马铃薯品质测定方法

（三）薯块淀粉含量测定：高氯酸水解-蒽铜比色法：

（1）实验原理：用乙醇溶液去除饲料样品中的可溶性糖，再用高氯酸溶液溶解残留物中的淀粉，使淀粉与其他成分分离，在浓硫酸的作用下，蒽酮与淀粉反应生成蓝绿色的化合物，用分光光度计测定在640 nm 下的吸光度.试剂配制：80％乙醇溶液；52％高氯酸溶液；蒽酮试剂(将0.4 g 蒽酮溶于100 mL88％硫酸溶液中，现用现配)；淀粉标准液(将200 mg 淀粉倒入100mL 烧杯中，加入5 mL 蒸馏水，加入65 mL52％高氯酸溶液，搅拌全部溶解，转入100 mL 溶量瓶中，加水定容，浓度2 mg／mL；取上述标准淀粉溶液10.00 mL 于250 mL 溶量瓶中，加水定容，此淀粉溶液的浓度为80 ug／mL. )

（2）标准曲线：在洁净的试管，分别加入0µL、250µL、500µL、1000µL、1500µL、2000µL 淀粉标准液，每一个浓度3个重复，加水调整各试管溶液均为2.00 mL，在冰水中冷却2 min 加入6.00 mL蒽酮－硫酸溶液，摇匀，在冰水中冷却2 min，将试管放入沸水中5 min，各试管显色呈蓝绿色，取出试管，冷却至室温。用2.00 mL 蒸馏水按照上述操作作为空白参比，于640nm 波长下比色，测定各试管溶液的吸光度。以吸光度为横坐标，淀粉浓度作为纵坐标，绘制工作曲线，进行曲线拟合，得到吸光度和淀粉浓度之间的回归方程。

（3）操作步骤：称取2.5 g饲料样品于50 mL离心管中，其中包括2个重复，加入80％乙醇溶液2滴使样品湿润，再加入5 mL水摇匀，加入25 mL热的80％乙醇溶液, 摇匀后放置5 min,以2 500r／min速度离心5 min，倾出上清液，再用30 mL 80％乙醇溶液提取1 次。于上述残留物中加入5 mL 水和30 mL 52％高氯酸溶液，搅拌10 min，以2 500r／min离心10 min，将上清液转入100 mL 溶量瓶中，残留物再用35 mL 52％高氯酸溶液提取，合并提取液，以水定容。过滤，弃去最初5 mL滤液。吸取10.00 mL 滤液于250 mL溶量瓶中，加水定容，取上述淀粉提取液2.00 mL，测定沸水浴显色后溶液的吸光度。

（四）、还原糖含量的测定：3，5-二硝基水杨酸比色法（DNS）：

3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖(各种单糖和麦芽糖)溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和棕红色物的颜色深浅的程度成一定比例关系在540nm 波长下测定棕红色物质的消光度值，查标准曲线，便可求出样品中还原糖的含量。

（1）仪器与用具：25ml血糖管或刻度试管；大离心管或玻璃漏斗；100mL烧杯；l00mL 三角瓶；l00mL容量瓶；刻度吸管1、2、l0mL；沸水浴；离心机(过滤法不用此设备)；电子天平；分光光度计。

（2）试剂：1mg/mL葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖(预先在80℃烘至恒重)，置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100mL的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，置冰箱中保存备用；

3，5-二硝基水杨酸试剂：3，5-二硝基水杨酸6.3g，2mol/L的NaOH溶液262mL，加到500含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1 000mL，贮于棕色瓶中备用。

（3）方法：制作葡萄糖标准曲线取7支具有25ml刻度的血糖管或刻度试管，编号，按下表所示的量，精确加入浓度为lmg/mL的葡萄糖标准液和3，5-二硝基水杨酸试剂。将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即放人盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25mL刻度处，用橡皮塞塞住管口，颠倒混匀(如用大试管，则向每管加入21.5mL

蒸馏水，混匀)。在540nm波长下，用0号管调零，分别读取l-6号管的消光值。以消光值为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线，求得直线方程。

表2-5 各试管加溶液和试剂的量

管号0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液(mL) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水(mL) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 3，5-二硝基水杨酸试剂(mL) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 相当葡萄糖量(g) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 准确称取新鲜马铃薯块茎100g，制浆后加50mL蒸馏水于100mL三角瓶中，搅匀，沸水浴1.0h，后定容至100mL容量瓶，180次/min振荡20min，过滤，吸取2mL滤液2mL于25mL容量瓶，加3，5-二硝基水杨酸试剂3ml，摇匀，加热煮沸5min，迅速冷却3min后定容至25mL，而后在508nm波长用紫外可见分光光度计进行比色。

还原糖(％)=c*V*Ts*100/m*1000

式中C——标准曲线方程求得的还原糖量(mg)；

V——显色液体积(mL)；

Ts——分取倍数；

m——样品重(g)。

（五）、硝酸盐含量的测定：紫外分光光度法：

（1）方法原理：在弱碱性条件下，用热水从样品中提取硝酸离子（NO3-）然后用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质用活性碳粉吸附色素等有机物质，过滤得清亮待测液，利用硝酸根离子在紫外区（220nm）处有强烈的吸收即可从标准曲线上查得相应浓度，计算样品中硝酸盐含量，从而准确快速地测定马铃薯块茎中硝酸盐含量。

（2）主要仪器：紫外分光光度计，高速组织粉碎机（匀桨机）。水浴锅。

（3）试剂：

a)饱和硼砂溶液：称取50g硼砂溶于1000mL热水（指去离子水,下同）中；

b)0.25mol/L亚铁氰化钾溶液: 称取106g亚铁氰化钾，溶于水，定容至1000mL;

c)1mol/L乙酸锌溶液：称取200g乙酸锌溶于30mL冰乙酸和水的混合液中，再用水定容

至1000mL；

d)活性碳粉，分析纯；

e)NO3-标准贮备液：准确称取经110℃烘至恒重的硝酸钾（KNO3）0.1631g，用

水溶解，定容至1000mL，此溶液含硝酸根离子（NO3-）100mg/L。

方法

（4）标准曲线的配制：分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2mL硝酸标准液于50mL 容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，此标准系列硝酸根质量浓度分别为0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0和12.0mg/L。用1cm石英比色皿，于220nm处测定吸光值，以标准液浓度为纵坐标，吸光值为横坐标绘制标准曲线。