无精症或严重少精症患者Y染色体微缺失的检测

［Ｊ ｏｅｔ Ｃ Ｆ ｒｎＡ Ｍｏ ，ｅ ａ． ｃ ｄｌｔ ｎｏ ｈｏ ｏｏ ｅＹ ４ Ｆ ｒｓ ， ｅｌ ， ｒ Ｅ ｔ Ｍｉｒ ｅ ｉ ｆ ｒｍ ｓｍ ａ ｉ ｏ １ ｏ ｅｏ ｃ
ｉ ｌ ｉ ｅｔｉ ：ｏｅｏ ｅＤ Ｚｇｎ ［ Ａ ｎｈ ｅ ｔ２ ０ ， ｎｍａ ｎ ｒｌｙ ｒｌ ｆ ｈ Ａ ｅｅ￣． ｎ ａ Ｍ ｄＩ ． ０ １ ｅ ｆ ｉｔ ｔ ｌ ｎ
察 分 析带 纹 ， 检测 ｓ Ｇ Ｐ Ｙ基 因有无 缺失 。
５ 标 本 中检 出 Ｓ Ｇ ２例 Ｐ Ｙ基 因缺 失 ４例 ． 失 率 缺
７６ ％。其 中无 精子 症 ３例 ．约 占无 精 子 症 患者 的 ． ９ ６６ ％： 重 少 精子 症 １ 。 占严重 少 精 子症 患 者 ． ７ 严 例 约
男 性 外 周 血 Ｄ Ａ进 行 Ｙ 染 色 体 微 缺 失 域 研 究 以 Ｎ 来 ． 已 经 确 定 Ｙ 染 色 体 上 Ａ Ｆ 、Ｚ ｂＡ Ｆ Ｚ ａ Ａ Ｆ 、 Ｚ ｃ和 ＡＦ Ｚ ｄ是 与精子 生成相 关 的 ４个 区域 Ａ Ｆ Ｚ ａ缺 失者
７ ％表现 为仅 有 Ｓ ｒ ｌ细 胞 ．５ ５ ｅｔ ｉ ｏ ２ ％有 部 分 精 子 生 成
Ｇ Ａ 一 ’Ｐ Ｏ （ｌ ｉ 一 Ａ Ｃ Ｉ Ａ Ｃ Ｃ Ｃ Ｔ Ｔ Ｃ ３ ，Ｃ ４ ｏ ｎ ｇ ｂ ）５ Ｃ Ａ Ｔ？ Ｔ ２ Ａ Ｇ Ｃ
作 者 单 位 ：３０ ６ 南 昌大 学 第 一 附 属 医 院 泌 外 研 究 所 ３００
自 １９ ９ ４年 Ｋ ｂ ｙｓ ｉ 采用 Ｐ Ｒ 方 法 对 不 育 ｏ ａ ａｈ 等 Ｃ
附 图 Ｐ Ｒ产 物 ｌ 脂 糖 凝 胶 电泳 ： Ｍａｋ ｒ１健 康 男 性 ： 水 Ｃ ％琼 Ｍ： ｒｅ； ： ２：
３ ５ 男 性 无 精 子症 或 严 重 少 精 子 症 患者 。 －：
生相 关基 因微缺 失可能 通过辅 助生殖技 术传递 到患 者 的男 性后代 『． ｌ 因此 ． ３ ｊ Ｙ染 色体微 缺 失 的筛 查 和患 者选 择 临床治疗 方式 的遗传咨 询也是值 得关 注的 问
常 规将 Ｙ 染 色体 微 缺 失 的筛 查 作 为对 男 性 不
育患 者 的一项 常规 检查项 目， 以利于长 期 、 系统 开展 研究 ： 对原 因不 明无 精子 症 或严 重少 精 子症 患 者进
行 Ｙ染 色体 微缺 失 检测 ． 以明确 患者 生精 障碍 的原 因， 为诊 断与 治疗 提供 指导 。由于 Ｙ染色体 精 子发
色体 功能 研究 的新 领域 。经 过 近 ３ Ｏ年 的研究 ． 目前 将Ｙｌ ｑ １划分 为 Ａ Ｆ 、 Ｚ ｂ和 Ａ Ｆ Ｚ ａＡ Ｆ Ｚ ｃ３个互 相 并不
重叠 的 区域 ． 发现 了至 少 １ ５个 与精 子发 生相关 的基
因嘲 。
基 因 引 物序 列 ．正 向 引 物 ：’ ｒ Ａ Ａ Ａ Ａ Ｃ ５一 Ｃ Ｃ Ｔ Ｃ Ｇ — 几Ｔ
Ｃ Ｔ Ａ ＴＩ Ｇ 一 ’ Ａ Ｆ ＡＧ ＴＡ Ｃ ３ ；反 向 弓 物 ： ’ Ａ Ａ ＴＩＴ— Ｉ ５ 一 Ｃ Ａ ｒ ｒ １
Ｇ Ｔ Ｇ Ｃ Ｇ ＡＣ Ｃ Ａ 一 ’ Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ａ Ａ Ａ ＧＣ ３ 扩增 产 物 ４ ０ ｐ ： ６ ｂ 对
照 引物 ： Ｈ ０ｆ ｌｂｎ ’ Ｇ Ａ Ａ Ｃ Ａ Ｇ Ａ Ａ Ｇ ２ ｇ ｉ１ 一 Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ａ Ｇ Ｃ Ｇ ｏ ５
２ 结果
应 用 多重 聚合 酶链 反 应 ｆ Ｃ 对 部分 男 性不 育 患者 Ｐ Ｒ）
进 行 Ｙ染 色体 微 缺失 检 测 ． 了解 Ｓ Ｇ Ｐ Ｙ基 因 片断 的 缺 失情 况 ． 分析其 与 男性 不育 的关 系 ． 现报 告如 下 。 １ 资料 与方 法
１１ 研 究 对象 ．
电 泳后 样 板 置 紫 外 透 射仪 下 观
Ｉ 词 】 男 性 不育 ； 染 色 体微 缺 失 ； 精 子 症 ； 重 少 精 子 症 关键 Ｙ 无 严
据 ＷＨＯ调查 ． 在育 龄 夫 妇 当 中约有 １％～ ５ ０ １％ 患 者不 育 ， 中男 性 因 素约 占 ４ ％～ ０ ． 其 ０ ５ ％ 而精 子 生 成 障碍 的则 占其 中的 ３ ％『 自 １７ ０ １ ］ 。 ９ ６年 ． 国外 学 者
【 要】 目的 探 讨不育男性无精子症或 严重少精子症与 Ｙ染色体微缺失之 间的关 系 。 方法 利用 摘
多 重 Ｐ Ｒ 法 检 测 无 精 子 症 或 严 重 少精 子 症 患 者 的 Ｙ染 色 体 微 缺 失 情 况 结 果 Ｃ ５ ２例 无 精 子 症 或 严 重
Ｙ 染 色 体 微 缺 少 精 子 症 患 者 中 共检 出 Ｙ 染 色 体 微 缺 失 ４例 ， 失 率 为 ７６ ％。 精 液 正 常 者（ 照 组１２例 未 发 现 Ｙ 染 色 缺 ．９ 对 １ 体 微 缺 失 。４例 Ｙ染 色体 微 缺 失 的 无 精 子 症 患者 睾 丸 细 胞 学 检 查 均 未 发 现 精 子 。 结 论 失 是造 成 男 性 精 子 发 生 障碍 的常 见 病 因之 一
Ｔ ＡＣ 一 ’扩 增产 物 ２ ０ Ｄ Ｃ Ｃ３， ５ｂ 。
ｌ ． 多 重 Ｐ Ｒ 反 应 试 剂 由大 连 宝 生物 工 程 公 －３ ２ Ｃ
司提供 。 总反应 体 ５ 。 ０ Ｃ ０ ｌ ５ ｌ Ｒ反应 体 系包括 去 Ｐ 离 子 水 、 冲 液 、 Ｎ Ｐ、 缓 ｄ Ｔ 引物 、 ａ Ｎ Ｔ ｑ Ｄ Ａ聚 合 酶 以及 模板。 Ｃ Ｐ Ｒ反应 条件 ９ ｏ ｒ ｎ ９ ℃ ３ ｓ６ ｃ ５ ． ３Ｃ ３ ｉ ，３ ０ ，５Ｉ２ ｓ ａ Ｃ ７ ℃ ４ ｓ３ ２ ５ 。０个 循环 。２Ｃ ｌ ｍ ｎ ７ ｏ Ｏ ｉ 。所 使用 Ｐ Ｒ 扩 增 Ｃ
．
１７ ９ ６年 ． ｉ ｏｏ研究 发 现 Ｙ染 色体 的 Ｙ １ Ｔｅ ｌ ｐ ｑ １区
１ ． 引物 ．２ ２
由大 连 宝 生 物 工 程 公 司合 成 ．Ｐ Ｙ ＳＧ
存 在与 精 子发 生 相关 的基 因 ．并 将 Ｙｑ 命 名 为无 ｌ １ 精 子 因子 （ ｏ ｓｅｍｉ ｆｃ ｒＡ Ｆ ， 而 改变 了人 们 ａ ｏｐ ｒ ａ ａｔ ， Ｚ １从 ｚ ｏ 传 统观念 上 对 Ｙ染 色 体 功能 的认 识 ． 开创 了 Ｙ染 并
Ｈａｅ ａ ， ０ ２ １ １２： ８ ｌ ０２ ２２ １ ｒｆ ｈ ２ ０ ， ４ （） ７ 一 ８ ， ，２ ． ｕ １ ２
后 的细 胞缺 乏． 提示 在 青春 期减 数 分裂前 或 减数 分 裂 中精 子发 生 中断 ． 人 的睾 丸活 检 切片 中不 能发 病 现 任何表 型变化 大部 分人 Ａ Ｆ Ｚ ｂ缺失 引起 不育． 而
ｏｉ ｚｏｐｒ ｉ［ ． ｍ Ｇ ｎｔ２０ ． （） ６ ７ ． ｌｏｏｓｅｍ ａ ］Ｊ ｇ Ｊ Ｈｕ ｅ ｅ ０ １ ６２： ￣ ９ ． ４ ７ ［】 ｌｉ ｎＳ ， ｇｖＩ ａ ｅ ａ． ｈ ｒｇｏｔ ａ ｅｏ ｅｓｔ ３ Ｋｅ ｍａ Ｅ Ｙｏｅ ＾ＰｚＧ，ｔ １Ｔ ｅｐｏｎ ｓｃｖｌ ｆｈ ｉ ｉ ｕ ｔ ｅ ａ ｄｅｔｎ ｆ ｈｏ ｏｏ ｉｒｄｌｔｎ ｎｓｅｍａ ｇｎ ｓ Ｊ． ｎ ｘ ｔ ｅ ｒｍ ｓｍｅｍｃ ｅ ｉ ｓｏ ｐｒ ｔ ｅｅｉ １ ｅ ｏＹ ｏ ｅｏ ｏ ｓ［
５ Biblioteka Baidu例 男 性无 精 子症 或 严 重 少 精 子 症 患 者 均 为 自 ２０ ０ ７年 １月至 ２ ０ ０ ８年 １ 在本 院进 行单 精子 卵 月
细 胞 浆 注 射 （ ｔ ｃｔｐａｍｉ ｓｅｍ ｉｊｃｉ ， Ｓ） ｉ ｒ ｙ ｌｓ ｃ ｐｒ ｅｔｎＩ Ｉ ｎａ ｏ ｎ ｏ Ｃ 治
［］ ｏ ｏｉＳ Ｎ ｋ ｔ Ｙ Ｓ ｋｔ Ｋ ｅ ａ． ｎ ｌ ｉ ｆｒｍｅｏ ｅｅｏｓｏ ２ Ｋ ｍ ｒ ， ａａａ ， ａ ａ ， ｔ １Ａ ａｙ ｓ ｏ ｉｒｄｌｔ ｎ ｆ ａ ｓ ｉ
Ｙ ｃ ｒ ｍｏ ｏ ｉ ｓｎ ｌ ｐ ｒ ｔ ｚ ｏ ｆｏ ｈ ｏ ｓ ｍｅ ｎ ａ ｉ ｇｅ ｓ ｅ ｍａｏ ｏ ｎ ｒ ｍ ａ ｍａ ｔ ｓ ｖ ｒ ｎ ｗｉｈ ｅ ｅ ｅ
男性 ＳＧ Ｐ Ｙ基 因均得 到 Ｄ Ａ 扩 增产 物 见附 图 Ｎ ３ 讨论 Ｙ染 色体微 缺 失是 引起 男性 不育 的 常见 原 因之
一
１ 方 法 ． ２
１． Ｎ ．１ ２ Ｄ Ａ提 取 取 患 者 外 周 血 １ ． Ｄ Ａ抗凝 。 ｍ１Ｅ Ｔ Ｃ ｅ ｘ １ ０提取 Ｄ Ａ。 ｈｌ 一 ０ ｅ Ｎ
无 精 子 因子 Ａ Ｆ区域微 缺 失【 我 院 自 ２ ０ Ｚ ３ Ｊ ０ ７年 起 ．
仪 为 Ｐ ９０ Ｅ ６ ０型 ｆＥ公 司 ． 国１ Ｐ 美 。为 避 免 假 阳性 结
果， 所有 的缺失标 本都 至 少检测 ３次 ． 对所 缺失 的 并 片 段进行 多 重 Ｐ Ｒ 扩增 以进 一步验 证 Ｃ １ ． 琼 脂糖 电泳 Ｐ Ｒ扩 增产 物 １ ｐ ．置 ｌ ．４ ２ Ｃ ０￣ １ ％琼 脂糖 凝胶 电泳 ３ ｍ ｎ ０ ｉ １ ． 结 果 分析 ．５ ２
Ｅｘ ｅ ｉ ｎａ ｐｒ ｍｅ ｔｌ＆ Ｌ ｂ Ｍｅ ． ｃ ｍｂ ｒ ０ ８ Ｖｏ ６ Ｎｏ ａ ｄ Ｄｅ ｅ ｅ ２ ０ ． ｌ２ 。 ６
结果 显示该基 因可 能与精 子发 生相关 我们 的研 究
中得 到的精子 发生 相关 基 因 Ｓ Ｇ Ｐ Ｙ的缺失率 与 国 内 同行 报 道 的 Ｙ染 色 体微 缺 失 的缺 失率 基本 一致 【 ｌ ｌ １ 与 已有文献报 道 Ｙ染 色体微 缺失 主要见 于 Ａ Ｆ Ｚ ｃ相 符【 。
疗 的患 者 ， 按照 ＷＨＯ的诊 断 标准 。 诊 为无 精 症 和 确
少精 症 ． 中无 明确 病 因 的无 精症 患者 ４ 其 ５例 ． 精 少
症 患 者 ７例 ，常 规 染 色 体 核 型 分 析 均 为 正 常 ｆ６ ４，
ＸＹ１ 。
的 ｌ ．９ ４２ ％ ４例 Ｙ染 色体 微缺 失 的无精 子症 患者 睾 丸细 胞 学检 查 均未 发 现 精 子 对 照 组 中 １ 健 康 ２例
受 抑而表 现严 重少 精 子 ．当 Ａ Ｆ Ｚ ａ区多 个大 片 断缺 失 时． 呈现 同样 严重 的表 型 病理 表现 为 Ｓ ｒ ｌ细胞 ｅｔ ｉ ｏ
综合 征（ｃ ｓ 型ｆ 精原细 胞 出现 。 Ｚ ｂ的缺失 ｓｏ １ Ｉ 无 ＡＦ
表 现为减 数分裂前 的生精上 皮细胞 正常 而减数 分裂
实 验 与检 验 医学
２０ ０ ８年 １ ２月 第 ２ ６卷
第 ６期
・
实验研究・
无精 症或严重 少精症 患者 Ｙ染 色体微缺 失 的检测
黄 学明 王共先 胡红林 冯 亮 李冬水 汪 泱 中图分类号 Ｒ ９ ． Ｑ ５ ．３ ．３ ３２ ６ ８ ９ ４４ ＊ Ｑ ４ ． ． ４ ２ ＊ 文献标识码 Ａ 文章编号 １ ７— ９２ ０）６ ０ ３ — ３ ６ ４ １２ （０ ８０ — ６ ７ ０ １
首 次证 实 部 分 特 发 性 的 睾 丸 生 精 障 碍 与 男 性 Ｙ 染
色 体微 缺 失 相 关 ． 后 对 Ｙ 染色 体 微缺 失 的研 究 此 日益 深 入 和广 泛 近 年 来研 究 表 明 ． 性 原 发 无 精 男
和少精 症患 者 中大 约有 ７５ １ ％存 在 Ｙ染 色 体 上 ．％～ ５
题。
参 考 文 献
【】 ｈｓ ， ｄ ｒｔ ｒＤ Ｙ ｃｒｍｏｏ ｉｒｄ ｌ ｉ ｓａｄ １ Ｂ ａｉ Ｓ ＭａＫ， ｅＫｅｓ Ｍ． － ｈｏ ｓｍｅｍ ｅｏｅｅ ｏ ｎ ｎ ｅ ｔｎ ｍａ ｆｒｌｙ ］Ａ ｎＭｅ ． ９ ７ ２ （） ６ ￣ ６ ． ｌ ｉ ｅｔｉ ［． ｎ ｄ １９ ， ９４： １２ ３ ｅ ｎ ｉｔＪ ２