临床病原学检查 ppt课件
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氨卞西林等抗生素耐药
2020/11/13
30
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑵超广谱-内酰胺酶检测（ESBL） 定义：是水解青霉素，一代、二代和三代 头孢菌及单酰胺类药物的酶，产生ESBL 的细菌对上述抗生素耐药。 ESBL主要存在于大肠杆菌和肺炎克雷伯 菌等革兰阴性菌中。
2020/11/13
临床病原学检查
[目的要求]
掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则 熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及
抗生素治疗的主要实验室监测方法 了解：病原学诊断的重要性，现代感
染的类型和病原微生物的变迁
2020/11/13
2
精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
2020/11/13
14
二.病原体检查的基本方法
1.临床标本细菌检验一般程序
2020/11/13
15
一般程序
直接涂片，染色镜检
标本
分离培养
需氧培养
二氧化碳培养
观察菌落形态
单个菌落
血清学鉴定
生化鉴定
增菌培养 厌氧培养
涂片、染色镜检 药敏试验
确定致病菌发出报告
2.病原体诊断的基本方法
➢直接显微镜检测（microscopic examination） ⑴染色标本检查法：革兰染色和抗酸染色 ⑵不染色标本检查法：悬滴法和压滴法
1.定义：对敏感性不能预测的临床分 离菌株进行药敏试验，以指导临床 选择治疗药物和了解区域或医院内 常见病原菌耐药性变迁，有助于临 床经验性治疗选药。
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一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
2.常用敏感性试验方法 ⑴手工试验:①K-B纸片琼脂扩散法
结果表示:S-Susceptible I-Intermediate R-Resistant
②稀释法（MIC） ③Etest ④联合药敏试验
2020/11/13
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一.抗微生物药物敏感性试验 （AST）
⑵自动化仪器 Vitek，Microscan ⑶分子试验 PCR直接检测mecA基因 ⑷补充试验 Nitrocefin
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24
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
3.药敏试验结果与临床抗生素剂量关系 敏感(S)——一般剂量有效，推荐使用该抗生素用于
2.病原体诊断的基本方法
➢病原体分离培养(isolation and culture)和鉴定(identification)
• 培养基选择 • 生长条件：一般大气条件
厌氧条件 微需氧条件
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2.病原体诊断的基本方法
➢鉴定技术： • 生化鉴定 • 血清学鉴定 • 数码鉴定 • 自动化鉴定
临床治疗 中介(I)——大剂量有效，提示药物MIC接近体液或组
织可达到药物浓度 耐药(R)——大剂量无效,即常规用药剂量不能达到
MIC
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一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
4.K-B纸片扩散试验的影响因素
琼脂厚度 与抑菌圈直径成反比
菌液浓度 与抑菌圈直径成反比
药敏试纸
含量–与抑菌圈直径成反比
2020/11/13
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㈤脑脊液与其他无菌体液
• 脑脊液标本应立即保温送检 • 胸腹水等体液标本应抽取2-5ml送检
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12
㈥泌尿生殖道标本
• 性传播疾病取尿道口分泌物、阴道 宫颈口分泌物
• 生殖道疱疹常穿刺取疱疹液
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㈦创伤、组织和脓肿标本
• 开放性脓肿：无菌棉拭采集脓液 • 封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取
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2.病原体诊断的基本方法
➢血清学诊断：查特异性抗体——肥达氏 试验
➢病原体特异性抗原检测 ➢病原体核酸检测：查特异基因片段
DNA/RNA——PCR、DNA探针杂交技术
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第二节 细菌耐药性检查
2020/11/13
21
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
病原体检查的作用
1.感染性疾病的明确诊断 2.通过药敏试验指导临床合理用药 3.病原体监控和耐药性监控
第一节 标本采集、运送和检查方法
2.耐药机制： ⑴药物渗入细菌减少 ⑵产生灭火酶和钝化酶(-内酰胺酶) ⑶细菌抗生素结合蛋白发生改变（PBP） ⑷代谢拮抗剂产生
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二.耐药机制及耐药性监测试验
3.耐药性监测的特殊试验 ⑴ -内酰胺酶检测
方法:头孢哨噻吩滤纸片法(nitrocefin) 意义: -内酰胺酶检测阳性,即对青霉素、
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㈡尿 液
• 无菌采集清洁中段尿 • 导尿或膀胱穿刺获得
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㈢粪 便
• 取含脓、血或粘液粪便置于清洁容 器内
• 排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子 • 对传染性腹泻须三次送检
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10
㈣呼吸道标本
1.痰：⑴自然咳痰法 ⑵气管镜采集法
2.鼻咽拭标本：同痰标本用清水漱口 后采集
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二.耐药机制及耐药性监测试验
1.耐药菌株： 耐甲氧西林葡萄球菌（MRS） 耐青霉素肺炎链球菌（PRSP） 耐万古霉素肠球菌（VRE） 质粒介导的超广谱-内酰胺酶（ESBL） 多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单 胞菌和不动杆菌
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二.耐药机制及耐药性监测试验
保存温度–20℃，使用前室温平衡
30min后开启
湿度-密封容器，硅胶防潮
NCCLS标准 培养种类(MH),厚度(4mm)
接种量(0.5MF)
选药标准,判读标准,质控标准
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质控参考菌
金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌
ATCC 25923 ATCC 25922 ATCC 26853
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百度文库
6
一.标本采集和运送
• 采集标本注意点： 1.标本容器必须无菌或清洁容器 2.选择最佳时间采集标本，在抗菌药物使
用前 3.获取标本时，须严格无菌操作 4.标本采集后，应尽快送实验室
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㈠血 液
• 发热初期和高峰期采集 • 抗菌药物治疗前 • 成人每次10-20ml，婴幼儿1-2ml • 标本不用抗凝剂 • 24小时内，可在不同部位采血3次
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二.耐药机制及耐药性监测试验
⑵超广谱-内酰胺酶检测（ESBL） 定义：是水解青霉素，一代、二代和三代 头孢菌及单酰胺类药物的酶，产生ESBL 的细菌对上述抗生素耐药。 ESBL主要存在于大肠杆菌和肺炎克雷伯 菌等革兰阴性菌中。
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临床病原学检查
[目的要求]
掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则 熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及
抗生素治疗的主要实验室监测方法 了解：病原学诊断的重要性，现代感
染的类型和病原微生物的变迁
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精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
2020/11/13
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二.病原体检查的基本方法
1.临床标本细菌检验一般程序
2020/11/13
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一般程序
直接涂片，染色镜检
标本
分离培养
需氧培养
二氧化碳培养
观察菌落形态
单个菌落
血清学鉴定
生化鉴定
增菌培养 厌氧培养
涂片、染色镜检 药敏试验
确定致病菌发出报告
2.病原体诊断的基本方法
➢直接显微镜检测（microscopic examination） ⑴染色标本检查法：革兰染色和抗酸染色 ⑵不染色标本检查法：悬滴法和压滴法
1.定义：对敏感性不能预测的临床分 离菌株进行药敏试验，以指导临床 选择治疗药物和了解区域或医院内 常见病原菌耐药性变迁，有助于临 床经验性治疗选药。
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一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
2.常用敏感性试验方法 ⑴手工试验:①K-B纸片琼脂扩散法
结果表示:S-Susceptible I-Intermediate R-Resistant
②稀释法（MIC） ③Etest ④联合药敏试验
2020/11/13
23
一.抗微生物药物敏感性试验 （AST）
⑵自动化仪器 Vitek，Microscan ⑶分子试验 PCR直接检测mecA基因 ⑷补充试验 Nitrocefin
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一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
3.药敏试验结果与临床抗生素剂量关系 敏感(S)——一般剂量有效，推荐使用该抗生素用于
2.病原体诊断的基本方法
➢病原体分离培养(isolation and culture)和鉴定(identification)
• 培养基选择 • 生长条件：一般大气条件
厌氧条件 微需氧条件
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2.病原体诊断的基本方法
➢鉴定技术： • 生化鉴定 • 血清学鉴定 • 数码鉴定 • 自动化鉴定
临床治疗 中介(I)——大剂量有效，提示药物MIC接近体液或组
织可达到药物浓度 耐药(R)——大剂量无效,即常规用药剂量不能达到
MIC
2020/11/13
25
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
4.K-B纸片扩散试验的影响因素
琼脂厚度 与抑菌圈直径成反比
菌液浓度 与抑菌圈直径成反比
药敏试纸
含量–与抑菌圈直径成反比
2020/11/13
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㈤脑脊液与其他无菌体液
• 脑脊液标本应立即保温送检 • 胸腹水等体液标本应抽取2-5ml送检
2020/11/13
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㈥泌尿生殖道标本
• 性传播疾病取尿道口分泌物、阴道 宫颈口分泌物
• 生殖道疱疹常穿刺取疱疹液
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㈦创伤、组织和脓肿标本
• 开放性脓肿：无菌棉拭采集脓液 • 封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取
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2.病原体诊断的基本方法
➢血清学诊断：查特异性抗体——肥达氏 试验
➢病原体特异性抗原检测 ➢病原体核酸检测：查特异基因片段
DNA/RNA——PCR、DNA探针杂交技术
2020/11/13
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第二节 细菌耐药性检查
2020/11/13
21
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
病原体检查的作用
1.感染性疾病的明确诊断 2.通过药敏试验指导临床合理用药 3.病原体监控和耐药性监控
第一节 标本采集、运送和检查方法
2.耐药机制： ⑴药物渗入细菌减少 ⑵产生灭火酶和钝化酶(-内酰胺酶) ⑶细菌抗生素结合蛋白发生改变（PBP） ⑷代谢拮抗剂产生
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二.耐药机制及耐药性监测试验
3.耐药性监测的特殊试验 ⑴ -内酰胺酶检测
方法:头孢哨噻吩滤纸片法(nitrocefin) 意义: -内酰胺酶检测阳性,即对青霉素、
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㈡尿 液
• 无菌采集清洁中段尿 • 导尿或膀胱穿刺获得
2020/11/13
9
㈢粪 便
• 取含脓、血或粘液粪便置于清洁容 器内
• 排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子 • 对传染性腹泻须三次送检
2020/11/13
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㈣呼吸道标本
1.痰：⑴自然咳痰法 ⑵气管镜采集法
2.鼻咽拭标本：同痰标本用清水漱口 后采集
2020/11/13
27
二.耐药机制及耐药性监测试验
1.耐药菌株： 耐甲氧西林葡萄球菌（MRS） 耐青霉素肺炎链球菌（PRSP） 耐万古霉素肠球菌（VRE） 质粒介导的超广谱-内酰胺酶（ESBL） 多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单 胞菌和不动杆菌
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二.耐药机制及耐药性监测试验
保存温度–20℃，使用前室温平衡
30min后开启
湿度-密封容器，硅胶防潮
NCCLS标准 培养种类(MH),厚度(4mm)
接种量(0.5MF)
选药标准,判读标准,质控标准
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质控参考菌
金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌
ATCC 25923 ATCC 25922 ATCC 26853
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百度文库
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一.标本采集和运送
• 采集标本注意点： 1.标本容器必须无菌或清洁容器 2.选择最佳时间采集标本，在抗菌药物使
用前 3.获取标本时，须严格无菌操作 4.标本采集后，应尽快送实验室
2020/11/13
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㈠血 液
• 发热初期和高峰期采集 • 抗菌药物治疗前 • 成人每次10-20ml，婴幼儿1-2ml • 标本不用抗凝剂 • 24小时内，可在不同部位采血3次