高效液相色谱1

柱规格
制备柱
分析柱
微径柱液相色谱 (Microbore HPLC)
毛细管液相色谱 (Capillary HPLC)
快速柱：高效短柱，如4.6×30mm, 3mODS柱
整体柱（Monolithic column)
产品名称： SCX-NP5毛细管液相色谱柱（货号：401NP5-0005）
产品样本： 下载
从速率理论得到塔板方程：
H
2dP
2DM
u
d
2 P
DM
u
k
(1 k)2
d
2 P
DM
u
qk d 2f (1 k)2 Ds
u
涡流扩散、流型效应和停滞流动相慢传质均与dp 有关，小的dp有利于提高柱效。高效固定相的重要 特征是颗粒细小。
固定相的慢传质与df有关，减少df有利于提高柱 效。键合相色谱有效降低df，柱效进一步提高。
使用高效填料带来两个新问题： ★柱流动阻力大大增大，需要采用高压泵输液 ★表面能很大，采用专业的装柱技术
目前经典LC主要用于制备，若用于分析则采 用脱机或非连续检测。 ※ HPLC的特征
采用高效色谱柱、高压输液设备和高灵敏度 检测器, 从而实现了高效、高速和高灵敏度、定 量准确, 达到可与GC相媲美的分离分析性能。 特别是结合计算机技术， HPLC已成为高度自 动化和智能化的现代分析仪器。
表1 三种不同形式液相色谱的这样特征
特性 进样
经典LC TLC/PC
人工加样
点样
HPLC 进样器
HPLC 优势
准确
溶液流动
重力
表面张力
检测和定量 收集馏分检 测
实验结果 棒式图
显色 斑点
高压泵 连续检测
色谱图
快速分离, 重现性好
高灵Hale Waihona Puke Baidu度, 自动化
五高一广
HPLC和经 HPLC和经典LC主要差别在于高 典LC比较 效固定相、输液设备和连续检测。
英文名称： Sepax
产品图片：
型号规格： 5μm, 75x50(内径x长度,μm x mm)，120A
生产商： sapex technologies Inc.
价格： 3400元(RMB) 有现货 没有促销
产品简介：
硅胶颗粒
粒径: 1.8, 2, 3, and 5 μm 孔径: 120, 200 and 300 A PS/DVB颗粒 粒径: 1, 1.7, 3, and 5 μm 孔径: 无孔, 100, and 300 A 固定相结构: 聚苯乙烯 离子交换 (PS/DVB Based) 粒径: 1, 1.7, 3, and 5 μm 孔径: 无孔 广泛的固定相选择
硅烷化（≡Si—O－Si－C）键合固定相 制备反应如下： （最常见类型！）
+ Si OH
ClSiR3
(ROSiR3)
总之，HPLC与经典LC相比, 使用时更方便, 对操作者的依赖性更小。HPLC的高重现性和 连续的定量检测导致了定性和定量分析结果具 有较高的准确性和精密度。
经典LC的特点：简便，填料一次使用。
二. 色谱柱（固定相、填料）
色谱柱是色谱仪的心脏（起分离作用），其核心是优 质固定相（填料）。进行色谱分离的首要工作是选择 性能良好的色谱柱，即在确定的分离条件下分离效率 高和分析时间短的色谱柱。
历史上出现不同的HPLC名称： ★高压液相色谱 (High Pressure Liquid Chromatography) ★高速液相色谱 (High Speed Liquid Chromatography) ★高效液相色谱(High Performance Liquid
Chromatography)
高效液相色谱法 (HPLC)
一. 与经典LC的比较 二. 色谱柱 三. 流动相 四. 检测器 五. 分 类
一. 概 述
HPLC是在经典液体柱色谱的基础上, 在色谱理论 指引下，加以改进而发展起来的。特别是GC迅速成 为一种仪器分析方法和社会需要分离分析难挥发复 杂样品促进了HPLC的发展。近年来它以6-8%的增 长率发展，目前年发表论文数已超过GC。2000年仪 器销售全球第一。
首创了2 μm以下的 离子交换相 离子交换柱具有空前的效率和分辨率
PS/DVB反相pH范围 1-14 ，离子交换相pH范围 2-12 高速，高覆盖率，高稳定性
应用
蛋白组学研究
蛋白质分离和分析
多肽分离和分析
整体柱(monolithic column) 是一种用有机或无机聚合 方法在色谱柱内进行原位聚合的连续床固定相,具有制 备简单、重现性好、多孔性优越、能实现快速、高效 分离等优点。
制备技术:
硅胶整体柱，如Merck 公司的Chromolith Performance RP C18、Silica ROD 和Prep ROD； 有机聚合物整体柱，如BIA Separations 的CIM(Convective Interaction Medai)等聚合物整体柱
应用：
高效液相色谱(HPLC) 、毛细管电色谱(CEC) 、微柱液相色谱 (μ- HPLC) 、固相萃取等系统上, 成功地应用于生命科学、药物 学、环境科学等领域的分离分析。
※ 经典LC填料的缺陷 填料通常是粒度大、范围宽、不规则, 不易填
充均匀, 扩散和传质阻力大, 谱带展宽加大。它 存在致命弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。 ※ HPLC填料（高效固定相）
颗粒细、直径范围窄、能承受高压。达到传 质阻力小, 分离效率高。早期HPLC的固定相用 涂渍的方法制备，df大，这和GC一样，会大大 降低色谱柱的柱效。现代HPLC填料多用键合 固定相，其固定相膜很薄，因而大大提高了柱 效。
柱填料
硅胶和硅基仍是目前最广泛应用的液相色谱柱填料。 此外还有高分子多孔微球、高疏水表面的多孔碳、无 机金属氧化物等。
1．填料的特性 1）基质材料 ① 无机基体：硅胶、氧化铝、氧化锆和二氧化钛等 ② 交联聚合物：聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯等 ③ 复合材料：无机基体复合一层聚合物 2）形状：球形和不规则
色谱柱的选择应考虑： ➢ 固定相类型的选择, 主要取决于样品分离模式； ➢ 柱填料的结构, 主要指颗粒的形状大小、均匀性、比 表面、平均孔径和孔容等； ➢ 柱规格指柱内径、柱长度和填料粒度 ➢ 色谱柱的牌号/厂商。
色谱柱的结构
色谱柱由柱管、填料、密封圈、过滤板、柱头等组 成。应特别注意柱头规格及无死体积连接的特性。