微球蛋白实验报告

微球蛋白实验报告

均相免疫发光法检测β2-微球蛋白的含量实验一：xx.1.4

一.实验目的：通过均相免疫发光方法检测β2-微球蛋白标准品（双抗体夹心法），建立血清中β2-微球蛋白的检测方法。

二.实验材料：

1.A 液：包被抗人β2-微球蛋白抗体的受体球（1mg/ml）

2. B 液：生物素化抗人β2-微球蛋白抗体

3. C 液：β2-微球蛋白标准品

4. D 液：供体球工作液

5. E 液：β2- 微球蛋白标准品稀释液： PH

7.8 Tris-HCL 缓冲液。

三.实验方法：

1.试剂准备：

1.1 A 液做1:100 稀释：在 EP 管中加入450ul PH

7.4 0.01M PBS 液，加入

4.5ul 受体球，混匀。

1.2 B 液用原液做1:1000 稀释：在 EP 管中加入1ml 生物素稀释液，加入2ul 生物素标记的抗体制备成1:500 的抗体，另取一个 EP 管，加入220ul 生物素稀释液，再加入220ul1:500 的抗体，混匀。

2.实验步骤：

2.1 加入 A 液.B 液.C 液各25μl，充分混匀，上机器37℃

震荡温育15min。

2.2 避光加入125μl D 液，充分混匀，上机器37℃震荡混

匀10min。

2.3 直接机器读数。

四.标准品的配制：配制 c0:0mg/l c1:0.5mg/l c2:1mg/l c3:

2.5mg/l c4:5mg/l c5:10mg/l8mg/l β2-微球蛋白

12mg/lβ2-微球蛋白等体积混合，得到10mg/l β2-微球蛋白倍比稀释后，得到5mg/l β2-微球蛋白倍比稀释后，得到

2.5mg/lβ2-微球蛋白1:5 稀释，得到1mg/lβ2-微球蛋白倍

比稀释，得到0.5mg/lβ2-微球蛋白标准品稀释步骤：

1.8mg/l :600ul +12mg/l:600ul,等体积混合后，得到 c5：

10mg/l

2.取 c5600ul，倍比稀释：600ul+600ul E 液，得到

c4:5mg/l

3.取 c4300ul，倍比稀释:300ul+300ul E 液，得到 c3:

2.5mg/l

4.另取 c4300ul，1:5 倍稀释：300ul+1200ul E 液，得到

c2:1mg/l

5.取 c2300ul，倍比稀释：300ul+300ul E 液，得到

c1:0.5mg/l

四.实验结果：标准品浓度（mg/l）信号值

0670.59381191632.5680854706104022五.结果讨论：

1.随标准品浓度越高，信号值越低，说明反应存在钩状效应。应进一步稀释标准品浓度，作出标准曲线。

2.不排除有人为因素，所以需要进行重复实验。实验二：xx.1.5

一.实验目的：由于实验一存在钩状效应，所以进行标准品浓度稀释，看能否做出标准曲线。

二.试剂配制：取标准品 c2 :1mg/l，稀释其至

1:10.1:100.1:1000.1:10000.1:100000.

1.取 C2:1mg/l10ul+90ul E 液，得到1:10 稀释度。

2. 取1:10 稀释度液10ul+90ulE 液，得到1:100 稀释度

3. 取1:100 稀释度液10ul+90ulE 液，得到1:1000 稀释度

4. 取1:1000 稀释度液10ul+90ulE 液，得到1:10000 稀释度

5. 取1:10000 稀释度液10ul+90ulE 液，得到1:100000 稀释度

三.实验步骤：

3.1 加入 A 液.B 液.C 液各25μl，充分混匀，上机器37℃震荡温育15min。

3.2 避光加入125μl D 液，充分混匀，上机器37℃震荡混匀10min。

3.3 直接机器读数。

四.实验结果：标准品浓度信号值

05510.000013740.0001619.50.00121050.0114513.50.1223640.51 9281117885.52.514771511250.5107987.5选取

0,0.0001,0.001,0.01,0.1，绘制出标准曲线。

五.实验讨论：

1.选取 0.02,0.04 两个点以及之前的浓度，绘制标准曲线

2.选用范围内已知浓度的标准品定值，绘制准确的标准曲线

3.为避免由于实验一带来的人为因素干扰，重复实验一。