抗蓖麻毒素药物的筛选与评价
蓖麻适用除草剂筛选及防效研究
设一个浓度 1 050g/hm2，施药方法：上防溅罩尽量别喷到 的灭草效果随着浓度的增加杀灭效果呈递增状态。氟乐
植株（只作为前 3 个药品无效时的补救措施，观察飘移药 灵 1 800g/hm2浓度对藜的株防效 72.5%，对田旋花的株防
害，不建议使用）。
效 79.0%，对苍耳的杀灭效果 45.2%，对狗尾草的株防效
氟 乐
1500g/hm2
10.5 48.8 30.8
86.7 11.5 23.3 25.2 79.8 10.0 31.0 30.5
61.3
6.5 31.6 8.1
52.1
21.0 28.8 52.5 64.7
灵 1800g/hm2 7.5 63.4 25.1 89.2 4.5 70.0 13.1 89.5 9.5 34.5 28.4 64.0 5.0 47.4 6.8 59.8 20.5 30.5 50.2 66.3
抑制率 （%）
株数
防效 （%）
鲜重 （g）
抑制率 （%）
株数
防效 鲜重 （%） （g）
抑制率 （%）
株数
防效 鲜重 （%） （g）
抑制率 （%）
株数
防效 鲜重 （%） （g）
抑制率 （%）
1200g/hm2 11.5 43.9 34.3 85.2 9.0 40.0 20.3 83.7 12.5 13.8 36.8 53.4 8.5 10.5 9.2 45.6 24.5 16.9 60.3 59.5
基金项目：农业部公益性行业（农业）科研专项“蓖麻产业技术研究与试验示范”（201003057）、山西省农业科学院育种工程项目“早熟高产蓖麻 杂交种选育”（11yzgc009）。
作者简介：曹 越（1974-），男，山西交城人，助理研究员，从事蓖麻遗传育种及高产高效技术研究工作。 收稿日期：2015-01-19
蓖麻毒素的分离、提取及活性研究
蓖麻毒素的分离、提取及活性研究本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文作了明确的说明并表示谢意。
本学位论文成果是本人在四川Ｉ大学读书期间在侯太平教授指导下取得的，论文成果归四川Ｉ大学所有，特此声明。
警２００７＠ｚ衙４户ｊ／杉四川大学硕｝。
学位论文蓖麻毒素的分离、提取及活性研究农药学专业研究生：高杉指导教师：侯太平本研究以蓖麻毒素灭鼠为目的，以小白鼠活性实验为筛选指标，研究了从蓖麻种子中分离蓖麻毒蛋白的方法，实现了对蓖麻毒素的最优提取，并利用得到的蓖麻籽粗提物对小白鼠进行灭鼠试验，来模拟高原鼠兔的灭鼠效果评价。
最终在野外大面积应用实验中，取得了比较满意的效果。
以蓖麻籽为原料，通过选用不同物质做浸提剂，单独研究了各种浸提剂对蓖麻毒素的最佳提取方法，在综合对各浸提剂在其最佳提取条件下的提取蓖麻毒素的效果后，最终确定，０．２ｍｏｌ／Ｌ的磷酸缓冲液在对去皮蓖麻籽的质量体积比为ｌ：３（ｇ／ｍ１）时，浸提２４小时后，所得混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油脂，以及离心所剩的渣滓，保留清液，在清液中加入（ＮＨ４）ｚＳ０４盐析剂到８０％饱和度，盐析２４小时，１００００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，再经透析，真空干燥后所得蓖麻毒素（粗毒）产率最高，同时该提取方法还兼顾到蛋白的稳定性及整个提取流程的经济性，正是要寻找的最佳工艺路线。
应用提取出的蓖麻毒素（粗毒）对小白鼠做活性实验，’结果表明，蓖麻毒素对小鼠腹腔注射的ＬＤ∞为７．９７１ｕｇ／ｋｇ，其主要药效成分为蓖麻毒素。
蓖麻毒素使小白鼠中毒后无明显异常反应，不容易造成拒食现象，能够提高灭鼠效率。
而小白鼠从腹腔注射后３０ｈ开始出现死亡，直到９６ｈ后均有死亡，说明本毒饵是高效、慢性灭鼠刻。
蓖麻适用除草剂筛选及防效
研究不足与展望
本研究仅针对几种除草剂进行了筛选试验，未能全面评价 所有市售除草剂在蓖麻田的应用效果，未来可进一步扩大 试验范围。
在除草剂对蓖麻的安全性方面，本研究仅关注了除草剂对 蓖麻生长和产量的影响，未涉及除草剂残留和环境污染等 方面，未来可加强这方面的研究。
在除草剂的施用技术方面，本研究未涉及具体的施用方法 和时间等细节问题，未来可进一步优化除草剂的使用技术 ，提高防效和安全性。
实验结果表明，乙草胺可作为蓖麻田 的适用除草剂，能够有效防除蓖麻田 中的杂草，且对蓖麻生长安全。
04
除草剂防效评价
防效评价指标
01
02
03
04
除草率
除草剂对杂草的清除率，通常 以百分比表示。
持效期
除草剂对杂草的控制时间，通 常以天数表示。
对蓖麻安全性
除草剂对蓖麻生长的影响程度 ，通常以生长抑制率、产量损
防治原则
安全原则
选择的除草剂应确保对 蓖麻安全，不产生药害
。
高效原则
除草剂应具有较高的除 草效果，能够有效地控
制杂草的生长。
经济原则
除草剂的成本应相对较 低，经济效益高。
环保原则
除草剂应低毒、低残留 ，对环境友好。
防治措施
土壤处理
在蓖麻种植前，可以使用除草剂对土壤进行处理 ，以预防杂草的发生。
茎叶处理
在蓖麻生长期间，可以使用除草剂对杂草的茎叶 进行处理，以杀死或抑制杂草的生长。
灌溉与施肥
合理的灌溉和施肥可以提高蓖麻的抗逆性，降低 杂草的危害。
防治效果预测
观察记录
对使用除草剂后的蓖麻田进行定期观察和记录，记录杂草的生长 情况及除草剂的防治效果。
数据统计
蓖麻毒素的分离与提纯
蓖麻毒素的分离与提纯近年来,从蓖麻中提取分离蓖麻毒素又是一个新的研究热点。
首先,是因为蓖麻毒素有很好的药用价值,如用于医药、农药,特别是用于抗肿瘤的靶向药物。
其次,在检测中制备标准样品是必备的。
前人在研究蓖麻毒素的分离与提纯方法时，提出了不同的分离与提纯方法。
温燕梅等在“蓖麻不同部位杀虫活性成分蓖麻碱的提取及含量”一文中提出了用微波辅助提取蓖麻不同部位的蓖麻碱。
蓖麻的提取:蓖麻不同部位在鼓风干燥箱50 ℃下烘至恒重，粉碎，用乙醚回流提取2 h，去除其中的油脂和色素，自然晾干备用。
按照参考文献[5]方法，称取30 g，以料液质量比1∶20加入水，在微波炉以中高火作用15 min，趁热过滤，将滤渣重复上述步骤再提取1次。
将两次的粗提取液合并，搅拌均匀，用旋转蒸发仪浓缩，然后用鼓风干燥箱于70 ℃下烘干成膏状，用索氏提取器加入乙醇回流提取2 h并浓缩至30 mL 左右，让其缓慢冷却析出结晶。
郑成在“蓖麻碱的提取、纯化、改性及其杀虫活性研究”一文中也是用微波辅助的方法进行提取蓖麻碱。
赵丹在“蓖麻毒蛋白的提纯及杀虫效果研究”一文中提出用Nicolson等的方法提纯毒蛋白。
称取40.0g脱壳蓖麻籽，120ml0.lmol/L pH7.2磷酸缓冲液匀浆，4℃冰箱中抽提24小时，4000rm/min离心20min，小心去除表面脂肪层取上清液，上清液中加入固体(NH4)2SO4至30%饱和度，4o C冰箱过夜。
4O00rm/min离心20min，取上清。
上清液中加入固体(NH4)2SO4饱和度50%，4o C冰箱保存8h，4000rm/min离心20min，弃上清液。
将沉淀用适量001mol/L pH.72磷酸缓冲液溶解，在001mol/L pH.72磷酸缓冲液中透析去盐。
用PEG10000覆盖透析袋至于4℃冰箱中过夜，浓缩得粗提取液。
选用2*25cm层析柱，将Sepharose 4B缓慢装入层析柱中，避免产生气泡和断层，以0.01mol/LpH7.2磷酸缓冲液平衡12h，用核酸蛋白检测仪检测28Onm波长的吸收峰。
蓖麻中毒的诊治及综合预防措施
‖农民致富之友‖Nong Min Zhi Fu Zhi You2016年第1期（下半月）6.3注重生物安全提高鸡苗的质量，严格消毒，不从疫区引进鸡苗，加强发病鸡群的饲养管理，注射疫苗后器具进行灭菌处理，做好其它疾病的防治工作等。
7结论本次所发生的大肠杆菌病通过对临床症状、病理剖检变化、细菌的分离鉴定、生化试验、动物回归试验分析确诊是鸡急性败血型大肠杆菌病。
根据药敏试验结果，选择使用洛美沙星进行治疗，并采取生物安全等措施，该病得到有效控制。
蓖麻中毒的诊治及综合预防措施张振华（博爱县畜产品质量安全监测中心，河南焦作454450）[中图分类号]R155[文献标识码]A[文章编号]1003-1650(2016)01-0266-01蓖麻中毒指的是动物采食蓖麻茎、叶和籽实或采食加工后的蓖麻饼粕以后，动物出现的以腹痛、腹泻、肌肉痉挛和呼吸困难为特征的一种中毒性疾病。
马、牛、猪等动物较为常见，其中马最为常见，其它动物有一定的耐受能力。
1病因蓖麻是一年生或多年生草本植物、热带或南方地区常成多年生灌木或小乔木。
蓖麻成熟后的种子可以榨油，榨油过程中产生的蓖麻饼粕营养丰富，含有丰富的蛋白和矿物质，可以作为饲料饲喂动物。
但蓖麻籽实、蓖麻叶和蓖麻饼粕中含有有毒物质，将其作为饲料饲喂动物，可能会导致动物中毒。
目前为止，发现的蓖麻中含有的有毒物质有蓖麻毒素、蓖麻碱、变应原和红细胞凝集素，其中蓖麻毒素和蓖麻碱最为常见。
2发病机理蓖麻毒素存在于蓖麻饼粕中，其为高分子蛋白物质，毒性极强，是迄今为止植物中毒性最大的植物毒蛋白，不但对动物毒性极强，对人毒性也极强。
该毒素能抑制人和动物体内蛋白质的合成过程，造成组织器官的损伤。
主要表现为刺激和损伤胃肠道粘膜组织，使肝脏和肾脏等实质性器官出现变性、出血和坏死。
还可以使红细胞发生崩解，从而出现一系列临床症状，最后因血液循环衰竭和呼吸困难而死亡。
蓖麻全植株中均含有蓖麻碱，在幼芽的子实中含量最高。
蓖麻毒素——精选推荐
蓖⿇毒素1 蓖⿇毒素1．1 蓖⿇毒素是⼀种有害物质蓖⿇毒素(Ricin)系指蓖⿇毒蛋⽩、蓖⿇碱、蓖⿇变应原和⾎球凝集素四种毒性物质，其中蓖⿇毒蛋⽩的毒性最⼤。
在药物研究中，蓖⿇毒蛋⽩⼜称蓖⿇毒素。
在英语中蓖⿇毒素和蓖⿇毒蛋⽩是同⼀词⼀“Ricin”。
蓖⿇毒素对⼈和哺乳动物有剧毒，⼏乎对所有真核细胞都有毒性。
⼀个毒素分⼦进⼊细胞内，就⾜以使整个细胞的蛋⽩质合成完全停⽌⽽死亡。
1．1．1 蓖⿇毒蛋⽩(Ricin) 最早是在1887年由Dixson从蓖⿇籽中分离出来的，它是由全毒素、毒类素、凝集素三种物质组成的蛋⽩质。
并由数种不同类型的⾼分⼦蛋⽩质组成，其分⼦量64 000左右，也有报道为36 000～85 000。
⽬前已发现的结晶型有BI型、TL型、cI型、D型，其中以D型毒性最强。
蓖⿇毒蛋⽩由A、B两个肽链以⼆硫键共价相连接，其A链在B链的协助下，容易穿过细胞膜破坏核蛋⽩体60S亚单位，抑制蛋⽩质的合成，致使细胞死亡。
蓖⿇毒素的⼀级结构表明，A链由263个氨基酸残基组成，分⼦量32 000，是活性链，第10个残基Asn已糖基化，接有(Glc Nac)，(Man) 寡糖链。
A链中只有两个LY残基，⼀个位于N端第四位，⼀个位于C端附近，对A链的毒性作⽤⾄关重要。
B链是由259个氨基酸残基组成的序列，含有两个寡糖链(Glc Nac) (Man) 和(Glc Nac)：(Man) ，分别与第93位和第133位上两个Asn残基相连，分⼦量34 000 不同的蓖⿇及其变种的毒蛋⽩的氨基酸序列不完全相同。
蓖⿇毒蛋⽩为⽩⾊粉末或结晶型固体，⽆味，不溶于⼄醇、⼄醚、氯仿、甲苯等有机溶剂，溶于酸性稀释液或盐类⽔溶液，在饱和的硫酸铵溶液中能沉淀析出。
在沸⽔中或加压蒸汽处理即凝固变性，失去毒性，但在⼲热的情况下变性很难蓖⿇毒蛋⽩在蓖⿇籽中含量为0．5％～4．5％，也有含量为0．5％～15％的报道，在蓖⿇的根、茎、叶中也有⼀定含量。
3种酶联免疫分析法在蓖麻毒素定量测定中的比较
3种酶联免疫分析法在蓖麻毒素定量测定中的比较马小溪;刘合珠;唐吉军;郭磊;谢剑炜【摘要】Three determination methods in enzyme-linked immunosorbent assay, namely optical absorption, fluorescent and chemiluminescent immunoassay, were established for quantitation of biotoxins protein ricin in various matrices. The detection conditions were systematically optimized.The results showed the best signal-to-noise (SNR) could be obtained for CLIA when dilution factor was 1:8000; and the chemiluminescence signal was stable at around 3 minutes after horseradish peroxidase reacted with its substrate. Whereafter, the three methods were compared for determination of ricin under individually optimized conditions. The comparative results indicated that chemiluminescent immunoassay could provide wider linear range (from 0.02 μg/L to 5.5 μg/L with correlation coefficient of 0.999), higher sensitivity (limit of detection was 0.005 μg/L), and could be adopted as a simple, rapid and robust approach. The CLIA method was applied to measure the spiked ricin in water, carbonated beverage, milk powder, coffee and human serum samples. The limits of detection and the recoveries were from 0.005 to 0.08 μg/L and from 89.6％ to 108.8％, respectively.The method was quite suitable for quantitative determination of trace amounts of ricin in contaminated or poisoned samples.%建立了蓖麻毒素的3种酶联免疫定量分析法,即光吸收、荧光和化学发光免疫分析法,并系统优化了各项实验条件.结果显示:对于化学发光检测法,当酶标抗体HRP-4C13稀释倍数为1:8000时可获得最佳的信噪比,且酶与底物反应3 min后信号趋于稳定.随后在各自优化的条件下将3种方法用于毒素的检测.比较结果表明:化学发光酶联免疫分析法除具有线性范围宽(0.02～5.5 μg/L,r(2)=0.999)、灵敏度高(检出限为5 ng/L)的特点外,还具有简单、快速、体系稳定性好等优点.将本方法用于不同实际样品基质,如饮用水、碳酸饮料、奶粉、咖啡和血清中添加的蓖麻毒素的检测,其检出限为0.005～0.08 μg/L,回收率为89.6%～108.8%,适于污染及中毒样品中痕量蓖麻毒素的定量分析.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2011(039)005【总页数】5页(P685-689)【关键词】蓖麻毒素;酶联免疫分析;化学发光【作者】马小溪;刘合珠;唐吉军;郭磊;谢剑炜【作者单位】军事医学科学院毒物药物研究所,北京,100850;军事医学科学院毒物药物研究所,北京,100850;军事医学科学院毒物药物研究所,北京,100850;军事医学科学院毒物药物研究所,北京,100850;军事医学科学院毒物药物研究所,北京,100850【正文语种】中文蓖麻毒素(Ricin)是从大戟科植物蓖麻籽(Ricinu communis)中分离出来的一种II型核糖体失活蛋白，其相对分子量约为66 kDa，由A链(约32 kDa)和B链(约34 kDa)通过二硫键联接而成。
蓖麻毒素的提取和纯化及其抗肿瘤作用的研究
浙江大学硕士学位论文蓖麻毒素的提取和纯化及其抗肿瘤作用的研究姓名：***申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：***2002.5.1浙江大学硕士学位论文摘要蛋白其间具有凝集素的功能，其上有两个特异的半乳糖凝集部位。
蓖麻毒素的一级结构已由Ｆｕｎａｔｓｕ等完成，结果显示，Ａ链由３６３个氨基酸残基组成，只有两个Ｌｙｓ残基，一个位于Ｎ端第四位，一个位于Ｃ端附近，对Ａ链的毒性作用至关重要。
Ｂ链是由２５９个氨基酸组成的序列，它能特异性地识别细胞膜上特定的含有末端半乳糖的糖蛋白或糖脂受体。
Ｂ链本身几乎没有毒性，主要作用就是识别和结合细胞表面的受体，Ｂ链上结合位点的构成与酪氨酸或含有ｅ．ＮＨ２的赖氨酸√残基有关，蓖麻毒素经受体介导的内吞方式进入细胞，在细胞内通过逆分泌途，径转运至内质网，然后Ａ链和Ｂ链分开，Ａ链转位至细胞浆，在胞浆中和核糖体的６０Ｓ大亚基结合，通过其特异的Ｎ．糖苷酶活性，催化切断６０Ｓ亚基２８ＳｒＲＮＡ中第４２３４位腺嘌呤与核糖分子之间的糖苷键，这一嘌呤的脱落可导致整个核糖体的失活，从而影响需核糖体参与的氨基酰．ｔＲＮＡ的结合和肽酰一ｔＲＮＡ的转位过程，最终导致蛋白质合成障碍，引起细胞的死亡。
蓖麻毒素具有强烈的细胞毒性，具有抗肿瘤的应用前景。
为了提高特异性，近年来，研究的热点在于将Ａ链和特异性的单克隆抗体结合，制成免疫毒素，将毒素特异性地靶向运送至肿瘤细胞，可以减少毒素对正常细胞的损伤。
这方面的研究取得了可喜的进步，但还有不少问题有待于进一步的研究。
／—１本研究主要集中于从天然蓖麻种子中提取和纯化蓖麻毒素，进行生化鉴定和、生物学活性检测，通过细胞培养，观察其对正常小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３和结肠癌细胞Ｃｏｌｏｎ２０５的作用。
以白血病细胞Ｋ５６２和大肠癌细胞ＳＷ４８０为实验对浙江大学硕士学位论文象，比较其对不同肿瘤细胞的杀伤作用。
一、蓖麻毒素的提取和纯化根据Ｎｉｃｏｌｓｏｎ和Ｂｌａｕｓｔｅｉｎ的方法稍加改进，将去壳的蓖麻籽匀浆，以０．０１Ｍ，ｐＨ＝７．２的ＰＢＳ提取，４０Ｃ过夜，离心并沉淀，加硫酸铵至４０％饱和度，４０Ｃ过夜，离心，继续加硫酸铵至８０％饱和度，４０Ｃ放置４小时，离心，将沉淀物以Ｏ．０１Ｍ，ｐＨ＝７．２的ＰＢＳ溶液溶解，即得粗提液。
抗蓖麻毒素单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达
抗蓖麻毒素单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达纪秋野;梁鸿雁;刘文森;高宏伟【摘要】为构建和表达抗RT单链抗体(ScFv)蛋白,用RT-PCR方法从能分泌特异性抗RT单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因.用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗RT-ScFv基因.将ScFv基因连接到pMAL-p2X表达载体,转化TB1表达菌.阳性克隆用IPTG诱导18h,Western blotting鉴定重组蛋白.结果表明,试验成功扩增出了ScFv基因.长度约为750bp.通过DNA序列测定和分析,构建出VL-(Gly4 Ser)3-VH.其VH全长363 bp,可编码121个氨基酸,VL全长324 bp,可编码108个氨基酸.SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,抗RT-ScFv在TB1表达菌中获得高效表达,pMAL-p2X表达的ScFv加上同时融合表达的MBP标签分子质量约为75 ku.本试验成功构建了pMAL-RT-ScFv表达载体,并获得了高效表达.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)005【总页数】5页(P65-69)【关键词】4D12;单链抗体;蛋白表达;蓖麻毒素【作者】纪秋野;梁鸿雁;刘文森;高宏伟【作者单位】黑龙江八一农垦大学,大庆,163319;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062;黑龙江八一农垦大学,大庆,163319;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062【正文语种】中文【中图分类】Q786蓖麻毒素(ricin)是从大戟科植物蓖麻籽中提取的一种毒蛋白,其相对分子质量约为64000,由A、B两条多肽链通过二硫键连接组成糖基化的异二聚体(Lord等,1994)。
RTA链为效应链,具有RNA N-糖苷酶活性,可使核糖体失活;RTB链为结合链,含有2个半乳糖结合位点,介导 RTA链进入细胞内发挥毒性作用(Sandvig等,1994)。
蓖麻毒素
9
生物毒素恐怖剂种类
Toxins Properties LD50（g/kg）
肉毒毒素 蛋白质/神经毒 SEB 蛋白质/肠毒 志贺氏毒素 蛋白质/3种毒性 产气荚膜梭菌毒素 PLC/epsilon T-2毒素 稀醇类/皮肤 Anatoxins 生物碱/有机磷酸酯 Saxitoxins 生物碱（神） Ciguatoxins 聚醚类（神） 蓖麻毒素 蛋白质/细胞毒 相思豆毒素 蛋白质/细胞毒 环蛇毒素 碱性多肽/神经毒
25
皮肤、粘膜接触
无破 损 皮 肤吸收量极小，一般不会引起 中毒。 眼睛接触可致结膜炎、瞳孔扩大、视神经 受损。
26
五、蓖麻毒素中毒的诊断标准与治疗
蓖麻毒素中毒的诊断 诊断 主 要 依靠明确的毒物接触史、典型的 临床表现和实验室的定性定量检测。尤其是实 验室的检测，既可确立中毒的诊断，又能判定 中毒的程度，还能指导临床救治。 目前，国外已制备蓖麻毒素的BTA快速检测试 纸，国内军事医学科学院毒物药物研究所也研 制出了蓖麻毒素的快速检测试纸，并在陕西径 县蓖麻子中毒事件中得到应用，发现其检测样 品的灵敏度与国外相当。
18
四、中毒途径与临床表现
19
中毒途径
呼吸道： 吸入薄雾狀或粉末狀蓖麻毒素 就会中毒。 消化道：蓖麻毒素也可溶於水或食物中， 然后被吞咽。 肌肉注射：颗粒狀蓖麻毒素或溶於液体中 的蓖麻毒素都可以注射入人体内。
20
临床表现
根据毒素摄入剂量和中毒途径的不同， 临床症状也有所区别。蓖麻毒素经呼吸道 吸入、消化道摄入和肌肉注射均可致人中 毒，潜伏期一般为4h一8h。 在口服、吸入、注射以及皮肤、粘膜接 触等途径中以吸入和注射途径最具危害性。 水源和食物施毒是恐怖袭击的主要方式。
蓖麻毒素最简单的提取
蓖麻毒素最简单的提取蓖麻毒素简单介绍蓖麻是世界上十大油料作物之一，全株都有毒，其中蓖麻毒素主要集中在蓖麻籽中，研究表明，这种毒性蛋白是可以跟细胞核糖体香结合从而杀死细胞的，中毒时候容易导致肝、肾等实质气阿滚，并能凝集和溶解红细胞，抑制和麻痹心血管和呼吸中枢。
蓖麻毒素作用1.在世界大战期间很多国家都一直尝试将蓖麻毒素作为生化武器，近年来，也有不少恐怖分子利用蓖麻毒素进行暗杀或者恐吓，这种事件也是有发生，严重者威胁到了公共安全！2.蓖麻毒蛋白可以作为植物毒素被科学家制作成杀虫剂，因为是生物有机成分，进入害虫体内是可以自行分解的，也不容易产生抗药性，所以成为了一种非常绿色环保的生物杀虫剂！蓖麻的全株都有药用的功效，科学家们也正在考虑将蓖麻毒蛋白跟靶向分子相结合制成特异性的抗肿瘤的药物，这野味抗肿瘤治疗开拓了新的思路！3.蓖麻的用途还非常的多，可以用来造纸阿，蓖麻油还可以用作是工业的润滑剂，蓖麻粕去毒后可以用作是肥料或者是饲料，虽然蓖麻全身都有毒，但是蓖麻也全身都是宝，科学的种植蓖麻也帮助了很多农民解决致富的难题！蓖麻毒素怎么提取蓖麻毒素是一种只要极小的剂量就能致人于死地的毒素。
如果吸入或吞服，致死剂量仅为1毫克，而如果进行注射的话，仅仅500微克此物质就能杀死一位成年人。
把蓖麻籽剥出来放在那个那个叫什么的东西呀？就是把中药咚咚咚压碎的，碗里面搞碎！再倒在烧杯里加纯洁水加温到沸腾后，用过滤纸过滤一道把蓖麻碎片过滤掉！注意这个时后的水已经有毒了！不要把它当纯洁水喝了啊！如果身体有伤口也不要遇这个水！接着把这个水倒在蒸发皿里蒸发，如果你要蓖麻毒素的晶体就蒸发干要液体就留1/4的水！就怎么简单提炼完成了！蓖麻毒素中毒症状中毒后数小时出现症状。
早期有精神不振，恶心呕吐，腹痛、腹泻、便血；继则出现脱水、血压下降，休克嗜睡；严重者可出现抽搐、昏迷，牙关紧闭；最后因循环衰竭而死亡。
少数病人可出现发烧、黄疸、便血、蛋白尿、无尿或血尿，终因酸中毒、尿毒症而死亡。
一种抗蓖麻毒素的中和性单克隆抗体3E1,其制备方法和用途[发明专利]
![一种抗蓖麻毒素的中和性单克隆抗体3E1,其制备方法和用途[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9c174288ddccda38366baf18.png)
专利名称：一种抗蓖麻毒素的中和性单克隆抗体3E1,其制备方法和用途
专利类型：发明专利
发明人：郭建巍,沈倍奋
申请号：CN200510123794.1
申请日：20051124
公开号：CN1970573A
公开日：
20070530
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种抗蓖麻毒素的中和性单克隆抗体3E1，该单克隆抗体的制备方法及其在制备蓖麻毒素检测试剂、疫苗以及诊断和治疗蓖麻毒素或免疫毒素中毒药物中的应用。
本发明从制备的蓖麻毒素半乳糖结合位点中和性单克隆抗体3E1杂交瘤细胞中克隆了抗体轻、重链可变区基因，所得轻链和重链可变区基因可编码正确的小鼠抗体可变区。
基于上述单克隆抗体的轻、重链可变区基因，可构建和表达多种小分子基因工程抗体，基于上述基因所编码的多肽或蛋白质，可以交联上多种生物活性分子，制备疫苗及用于蓖麻毒素检测、蓖麻毒素和免疫毒素中毒的诊断或治疗药物，具有广阔的应用前景。
申请人：中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所
地址：100850 北京市海淀区太平路27号
国籍：CN
更多信息请下载全文后查看。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
抗蓖麻毒素药物的筛选与评价
蓖麻毒素（ricin）是从蓖麻籽中提取的一种植物糖蛋白,属于RIPs家族,由两条通过二硫键连接的多糖肽链RTA与RTB构成。
Ricin具有毒性强、化学性质稳定、易获取等特点,严重威胁公众生命安全。
Ricin可以快速抑制蛋白质合成,在数小时内即可造成细胞和组织损伤,却
无明显的中毒症状,而目前缺乏特异性对抗药物,因此其中毒救治非常困难。
目前,对于ricin中毒患者临床上多采用催吐、透析等对症支持疗法,但对大剂量中毒或未及时送医患者疗效不佳。
研究目的:Ricin抗毒药物筛选及抗毒活性评价。
研究内容:⑴在细胞及动物水平筛选和评价单克隆抗体、Rivax疫苗等大分子抗ricin药物的抗毒效果;⑵在细胞及动物水平筛选和评价小分子抗ricin药物的抗毒效果,并采用联合用药的方式评价抗ricin药物的抗毒效果。
研究方法:⑴杂交瘤技术制备单克隆抗体,ELISA法检测抗体亚类以及抗体
与ricin结合特点,无细胞系蛋白合成抑制实验评价抗体对ricin抑制蛋白合成作用的影响,通过细胞实验与动物实验评价抗体的抗毒活性;⑵采用动物实验评价Rivax配伍铝佐剂和多糖佐剂免疫小鼠后对高剂量ricin中毒的抗毒效果;⑶CCK-8法评价小分子抑制剂与ricin处理后MDCK细胞的存活率,对小分子抑制剂的抗毒活性进行体外评价;研究小分子抑制剂和ricin处理后的小鼠存活率,对小分子抑制剂抗毒活性进行体内评价。
研究结果:⑴成功制备了五株单克隆抗体（13-4,13-2-4,8-1-1-8,AB6与S11）。
除13-4外,其他单克隆抗体均通过识别ricin不同表位与其结合,其中
8-1-1-8与13-2-4识别RTB链,S11识别RTA;无细胞系蛋白合成实验表明单克隆
抗体S11可抑制ricin诱导的蛋白合成抑制作用;细胞实验显示单克隆抗体AB6与S11可有效对抗ricin细胞毒性,EC<sub>50</sub>分别为26.79 ng×
mL<sup>-1</sup>与11.19 ng×mL<sup>-1</sup>;动物实验显示AB6与S11可以对抗2倍致死剂量ricin毒性。
⑵铝佐剂与茯苓多糖佐剂PCP-I配伍Rivax免疫小鼠可对抗9倍致死剂量ricin,小鼠存活率分别为90.91%与50%;淫羊藿多糖佐剂G1a配伍Rivax免疫小鼠可对抗3倍致死剂量ricin,小鼠存活率为77.78%。
⑶细胞实验结果表明,28个小分子抑制剂中,re705c与re706c在同时给药或预防给药时均可对抗ricin细胞毒性;re705c、re706c与ricin同时给药
时,EC<sub>50</sub>值分别为0.67±0.14μmol×L<sup>-1</sup>与0.39±
0.08μmol×L<sup>-1</sup>;预防给药时,EC<sub>50</sub>值分别为17.53±
1.37 nmol×L<sup>-1</sup>与0.44±0.08μmol×L<sup>-1</sup>;动物实验表明,中毒前0.5 h给予50 mg×Kg<sup>-1</sup>的re705c可延长小鼠存活时间。
AB6或S11与re705c联合用药可对抗
2.5倍致死剂量ricin毒性,AB6或S11单独用药时,小鼠存活率分别为30%和60%;联用re705c后,小鼠存活率分别为90%与100%。
结论:⑴单克隆抗体AB6与S11可对抗致死剂量的ricin中毒,可作为抗ricin候选药物进行下一步研究。
⑵铝佐剂与PCP-I多糖佐剂配伍Rivax免疫小鼠可对抗9倍致死剂量的ricin中毒,可作为Rivax抗原的候选疫苗佐剂使用。
⑶Re705c可提高中毒细胞的存活率,延长中毒小鼠存活时间,与单克隆抗体AB6联合用药可提高单克隆抗体的抗毒效果。