季多发，小儿多于成人 + 传播途径：飞沫经呼吸道传播 + 传染源：早期患者和带菌者 + 潜伏期：1~2周 + 致病物质：主要有百日咳毒素(PT)、丝状血细胞凝集素 (FHA)
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6种鲍特菌生化特征
动力 氧化酶 脲酶
百日咳鲍特菌 副百日咳鲍特菌 支气管炎鲍特菌 + + + + +
枸橼酸盐利用
+ +
硝酸盐还原
+
鸟鲍特菌 欣氏鲍特菌
霍氏鲍特菌
+ +
-
+ +
-
-
+
-
-
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1、本菌的感染以预防接种为主，进行控制（我国选用
有荚膜的Ⅰ相百日咳鲍特菌死菌苗与白喉棒状杆菌及破伤风梭菌的类
军团菌传播的主要途径



建筑屋顶的冷却塔飘逸出来的含有军团病菌 的水汽经气流运动，从本建筑中央空调系统 的新风入口，或是通过外窗等途径，进入建 筑物内部，从而造成室内人员的感染 建筑屋顶的冷却塔飘逸出来的含有军团病菌 的水汽经气流运动，飘散至邻近建筑的中央 空调系统的新风入口，或是通过其外窗等途 径，进入邻近建筑物内部，从而造成其室内 人员的感染 建筑屋顶的冷却塔飘逸出来的含有军团病菌 的水汽经气流运动，飘散至周围的环境之中， 造成周边范围内人员的感染
+ 由于整个病程较长，未经治疗的病人病程可持续两三个月，
故名百日咳 + 细菌仅存在于呼吸道上皮细胞表面，不进入血流 + 感染后可获得持久免疫力，再次感染少见
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+ + +
革兰阴性短小杆菌 无鞭毛、无芽胞、光滑型菌株有荚膜 专性需氧，最适温度35 ℃
+
营养要求高，初次分离培养需用含有
甘油、马铃薯、血液的鲍-金（B-G） 培养基：经35～37℃培养3～5天后，
5
生物学特性 形态与染色 + 革兰阴性短小杆菌 + 初分离常呈球杆状， 有时呈逗点状、杆状、 丝状等多形态 + 无芽孢、无鞭毛 + 粘液型菌株有荚膜且 毒力强
6
培养特性
+ + + +
需氧或兼性厌氧 最适温度35℃ 初分离需5%-10%CO2 营养要求高、在生长过程中需含有生长因子X（高铁血红 素 ）和V（辅酶I或Ⅱ） + 巧克力平板：较小、灰白、光滑、湿润、似露滴状 + 卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在BAP上共 同培养时，由于后者能合成V因子释放于培养基中，故在 金黄色葡萄球菌周围，流感嗜血杆菌菌落较大，远离金黄 色葡萄球菌菌落则小
形成细小、光滑、凸起、灰白色有珠
光色泽的菌落，菌落周围有狭窄的溶 血环
+
人工多次传代后，营养要求渐低，毒 力消退
+
液体培养基：均匀混浊，少量粘性沉 淀 百日咳鲍特菌革兰染色
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CCBA琼脂平版（添加10%去纤维马血的木炭琼脂）：
形成光滑、有光泽、水银样的菌落
•百日咳鲍特菌在CCBA培养基的菌落
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+ 抗原构造与分型
嗜肺军团菌有O抗原（有特异性）和H抗原（无特异性），根据O抗原 分为15个血清型（Lp1～Lp15），我国分离的嗜肺军团菌主要为1型 （Lp1）和6型(Lp6)
+ 抵抗力
抵抗力强，水中活数月，在人工管道的水源中常见，如医院空调冷却 水、淋浴头、辅助呼吸机等所产生的气溶胶颗粒中均存在此菌，对常 用化学消毒剂敏感 ，但对酸的抵抗力强，PH 2.0 HCL中活30min
菌种 流感嗜血杆菌 副流感嗜血杆菌 溶血嗜血杆菌 副溶血嗜血杆菌
杜克雷嗜血杆菌
埃及嗜血杆菌 嗜沫嗜血杆菌 副嗜沫嗜血杆菌
软下疳，为性传播病菌。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。
急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热 咽部正常菌群、牙菌斑中常见菌、偶致心内膜炎和脑脓肿 咽部及阴道正常菌群，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血 症、甲沟炎、脑脓肿、脑膜炎。
腺苷酸环化酶毒素 (ACT)三种，此外还有气管细胞毒素、
皮肤坏死毒素
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临床表现：
病程分为三期 1.卡他期：1~2周，明显卡他症状（咳嗽、流涕、打喷嚏、 鼻塞等上呼吸道症状 ），传染性强，感染标本培养阳 性率高
2.痉挛期：1~4周，阵发性剧烈咳嗽，直至咳出粘稠的痰
液或呕吐为止 3.恢复期：1~2周，阵咳减轻，渐趋停止
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致病性
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传染源：被污染的各种水源 传播途径：含军团菌的气溶胶通过空气由人直
接吸入肺泡发病
易感人群：免疫力尤其是细胞免疫力低下者 流行季节：夏、秋季 发病率：WHO估计为12/10万，医源性肺炎占
第二位，25%，CAP欧盟资料约10%
死亡率：未经正确治疗时高达20%-50%！
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40
易感人群

很少發生於20歲以下的人，患病最多者年齡為40-70歲 病征的嚴重性跟年齡成正比 男女比例 - 3:1


吸煙者，患糖尿病者，患長期性肺疾者，患腎病者，及癌 病者，有更大機會導至嚴重病情
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+ 致病物质
本菌的主要致病物质包括微荚膜、菌毛、毒素和多种酶类。 军团菌产生的吞噬细胞活化抑制因子有磷酸酶、核酸酶和 细胞毒素等，能抑制吞噬体与溶酶体融合，故不仅不被杀 死，反而可在细胞内生长繁殖导致细胞的死亡
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几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病
常栖部位及所致疾病 寄居于正常人呼吸道，引起原发化脓性感染及继发性感染，包 括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。 口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。 鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。 口腔、咽部正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜 炎
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+ 培养特性 为需氧菌，多数菌株在2.5%～5%CO2环境中生长 良好，最适生长温度为35℃ 营养要求特殊，营养琼脂和血琼脂不生长，需加 L-半胱氨酸和铁离子的培养基才能生长 在活性炭-酵母浸出液琼脂（BCYE）：3～5天形成 1～2mm的灰白色、圆形凸起、湿润有光泽的菌落。 在费-高（F-G）培养基：3～5天培养可见针尖大 小菌落，紫外线照射下可发出黄色荧光
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+ 有荚膜多糖抗原和菌体抗原两种。根据荚膜多糖
抗原（具有型特异性）分abcdef六型，b型毒力最 强 + 抵抗力：弱，对热和干燥、消毒剂均敏感 + 致病物质 荚膜：抗吞噬 菌毛：粘附、定植 内毒素：致病作用尚不清 IgA蛋白酶：水解sIgA + 免疫性 病后有免疫力
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流感嗜血杆菌所致疾病 ：
该菌较广泛地寄居于正常人呼吸道

分布：极其广泛，遍布于天然水源(河水，湖水，川水) ， 泥土及人工水源(空调水塔，挥发式冷凝器，冷熱水供应 系統，淋浴设备等)
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+ 形态与染色
革兰阴性杆菌，有时呈丝状，，有端生或侧生鞭毛，有微 荚膜，无芽胞。常规染色方法菌体不易着色，用姬美耐染 色，菌体呈红色，背景为绿色。用苏丹黑B作脂肪染色， 可观察到细胞内有蓝黑色或蓝灰色颗粒
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第二节 鲍特菌属（Bordetella）
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鲍特菌属（Bordetella）是一类革兰阴性球杆菌，包括以下7个种
+ 百日咳鲍特菌(B.pertussis) + 副百日咳鲍特菌（B.parapertussis） + 支气管败血鲍特菌(B.branchiseptica) + 鸟鲍特菌(B.avium) + 欣氏鲍特菌(B.hinzii) + 霍氏鲍特菌(B.holmesii) + 创口鲍特菌(B.trematum)