免疫荧光试剂盒临床应用50页PPT
免疫荧光技术PPT课件
细胞采用涂片、印片或切片的方式制备抗 原片。
2 标本的固定: ⑴ 固定目的
防止细胞、细菌或切片从玻片上脱落。
去除组织中妨碍抗原抗体结合的类脂质。
易于保存。
(但CD、SIg的检测不进行固定,而采用 活细胞染色)。
⑵ 常用的固定方法:
抗原 固定方法
直接法原理示意图
抗原 抗体
标记 抗体
荧光 光原
间接法原理示意图
抗体
补体
标记 抗补 体抗 体
荧光
光 源
补体结合法原理示意图
㈢荧光显微镜检查: (由实验课介绍)
三、其它免疫荧光技术 1 流式细胞仪 2 时间分辨免疫荧光技术 3 荧光偏振免疫分析技术
时间分辨荧光免疫测定
(time-resolved fluoresence immunoassay,TR-FIA)
第四步: 取出透析袋,进行纯化、鉴 定。
搅拌法
第一步:
第二步:
第三步:
液 第四步:
拌
将含40mg/ml BP 溶液5ml 装入反应瓶中。
加入pH=9.0、0.5mol/L碳酸盐 缓冲液4ml
25℃磁力搅拌下,逐滴加入 1ml含2mg的FITC溶
25℃下搅拌1h,4℃下继续搅
2 荧光抗体的纯化: ⑴ 除去未结合荧光素 ⑵ 除去标记不适当的抗体 ⑶ 除去非特异反应物质
按100mg组织粉/ml标记抗体比例混合, 4℃磁力搅拌1h,静置1h,离心取上清液,在 用50mg/ml比例重复一次。
SUCCESS
THANK YOU
2019/7/31
3 荧光抗体的鉴定: ⑴ 抗体含量测定:双扩法
⑵ 结合比率(F/P)测定:
荧光PCR快速检测试剂盒(共72张PPT)
先用高Tm降低5 C做4-5循环,在使用低Tm值。 荧光定量PCR的临床应用
o
与分子空间的距离紧密相关,一般为7-10nm时即可发生FRET,距离越长,FRET现象减弱.
抗病毒药物疗效的观察、指导
PCR反应体系
Taq酶(DNA聚合酶) – 按模板配对原则,把dNTP串联出一新链 – 耐热,94度1小时仍有50%的聚合活性 – 离子依赖性:反应缓冲液中要有Mg++ – 有核酸外切功能(可实现荧光PCR) – 抑制剂:离子表面活性剂,尿素、甲酰胺、 二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜(DMSO)、 Tween20,NP-40、Tritox-100在高浓度时 也可抑制
探针设计
根据不同的荧光PCR原理进行设计
常见的TaqMan探针:基本原则与引物设计相似, 不过Tm值一般比引物高10℃左右。
针对检测区段的最保守区设计 先确定探针,再确定引物 与探针同向的引物不能离的太远 扩增区段一般为100bp左右,不宜过长。
BHQ:black hole quencher
PCR反应体系
❖ 反应缓冲液中可加一些PCR促进剂
明胶
Triton X-100 稳定酶的活性
BSA
DTT
甘油
DMSO
降低解链温度,提高反应特异性
甲酰胺
TMAC(氯化四甲基铵)
gp32(T4噬菌体基因32蛋白)
甜菜碱
PCR反应体系
dNTP – 组成核酸长链的一个个小单元 – dATP,dGTP,dCTP,dTTP,dUTP…
引物设计
②引物碱基:GC%以40-60%为宜,ATGC最好随机分布,避 免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
③引物对位置与跨度: 据使用目的而定,多选用保守区段进 行扩增,特异性,一般扩增不超过1kb。
免疫荧光试剂盒临床应用PPT课件
妊娠期
甲硝唑500mg,口服,2次/d,共7d
甲硝唑250mg,口服,3次/d,共7d
氯洁霉素300mg,口服,2次/d,共7d
哺乳期
选择局部用药,尽量避免全身用药
奈瑟氏淋球菌
1.临床意义
造成淋病的病原微生物,引发以泌尿生殖道化脓性炎症为
主要临床症状的性传播疾病 淋病是常见的性传播疾病之一,且发病率呈上升趋势,已 构成威胁公众健康的重大疾病 妊娠期感染淋病对母婴危害极大,宫内感染易致自然流产、 早产及胎儿宫内发育迟缓 分娩时母婴垂直传播,可致新生儿淋病性结膜炎,治疗若 不及时彻底,新生儿有致盲的危险 淋病孕妇产后易发生散播性淋病
背景复杂易漏检需要实验者具备丰富的实践经验寻找足够数量的线索细胞不具备特异性阴道加德纳菌免疫荧光法94539751操作简便检测时间短可直接检测出主要致病菌标本需要量少特异性强结果判断直观灵敏度高等优点直接检测病原微生物检测意义清晰2019121616阴道加德纳菌阳性图片2019121617治疗方案非孕期推荐方案甲硝唑500mg口服2次d共7d075甲硝唑膏5g阴道上药2次d共5d2克林霉素膏5g阴道上药1次晚共7d替代方案克林霉素300mg口服2次d共7d克林霉素栓300g阴道上药1次晚共3d2019121618妊娠期氯洁霉素300mg口服2次d共7d哺乳期选择局部用药尽量避免全身用药2019121619奈瑟氏淋球菌造成淋病的病原微生物引发以泌尿生殖道化脓性炎症为主要临床症状的性传播疾病淋病是常见的性传播疾病之一且发病率呈上升趋势已构成威胁公众健康的重大疾病妊娠期感染淋病对母婴危害极大宫内感染易致自然流产早产及胎儿宫内发育迟缓分娩时母婴垂直传播可致新生儿淋病性结膜炎治疗若不及时彻底新生儿有致盲的危险淋病孕妇产后易发生散播性淋病1
免疫荧光技术(精选)PPT文档共48页
谢谢!
48
免疫荧光技术(精选)
61、辍学如磨刀之石,不见其损,日 有所亏 。 62、奇文共欣赞,疑义相与析。
63、暧暧远人村,依依墟里烟,狗吠 深巷中 ,鸡鸣 桑树颠 。 64、一生复能几,倏如流电惊。 65、少无适俗韵,性本爱丘山。
▪
26、要使整个人生都过得舒适、愉快,这是不可能的,因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
▪
27、只有把抱怨环境的心情,化为上进的力量,才是成功的保证。——罗曼·罗兰
▪
28、知之者不如好之者,好之者不如乐之者。——孔子
▪
29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
▪
30、意志是一个强壮的盲人,倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
免疫荧光技术课件概要ppt
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的,应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失,增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
3. 四乙基罗达明(tetraethyl rhodamineB200,RB200) RB200是褐红 色粉末状,溶于乙醇和丙酮,不溶于水。 最大吸收光谱为570nm,最大发射光谱为 596~600nm,呈橙红色荧光。因为 RB200比较低廉,广泛用于染色和双标 记示踪或染色。RB200不能直接和蛋白 质结合,要先经五氯化磷(PCI5)作用 下转变成黄酰氯(S02C1),在碱性条件 下易与赖氨酸s氨基反应而结合在蛋白分 子上。其分子质量为580u。
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的,应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失,增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的,应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失,增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
在一定的条件下,电子可吸收能量 (如光能,热能,电能,机械能等)跃 迁到较高能量级(即激发态),这个过 程叫激发。处于激发态的电子是不稳定 的,它总是要跃迁回到基态,并将多余 的能量释放出来。跃迁方式可能是辐射 跃迁,也可能是非辐射跃迁。以非辐射 跃迁时,能量大多转化为热能,而以辐 射方式跃迁时,能量转化成相应波长的 光,这个过程叫发射。
一、标记方法:
采用FITC标记抗体的方法
常用Marsshall(1958)法标记荧光抗 体,也可以根据条件用Chadwick等 (1960)标记法或Clark等(1963)的透 析标记法。
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的,应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失,增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
免疫荧光技术在某些皮肤病中的应用PPT课件
EBA 损害周围皮肤
基底膜线状C3、IgG
16
疾 病 活检部位
沉积部位
线状IgA大 疱性皮肤病
损害周围皮 肤
基底膜线状IgA、IgG
疱疹样皮炎
损害附近正 常表现皮肤
真皮乳头IgA、C3
妊娠疱疹
损害周围皮 基底膜线状C3、偶
肤
IgG
扁平苔癣类 天疱疮
大疱周围皮 肤和扁平苔 藓样损害
基底膜线状IgG、C3
• 缺点:
•(1)由于参加的因素多,受干扰的机会也多, 故结果有时判断困难。 •(2)方法较麻烦,时间较长。
11
•3、补体荧光抗体法:用荧光素标记的抗
补体抗体检测未知抗原或未知抗体。
• 抗原+抗体
• +补体
• 复合物
•
抗原
抗体
补体
12
• 优点:
•
具有间接法的一些优点。
• 缺点:
•
非特异性荧光更多。
抗原结合。在组织中形成含有荧光
标记的抗体—抗原复合物,再用荧
光显微镜观察标本。
7
•(二)方法:
•
1、直接法(DIF):用荧光素标记的特
•异性抗体来检查未知抗原。如组织中存有相
•应的抗原,便结合,形成复合物。
•
抗原
•
• 复合物
标记抗体
玻片
标记抗原抗体
8
• 优点:
•(1)方法简单,需时短。 •(2)特异性强。
IgG、IgM、IgA、C3 胶样小体
17
疾 病 活检部位
沉积部位
红斑狼 皮损和正常 表皮、真皮连接处颗粒状IgG、
疮
皮肤(SLE)IgM、IgA
免疫荧光技术课件PPT课件
蛋白质相互作用研究
总结词
免疫荧光技术可用于研究蛋白质之间的 相互作用,揭示生命活动的分子机制。
VS
详细描述
利用两种不同颜色的荧光标记抗体分别与 两种蛋白质结合,通过荧光共振能量转移 等技术,可以观察到两种蛋白质在空间上 的接近程度,从而推断它们之间的相互作 用。
药物筛选与开发
总结词
免疫荧光技术可用于药物筛选和开发过程中,评估药物对细胞或组织的影响。
多模态成像融合
将免疫荧光技术与光声成像、光学相干成像等其他成像技 术融合,实现多模态、多维度的生物分子成像,将有助于 更全面地了解生物样本的结构和功能。
临床应用转化
加强免疫荧光技术的临床应用研究,将其应用于疾病的早 期诊断、疗效评估和预后判断等领域,提高临床诊疗水平。
THANKS
感谢观看
研究和发展新的抗体和荧光标记技术,提高免疫荧光技术的灵敏度 和特异性,降低假阳性结果。
多标记检测
实现多标记免疫荧光技术,能够在同一样品上同时检测多种目标分 子,提高实验的信息量。
05
免疫荧光技术的应用实例
细胞内抗原定位
总结词
通过免疫荧光技术,可以精确定位细胞内的抗原,有助于研究细胞结构和功能。
详细描述
抗体
结合方式
荧光物质通过化学键与抗体结合,形 成荧光抗体,这种荧光抗体可以特异 性地结合抗原,形成抗原-抗体-荧光 抗体的复合物。
抗体是免疫系统产生的一种蛋白质, 能够特异性地结合抗原,形成抗原-抗 体复合物。
荧光信号的激发与检测
激发方式
荧光信号的激发通常采用特定波 长的光,如紫外光或蓝紫光,这 些光能够激发荧光物质发出可见
光。
检测设备
检测设备通常采用荧光显微镜, 能够检测到荧光信号并对其进行
医学免疫学检验免疫荧光技术课件
由于免疫荧光技术需要使用昂贵的荧光标记抗体,因此检测成本 较高,限制了其在临床上的广泛应用。
对实验人员要求高
免疫荧光技术需要具备一定的实验技能和经验,对实验人员的专业 素质要求较高。
免疫荧光技术的应用前景和研究方向
应用前景
免疫荧光技术在医学、生物学和化学等领 域具有广泛的应用前景,特别是在医学诊 断和研究中发挥着重要作用。
医学免疫学检验免疫荧光 技术课件
xx年xx月xx日
目录
• 免疫荧光技术概述 • 免疫荧光技术的基本原理和分类 • 免疫荧光技术的应用 • 免疫荧光技术的操作流程 • 免疫荧光技术的优缺点 • 免疫荧光技术在医学检验中的应用案例分析
01
免疫荧光技术概述
免疫荧光技术的定义与特点
定义
免疫荧光技术是一种在生物体上应用荧光素标记抗体,从而 检测特异性抗原的方法。
荧光显微镜观察
使用荧光显微镜观察样品,并在激发波长下观察荧光信号。
结果记录与分析
记录荧光信号的强度、分布和颜色等信息,并对这些信息进行分析,以确定 抗原的存在和定位。
影响因素和注意事项
温度和湿度
抗原分布和抗体特异性
免疫荧光技术的结果受温度和湿度的影响较 大,因此需要在恒温恒湿的环境中进行操作 。
抗原在细胞中的分布和抗体与抗原的特异性 结合是影响免疫荧光技术结果的重要因素。
04
免疫荧光技术的操作流程
样品制备
01
样品选择与处理
选择适当的临床样品,如血清、组织切片等,并进行适当的预处理,
以去除杂质和提高样品质量。
02
细胞固定
将样品在室温下与适量的缓冲液混合,然后加入适量的甲醛或乙醇,
以固定细胞并保持其完整性。
ELISA试剂盒实验教程(共55张PPT)
结果
3.1.6 封闭
原理
类型 试剂 准备
对照 标本
封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再 包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙 ,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。 常用封闭剂:0.05%-0.5%的BSA; 10%的小牛血清或1%明胶; 脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%)。
对照 (3)酶反应的底物。
可设计出各种不同类型的检测方法。
标本
结果
原理
双抗体夹心法测抗原
类型
试剂 准备
对照
标本 结果
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、
HBeAg、AFP等。只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于
包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。
原理 2.2.2 双抗原夹心法测抗体
后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱过夜或冷风吹干,待酒精挥发后,
让脂质自然干固在固相表面。
优点:试验的特异性、敏感性均由此得以改善,重复性亦佳。抗原用量
少,仅为直接包被的1/10乃至于/100。
结果
原理 包被用抗原:
类型 天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。
试剂 准备
对照
合成多肽抗原是抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。一般只含 有一个抗原决定簇,纯度高,特异性也高,但由于分子量太小,往往难 于直接吸附于固相上。借助于偶联物与固相载体的吸附,间接地结合到 固相载体表面。
原理 3.1.5 包被的条件
类型
pH9.6碳酸盐缓冲液
pH7.2的磷酸盐缓冲液
试剂 准备
pH7-8的Tris-HCL缓冲液。
加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置过夜,37℃中保温2小时。包
免疫荧光试剂盒临床应用
琥乙红霉素800mg,口服,4次/日,共7天
阿奇霉素1g,一次顿服
阴道加德纳菌
1.临床意义
造成细菌性阴道炎的主要病原体,在阴道分泌物中检出阴道
加德纳菌可用于诊断细菌性阴道炎
引起尿道炎和阴道炎 导致早产、低体重儿、绒毛膜炎、羊膜炎、羊水感染、子宫 内膜炎、急性输卵管炎、手术后感染和子宫颈癌等 经性接触传播,与男性非淋菌性尿道炎有一定关系 影响精子质量,是男性不育的重要原因之一 妊娠期感染,可能导致自然流产、早产 产前、孕早期上行感染可致胚胎停止发育
3. 临床检验方法
临床检验 灵敏性(%) 方法 特异性 (%) / 优缺点 操作简便,对男性急性样本准确率较高。 对于慢性样本及女性样本,由于杂菌较 多,背景复杂,易漏检。 不适用女性患者,尤其是慢性女性患者 受标本的采集、运输、保存以及病人的 病情等因素影响较大,测定所需时间较 长,不利于快速诊断与及时治疗,并且 易受抗生素影响,出现假阴性。 阳性检出率偏低,报告时间长 操作简便,检测时间短,不受标本的运 输、保存及菌体活力影响,灵敏度高、 特异性强,适用于临床各期患者。 快速、准确、操作简单
病理学及免疫组织化学中准确又快速的一种免疫学实验方法。
1 免疫荧光原理
将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上
,与样本中的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一
种特异性荧光反应。 基本反应原理为抗原—抗体间的反应
2 免疫荧光特点
特异性强、敏感性高、检测速度快 (单个样本处理时间约40分钟,批量样本报告时 间以半天或隔天最佳)
女童淋病:可见阴道口、尿道口、会阴部红肿,病变部位可出现糜 烂、溃疡和疼痛。阴道有脓性分泌物,排尿困难。
2.2 有合并症淋病 2.2.1 男性淋病合并症
医学免疫学检验-免疫荧光技术课件
医学免疫学检验-免疫荧光技术课件xx年xx月xx日CATALOGUE目录•免疫荧光技术概述•免疫荧光技术的基本原理和步骤•免疫荧光技术的临床应用•免疫荧光技术的质量控制和标准化•总结与展望01免疫荧光技术概述免疫荧光技术是一种将抗原-抗体反应与荧光标记相结合的免疫学技术,通过荧光显微镜观察样本中待测抗原的含量和分布。
定义免疫荧光技术利用抗原-抗体反应的特异性,将荧光标记物与抗体结合,对待测样本中的抗原进行特异性识别和结合,形成抗原-抗体复合物,再通过荧光显微镜观察复合物发出的荧光信号,从而确定抗原含量和分布。
原理免疫荧光技术的定义和原理1免疫荧光技术的应用范围23免疫荧光技术广泛应用于感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等临床疾病的诊断和鉴别诊断。
临床诊断免疫荧光技术还可用于细胞生物学、分子生物学等基础研究中,研究细胞和分子的定位、表达、相互作用等。
基础研究免疫荧光技术可用于药物筛选和药物作用机制研究,通过观察药物与细胞或组织的作用,评估药物的疗效和安全性。
药物研发20世纪40年代免疫荧光技术由瑞典科学家Axelsson和英国科学家Coons首次建立。
20世纪60年代免疫荧光技术得到广泛应用和发展,逐渐成为医学、生物学等领域的重要技术手段。
21世纪初随着新技术如激光共聚焦显微镜、多光子显微镜等的应用,免疫荧光技术不断发展,提高了分辨率和灵敏度,拓展了应用范围。
免疫荧光技术的发展历程02免疫荧光技术的基本原理和步骤免疫荧光技术的核心原理是抗原-抗体反应,即利用特异性抗体与相应抗原的结合反应,实现目标抗原的检测和识别。
免疫荧光技术利用荧光标记物作为示踪剂,将荧光染料标记在特异性抗体上,形成荧光抗体,再与目标抗原结合,形成的抗原-抗体复合物在一定激发波长下能发射出荧光信号,从而实现抗原的定量和定位检测。
样品制备将待检测组织或细胞制备成单细胞悬液,固定在载玻片上,制成涂片或组织切片。
免疫荧光染色将制备好的样品进行预处理,加入荧光抗体标记的一抗,室温孵育一定时间;洗涤后加入荧光标记的二抗,再次室温孵育一定时间;洗涤后加入缓冲甘油等封片介质,封片。
放射免疫荧光标记免疫课件
在反应过程中,应保 持恒温、恒湿,避免 外界因素干扰。
确保抗原抗体比例合 适,反应时间充足, 以保证反应的充分进 行。
洗涤与分离
将反应后的抗原抗体复合物进行 洗涤与分离,去除未结合的抗原
或抗体。
洗涤与分离的目的是为了提高实 验的特异性,减少背景干扰。
洗涤与分离时应保证细胞或组织 的完整性,避免过度洗涤导致抗
药物研发
用于药物筛选、药效评价 及药物代谢研究等。
02 放射免疫荧光标记免疫实 验操作流程
实验准备
实验材料
抗原、抗体、荧光标记物 、细胞或组织样本等。
实验试剂
缓冲液、洗涤液、标记液 等。
实验仪器
显微镜、荧光检测仪、离 心机等。
抗原抗体反应
将抗原与抗体按照一 定比例混合,在一定 温度下反应一定时间 。
使用荧光显微镜观察标记的样本,记录荧光信号 的强度和分布。
定量分析
通过测量荧光信号的强度,对样本中的目标分子 进行定量分析。
灵敏度与特异性
评估实验方法的灵敏度和特异性,确保结果的可 靠性。
数据分析与解读
数据处理
对实验数据进行整理、清洗和转换,确保数据的质量 和可用性。
统计分析
运用适当的统计分析方法,对数据进行分析和解释。
物疗效监测等。
临床转化与实际应用
标准化与规范化
建立荧光标记免疫技术的标准化操作流程和质控体系,确保检测 结果的可靠性。
临床验证
开展多中心临床试验,验证荧光标记免疫技术在不同疾病诊断中 的有效性。
普及推广
通过培训和交流,提高医务人员对荧光标记免疫技术的认识和应 用能力,推动其在临床的广泛应用。
04 放射免疫荧光标记免疫实 验注意事项与安全防护