抗蓖麻毒素药物的筛选与评价

抗蓖麻毒素药物的筛选与评价

蓖麻毒素（ricin）是从蓖麻籽中提取的一种植物糖蛋白,属于RIPs家族,由两条通过二硫键连接的多糖肽链RTA与RTB构成。Ricin具有毒性强、化学性质稳定、易获取等特点,严重威胁公众生命安全。

Ricin可以快速抑制蛋白质合成,在数小时内即可造成细胞和组织损伤,却

无明显的中毒症状,而目前缺乏特异性对抗药物,因此其中毒救治非常困难。目前,对于ricin中毒患者临床上多采用催吐、透析等对症支持疗法,但对大剂量中毒或未及时送医患者疗效不佳。

研究目的:Ricin抗毒药物筛选及抗毒活性评价。研究内容:⑴在细胞及动物水平筛选和评价单克隆抗体、Rivax疫苗等大分子抗ricin药物的抗毒效果;⑵在细胞及动物水平筛选和评价小分子抗ricin药物的抗毒效果,并采用联合用药的方式评价抗ricin药物的抗毒效果。

研究方法:⑴杂交瘤技术制备单克隆抗体,ELISA法检测抗体亚类以及抗体

与ricin结合特点,无细胞系蛋白合成抑制实验评价抗体对ricin抑制蛋白合成作用的影响,通过细胞实验与动物实验评价抗体的抗毒活性;⑵采用动物实验评价Rivax配伍铝佐剂和多糖佐剂免疫小鼠后对高剂量ricin中毒的抗毒效果;⑶CCK-8法评价小分子抑制剂与ricin处理后MDCK细胞的存活率,对小分子抑制剂的抗毒活性进行体外评价;研究小分子抑制剂和ricin处理后的小鼠存活率,对小分子抑制剂抗毒活性进行体内评价。研究结果:⑴成功制备了五株单克隆抗体（13-4,13-2-4,8-1-1-8,AB6与S11）。

除13-4外,其他单克隆抗体均通过识别ricin不同表位与其结合,其中

8-1-1-8与13-2-4识别RTB链,S11识别RTA;无细胞系蛋白合成实验表明单克隆

抗体S11可抑制ricin诱导的蛋白合成抑制作用;细胞实验显示单克隆抗体AB6与S11可有效对抗ricin细胞毒性,EC₅₀分别为26.79 ng×

mL^-1与11.19 ng×mL^-1;动物实验显示AB6与S11可以对抗2倍致死剂量ricin毒性。⑵铝佐剂与茯苓多糖佐剂PCP-I配伍Rivax免疫小鼠可对抗9倍致死剂量ricin,小鼠存活率分别为90.91%与50%;淫羊藿多糖佐剂G1a配伍Rivax免疫小鼠可对抗3倍致死剂量ricin,小鼠存活率为77.78%。

⑶细胞实验结果表明,28个小分子抑制剂中,re705c与re706c在同时给药或预防给药时均可对抗ricin细胞毒性;re705c、re706c与ricin同时给药

时,EC₅₀值分别为0.67±0.14μmol×L^-1与0.39±

0.08μmol×L^-1;预防给药时,EC₅₀值分别为17.53±

1.37 nmol×L^-1与0.44±0.08μmol×L^-1;动物实验表明,中毒前0.5 h给予50 mg×Kg^-1的re705c可延长小鼠存活时间。AB6或S11与re705c联合用药可对抗

2.5倍致死剂量ricin毒性,AB6或S11单独用药时,小鼠存活率分别为30%和60%;联用re705c后,小鼠存活率分别为90%与100%。

结论:⑴单克隆抗体AB6与S11可对抗致死剂量的ricin中毒,可作为抗ricin候选药物进行下一步研究。⑵铝佐剂与PCP-I多糖佐剂配伍Rivax免疫小鼠可对抗9倍致死剂量的ricin中毒,可作为Rivax抗原的候选疫苗佐剂使用。

⑶Re705c可提高中毒细胞的存活率,延长中毒小鼠存活时间,与单克隆抗体AB6联合用药可提高单克隆抗体的抗毒效果。