药物的安全性评价试验方法详解演示文稿
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• 长期毒性试验：为观察药物的长期毒性 而设计的毒理学试验。又被称为重复给 药毒性试验。
长期毒性试验的目的
1、反复多次给药的情况下，实验动物出现的毒 性反应、量效关系、主要的靶器官、损害程度 及其可逆性。
2、获得反复给药情况下，实验动物能 耐收的剂 量范围及完全无毒性反应的安全范围。
一、一般原则
试验方法： 1、动物：小鼠或大鼠 2、动物分组：随机原则 3、剂量设计：5~6个剂量组（LD0~LD100）
4、给药途径：两种 5、观察时间：14天左右
• 6、观察指标：中毒症状、LD50
中毒症状：被毛，行为学变化，情绪，神 经症状（震颤、痉挛、抽搐、步态不稳 等），呼吸频率，肛门周围有无污染， 眼、鼻、口有无分泌物，体温，体重变 化等
病理切片
2、体外溶血试验
目的：观察静脉注射剂是否能引起溶血现象。 试验方法： （1）制备2%红细胞悬液 （2）加样 （3）保温 （4）结果观察 全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留 部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，管底有少量
红细胞残留 不溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色透明。
镜检红细胞不凝集。
3、给药途径：临床给药途径
4、试验对照： 5、观察时间：7~14天大体解剖
如有改变——组织切片
6、结果与评价：描述动物单次大剂量给药或 在24h内接受多次大剂量给药后，在短期内出 现的与药物相关的毒性反应，发生、发展过程 提供不引起动物死亡的最大剂量。
（四）固定剂量试验
不以死亡作为观察终点，而是以明显的毒性 体征作为重点进行药物的急性毒性评价。
高毒 （LD50<mg/kg ） 有毒或高毒，用
5mg/kg试验
试验结果
100%存活，毒性表 100%存活，无
现明显
明显毒性反应
有毒（LD50： 用50mg/kg试验 25~50 mg/kg）
有害（LD50： 用500mg/kg试
200~2000 mg/kg）
验
500 2000
有毒或有害，用 50mg/kg试验
测定指标：器官重量、血液学变化、血液 生化学指标
二、检测项目
1、日常观察： 一般指标：被毛、皮肤、眼睛、呼吸、行为活动、病 理检查等。 生长率 食耗
2、测定指标 血液学指标（红细胞、网织红细胞计数、血红蛋白、 白细胞总数级分类、血小板等） 血液生化指标（天门冬氨酸氨基转换酶、 丙氨酸氨酸 氨基转换酶、碱性磷酸酶、尿酸氮 、总蛋白、白蛋白、 血糖、 总胆红素、肌酐、 总胆固醇）
用500mg/kg试验
LD50>2000 mg/kg 用2000mg/kg试 验
该药物无严重急性中毒的危险性
（五）近似致死剂量试验
1、估计可能的毒性范围 2、按50%递增法，设计出含10~20个剂量
组 3、测出最低致死剂量和最高非致死剂量后，
用二者之间的剂量（即近似致死剂量） 给一只动物
三、LD50计算方法
3、过敏性试验（致敏试验）
• 目的：观察受试药物经注射给药后有无 过敏反应。
器官重量
三、检测指标的时间
（一）检查间隔 一般症状：每天观察记录 测定指标：定期检查
（二）恢复期观察 最后一次给受试药物后，部分动物
进行活杀检测各项指标，留下约1/3~1/4 动物进行恢复期观察。 恢复期观察目的：了解毒性反应的可逆性 和可能出现的延迟性毒性。
四、结果评价
1、试验结果数据应进行统计学处理 2、根据实验目的，结合观察到的毒性表现
度条件下，单次或24h内多次给予试验动 物不产生死亡的最大给药量试验。
常用于某些低毒的药物急性毒性试验。
（三）最大耐受量试验
• 单次给药引起动物出现明显的中毒反应 而未发生死亡的剂量。
• 多用于毒性较小的药物研究
试验方法：
1、动物：小鼠、大鼠、犬等 2、动物数：小动物10~20只；大动物4~6只 （雌雄各半）
药物的安全性评价试验方法详 解演示文稿
（优选）药物的安全性评价试 验方法
急性毒性试验的目的和意义：
1、测定药物的半数致死量及相关参数
2、通过观察药物急性中毒症状，推测药物的毒性 靶器官
3、为长期毒性试验和特殊毒性试验提供剂量设计 参考
二、试验内容
（一）半数致死量（LD50）
试验目的：观察一次给予受试药物后动物产生的 毒性反应和死亡情况，计算LD50。
1、试验动物：二种（啮齿类和非啮齿类） 动物数量、性别、年龄、敏感性
2、给药期限：一般为临床疗程的3~4倍时间 创新药品试验周期不少于90天
3、剂量选择：高中低三个组 高剂量组：能充分反映药物的毒性，但不能造成
太多动物死亡。 低剂量组：无毒。
4、给药方法：最好与临床给药途径一致
5、观察途径： 日常观察（生长率、食耗、一般观察等）
• Bliss法 • 加权概率单位法 • 寇氏法 • 改良寇氏法
LD50= ㏒ -1[Xm –i (∑P – 0.5)]
Xm：最大剂量的对数值 i ：相邻两组剂量对数值之差 P：各组动物死亡率，用小数表示（如死亡率为80％应写成 0.80） ∑P：各组动物死亡率之总和
第二节 新药长期毒性试验
• 长期毒性：试验动物连续多次接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应。
剖检检查：各脏器的变化等。
组织切片
急毒试验常见观察指针及可能涉及的组织、器官、系统
LD50测定的缺陷：
• 1、动物消耗量大，获得的信息有限 • 2、影响因素较多，数据重复性较差 • 3、从安全性评价角度来看，需要的不是
精确的LD50值，而是更多的毒性信息
（二）最大给药量试验 在受试药物合理的最大容积和最高浓
试验方法：选5、50、500、2000mg/kg四个固定剂量进 行试验 动物：大鼠 预试：50பைடு நூலகம்mg/kg 正式试验：根据预试结果，从四个固定剂量中选择一个 可能产生明显毒性，但不引起死亡的剂量进行试验。 观察指标：同半数致死量试验。
固定剂量法试验结果的评价
剂量 （mg/k
g）
5
50
存活数<100%
作出恰当的评价 3、通过实验结果确定毒性靶器官和毒性表
现 4、可结合其他试验同时观察
第三节 制剂的全身毒性试验
一、静脉注射制剂的全身毒性试验 1、血管刺激性试验 目的：观察受试静脉注射制剂经多次给药后对血
管刺激反应情况。 试验方法： 动物：家兔 分组：试验组、空白对照组 给药方法：多次静脉注射 观察指标：肉眼观察
长期毒性试验的目的
1、反复多次给药的情况下，实验动物出现的毒 性反应、量效关系、主要的靶器官、损害程度 及其可逆性。
2、获得反复给药情况下，实验动物能 耐收的剂 量范围及完全无毒性反应的安全范围。
一、一般原则
试验方法： 1、动物：小鼠或大鼠 2、动物分组：随机原则 3、剂量设计：5~6个剂量组（LD0~LD100）
4、给药途径：两种 5、观察时间：14天左右
• 6、观察指标：中毒症状、LD50
中毒症状：被毛，行为学变化，情绪，神 经症状（震颤、痉挛、抽搐、步态不稳 等），呼吸频率，肛门周围有无污染， 眼、鼻、口有无分泌物，体温，体重变 化等
病理切片
2、体外溶血试验
目的：观察静脉注射剂是否能引起溶血现象。 试验方法： （1）制备2%红细胞悬液 （2）加样 （3）保温 （4）结果观察 全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留 部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，管底有少量
红细胞残留 不溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色透明。
镜检红细胞不凝集。
3、给药途径：临床给药途径
4、试验对照： 5、观察时间：7~14天大体解剖
如有改变——组织切片
6、结果与评价：描述动物单次大剂量给药或 在24h内接受多次大剂量给药后，在短期内出 现的与药物相关的毒性反应，发生、发展过程 提供不引起动物死亡的最大剂量。
（四）固定剂量试验
不以死亡作为观察终点，而是以明显的毒性 体征作为重点进行药物的急性毒性评价。
高毒 （LD50<mg/kg ） 有毒或高毒，用
5mg/kg试验
试验结果
100%存活，毒性表 100%存活，无
现明显
明显毒性反应
有毒（LD50： 用50mg/kg试验 25~50 mg/kg）
有害（LD50： 用500mg/kg试
200~2000 mg/kg）
验
500 2000
有毒或有害，用 50mg/kg试验
测定指标：器官重量、血液学变化、血液 生化学指标
二、检测项目
1、日常观察： 一般指标：被毛、皮肤、眼睛、呼吸、行为活动、病 理检查等。 生长率 食耗
2、测定指标 血液学指标（红细胞、网织红细胞计数、血红蛋白、 白细胞总数级分类、血小板等） 血液生化指标（天门冬氨酸氨基转换酶、 丙氨酸氨酸 氨基转换酶、碱性磷酸酶、尿酸氮 、总蛋白、白蛋白、 血糖、 总胆红素、肌酐、 总胆固醇）
用500mg/kg试验
LD50>2000 mg/kg 用2000mg/kg试 验
该药物无严重急性中毒的危险性
（五）近似致死剂量试验
1、估计可能的毒性范围 2、按50%递增法，设计出含10~20个剂量
组 3、测出最低致死剂量和最高非致死剂量后，
用二者之间的剂量（即近似致死剂量） 给一只动物
三、LD50计算方法
3、过敏性试验（致敏试验）
• 目的：观察受试药物经注射给药后有无 过敏反应。
器官重量
三、检测指标的时间
（一）检查间隔 一般症状：每天观察记录 测定指标：定期检查
（二）恢复期观察 最后一次给受试药物后，部分动物
进行活杀检测各项指标，留下约1/3~1/4 动物进行恢复期观察。 恢复期观察目的：了解毒性反应的可逆性 和可能出现的延迟性毒性。
四、结果评价
1、试验结果数据应进行统计学处理 2、根据实验目的，结合观察到的毒性表现
度条件下，单次或24h内多次给予试验动 物不产生死亡的最大给药量试验。
常用于某些低毒的药物急性毒性试验。
（三）最大耐受量试验
• 单次给药引起动物出现明显的中毒反应 而未发生死亡的剂量。
• 多用于毒性较小的药物研究
试验方法：
1、动物：小鼠、大鼠、犬等 2、动物数：小动物10~20只；大动物4~6只 （雌雄各半）
药物的安全性评价试验方法详 解演示文稿
（优选）药物的安全性评价试 验方法
急性毒性试验的目的和意义：
1、测定药物的半数致死量及相关参数
2、通过观察药物急性中毒症状，推测药物的毒性 靶器官
3、为长期毒性试验和特殊毒性试验提供剂量设计 参考
二、试验内容
（一）半数致死量（LD50）
试验目的：观察一次给予受试药物后动物产生的 毒性反应和死亡情况，计算LD50。
1、试验动物：二种（啮齿类和非啮齿类） 动物数量、性别、年龄、敏感性
2、给药期限：一般为临床疗程的3~4倍时间 创新药品试验周期不少于90天
3、剂量选择：高中低三个组 高剂量组：能充分反映药物的毒性，但不能造成
太多动物死亡。 低剂量组：无毒。
4、给药方法：最好与临床给药途径一致
5、观察途径： 日常观察（生长率、食耗、一般观察等）
• Bliss法 • 加权概率单位法 • 寇氏法 • 改良寇氏法
LD50= ㏒ -1[Xm –i (∑P – 0.5)]
Xm：最大剂量的对数值 i ：相邻两组剂量对数值之差 P：各组动物死亡率，用小数表示（如死亡率为80％应写成 0.80） ∑P：各组动物死亡率之总和
第二节 新药长期毒性试验
• 长期毒性：试验动物连续多次接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应。
剖检检查：各脏器的变化等。
组织切片
急毒试验常见观察指针及可能涉及的组织、器官、系统
LD50测定的缺陷：
• 1、动物消耗量大，获得的信息有限 • 2、影响因素较多，数据重复性较差 • 3、从安全性评价角度来看，需要的不是
精确的LD50值，而是更多的毒性信息
（二）最大给药量试验 在受试药物合理的最大容积和最高浓
试验方法：选5、50、500、2000mg/kg四个固定剂量进 行试验 动物：大鼠 预试：50பைடு நூலகம்mg/kg 正式试验：根据预试结果，从四个固定剂量中选择一个 可能产生明显毒性，但不引起死亡的剂量进行试验。 观察指标：同半数致死量试验。
固定剂量法试验结果的评价
剂量 （mg/k
g）
5
50
存活数<100%
作出恰当的评价 3、通过实验结果确定毒性靶器官和毒性表
现 4、可结合其他试验同时观察
第三节 制剂的全身毒性试验
一、静脉注射制剂的全身毒性试验 1、血管刺激性试验 目的：观察受试静脉注射制剂经多次给药后对血
管刺激反应情况。 试验方法： 动物：家兔 分组：试验组、空白对照组 给药方法：多次静脉注射 观察指标：肉眼观察