微生物基础实验技术回顾(ppt)

物表、污水、污物、排泄物、分泌物 • 注意事项：密闭干燥保存；消毒后去除残留；
使用液不稳定，加盖，有效期； 对织物漂白，对金属腐蚀用； 操作时应做好个人防护。
化学消毒灭菌
二、过氧乙酸
酸性透明液体，易挥发易分解，爆炸危险。 • 杀菌能力：灭菌，高水平消毒 • 适用范围：餐饮具、果蔬、环境、物表、空气。 • 薰蒸消毒：18-20%过氧乙酸5-6 ml（1g）/m3，
无菌操作技术
无菌操作的要求：
（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境
微生物的接种方法
一、斜面接种
将已长好微生物移接到另一斜面管的方法。此法用于好气性微 生物的接种。左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。 用右手先将塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手 掌拨下塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌 后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或 直线。
E.g.：手提式高压蒸汽灭菌器。用于微生物实验 和少量培养基灭菌，一般0 .105MPa在25 到30分钟即可。
干热消毒灭菌，一般用于破璃仪器 如试管、三角 瓶、培养皿等, 灭菌温度在160 ℃, 维持60 分钟。
物理消毒灭菌
二、紫外线辐射灭菌
可达高水平消毒，使用方便；但由于对人皮肤黏膜有刺 激作用，并产生臭氧，在有人情况下使用受到限制。 • 适用范围：室内空气消毒、水的消毒、能直接照射到的 光滑物体表面的消毒。
放瓷或玻璃容器中，加热密闭薰蒸1-2h。 • 喷雾消毒：0.1-0.5%，20ml/m3，作用1h。 • 注意事项：性质不稳，用前配，有盖塑料容器；
对金属腐蚀，对织物漂白作用； 操作时应做好个人防护； 消毒完成后用清水去除残留。
化学消毒灭菌
三、乙醇
别名酒精，无色透明液体，易挥发，易燃烧 。 • 杀菌能力：中水平消毒 • 适用范围：手、皮肤、小面积物表、医疗器械 • 使用方法：手与皮肤用75%溶液擦拭1min
紫外线在水中穿透力随着深度的增加而降低
物理消毒灭菌
三、高效过滤除菌
高效过滤除菌技术，对空气中≤0.3μm颗粒与微生物的 阻留率能达到99.97 %以上。 • 适用范围：主要用于生物安全柜与生物安全实验室的空 气净化除菌。 • 注意事项： * 必须定期更换高效过滤器（HEPA）， * 更换前应先用甲醛或过氧乙酸进行熏蒸消毒， * 更换时严格做好工作人员防护； * 换下的过滤装置装入密封袋内由具有资质的单位焚烧处 理。
微生物培养（micro culture) 是生物培养的中的一种。所培养的微生物主要有病毒、细菌、 放线菌、真菌等。
微生物的接种方法
接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本
沾取标本 接种
•操作需在无菌室或超净工作台内进行 •无菌室、超净工作台使用前后需进行 消毒。 •实验使用的物品使用前后需严格灭菌
微生物基础实验技 术回顾(ppt)
（优选）微生物基础实验技术 回顾
消毒与灭菌
消毒（disinfectant）
是指杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使之达到无害化 的处理。（不一定包括芽孢）
灭菌(sterilant)
是指杀灭或清除传播媒介上的所有微生物（包括芽胞），使 之达到无菌程度。
常见的消毒灭菌方法
物表用75%溶液浸泡或擦拭10min以上 • 注意事项：乙醇易燃，忌明火；可使蛋白质变性凝固形成
保护层，消毒前应将物品表面的有机物清除， 不宜用于被血、脓、粪便等污染表面消毒；破 坏仪器胶粘物与镜头，橡胶塑料变硬膨胀。
物理消毒灭菌
一、热力消毒和灭菌
是最可靠、首选的消毒灭菌方法。分为湿热消毒和灭菌以及 干热消毒和灭菌。 • 适用范围：耐热物品的消毒和灭菌。 • 常见类型：湿热消毒灭菌主要采用高压蒸汽灭菌。
• 化学消毒灭菌 通过液体化学试剂杀灭微生物繁殖体或芽孢。 消毒对象：物体表面、空气、污染物品等。 消毒方式：擦洗、熏蒸、浸泡等。
• 物理消毒灭菌 包括高压蒸汽、紫外线、焚烧、HEPA过滤除菌等。
化学消毒灭菌
一、含氯消毒剂
• 常用含氯消毒剂：次氯酸钠、二氯、三氯等 • 常用剂型：粉剂、片剂、液体 • 杀菌能力：高水平消毒；1000-5000mg/L浓度。 • 适用范围：饮用水、餐饮具、果蔬、环境、
微生物的接种方法 一、斜面接种
1.两支试管呈“V”字形 3.火焰上微烧一周 5.接种、划线
2.拔下试管塞 4.接种环灼烧、冷却 6.塞上塞子，灼烧接种环
微生物的接种方法
消毒与灭菌的区别
• 消毒只要求场所与物品达到无害化水平，而灭菌 则要求达到没有一个活菌存在。
• 两者选用的处理方法不同。灭菌与消毒相比，要 求更高，处理更难。
• 应用的场所与处理的物品也不同。
无菌操作技术
无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类 微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。
无菌操作目的： 保证待检物品不被环境中微生物污染； 防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。
无菌操作技术
无菌操作材料： 接种工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
无菌操作技术
无菌操作材料： 材料 器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培 养皿、无菌水、试管架 菌种 培养基：
消毒桶内消毒。
无菌操作技术
无菌操作技术
微生物接种、分离纯化与培养
接种（inoculate/vaccinate） 是指按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基质中的过 程。
微生物的分离纯化（ isolation aቤተ መጻሕፍቲ ባይዱd purification of microorganisms）
将特定的微生物个体从群体中或从混杂的微生物群体中分离出 来的技术叫作分离；在特定环境中只让一种来自同一祖先的微生 物群体生存的技术叫作纯化。