染色方法

DBA染色（二氨基联苯胺）对过氧化氢染色的原理：细胞中过氧化氢酶能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化DBA，形成定位于过氧化氢酶活性部位的金黄色沉淀。

方法：

（1）配置DBA染色液1mg/ml，用NaOH调pH3.8（用水调配即可，配好后调pH；用多少配多少，现用现配）。

（2）将染色液分装在三角瓶中，加入预处理的植物组织，真空泵抽气。（使叶片完全浸入液面以下，排斥叶片的空气）

（3）28℃避光染色8小时。（a,小苗子放在离心管中，大叶片放在小培养皿中，小培养皿不需要盖皿盖；b,染色过程需要黑暗并且

保持湿度，所以在具体操作过程中，可找一个最大的培养皿，

里面放上三张浸润的滤纸，再把放材料的小培养皿放到大培养

皿中，叶片等材料泡在染色液中，盖上大玻璃皿皿盖，包好黑

塑料;c,观察过程中根据材料不同，染色时间不同，可在5个小

时之后随时看一看，以免染过了。）

（4）弃去染色液，乙醇：乳酸：甘油（3:1:1）固定液中煮5min,直至叶绿素全部脱去，冷却，加入无水酒精。（脱色液不需要现用

现配）。

（5）观察染色情况。

1、配置NBT染色液0.5mg/ml(用水调配即可，不需要调pH，用多

少配多少，现配现用)。

2、将染色液分装在三角瓶中，加入预处理的植物组织，真空泵抽

气。（使叶片完全浸入液面以下，排斥叶片的空气）。

3、28℃避光染色8小时。（a,小苗子放在离心管中，大叶片放在小

培养皿中，小培养皿不需要盖皿盖；b,染色过程需要黑暗并且

保持湿度，所以在具体操作过程中，可找一个最大的培养皿，

里面放上三张浸润的滤纸，再把放材料的小培养皿放到大培养

皿中，叶片等材料泡在染色液中，盖上大玻璃皿皿盖，包好黑

塑料;c,观察过程中根据材料不同，染色时间不同，NBT染色较

DAB容易，所以可提前在4个小时左右看一看，以免染过了。）4、弃去染色液，乙醇：乳酸：甘油（3:1:1）固定液中煮5min,直

至叶绿素全部脱去，冷却，加入无水酒精。（脱色液不需要现配

现用）

5、观察染色情况。