LC-MS操作步骤

液质联用使用流程

一、开机步骤

1.质谱开机步骤

1）检查氮气和氩气，并打开主阀。

2）检查机械泵泵油的水平线是否在窗口的1/2～2/3 之间。

3）打开UPS电源，打开计算机和离子阱质谱仪下方的主机电源。4）启动trapcontrol 软件，待真空度达到2*10-5mbar 以下，按《离子阱质谱仪使用流程》正常操作。（如果长时间关机或更换He 钢瓶，在离子阱控制画面，选择菜单：Options > Vacuum System…，选择Flush Helium Line 两次）

二、液相开机步骤

1）检查流动相并补加好，确保柱子装的是3.5µm 2.1 x 50mm的。

2）打开计算机，依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源，等待仪器自检过后方可操作。

3）打开变色龙的软件，对泵进行洗泵和排气。

4）设定各部参数，让仪器平衡一段时间待基线平稳

三、液质联用使用步骤

1. 质谱方法的建立

1）单击桌面图标或者通过程序目录启动trapcontrol 软件；Start - Programs - Bruker Daltonics - esquireControl 软件可能要求输入操作人员的姓名。

2）选择软件中质谱仪处于操作状态

3）参数调节，初学者建议采用Tune -> Smart 模式，调节下图蓝色标识部分。

A 雾化气、干燥气流量和温度，建议以下列值为基准调节：Nebulizer

5 psi - 15 psi ，Dry Gas 5 l/min ，Dry Temp 300 °C 。

B 设置正负离子模式，或者正负离子交替模式。

C 选择合适的质量范围，如对于小分子化合物，设置Scan 100

to 1500 m/z。

D 设置目标质荷比：在Smart 模式下，只需要将Target Mass 设置

在目标化合物附近即可。也可以选中某一个信号，右击，选择Run SPS，优化这个信号相关参数。

4）保存新建方法

通过菜单Method->Save Method as 方法可保存并命名，如：NEWMETHOD.MS。

2. 操作步骤

1）点击Hystar图标启动液相或液质联用控制软件。点击Har dware Setup，

选择相应的液相或液质硬件配置。打开相应配置后，直接点击Cl ose关闭，如果跳出激活配置的对话框，选择Yes。

注意：修改硬件配置请在工程师指导下进行，不要擅自修改！

2）建议直接打开以前的样品列表Sam ple Table，选择File > Save as另存。

删除列表的多余行，只留一行修改即可。

3)在General 选项卡中输入样品名，样品位置，进样量，保存路径。

4)在Methods 选项卡中编辑液相方法，设置进样方法调用质谱方法。

①LC方法部分，可以通过Open打开适合的方法，也可以通过Edit编辑液相方法。编辑液相方法的界面如下：

General 用于输入操作人员和方法描述LC Param eters 用于设置液相时间和初

始条件：Total Ru ntime为总时间，Data Acquisition Runtime 为采集时间。

LC Pump 选项用于设置流速和初始流动相比例；Autosam pler ‐>Para meters 设置进样和洗针参数；Column/Oven设置柱温；UV/DAD Detector 设置采样频率和AutoZero。LC Timet able 用于设置梯度。Signals 1‐8用于紫外检测波长和离子流的编辑。

②AutoSample r用于设置自动进样的方法，建议选择Standar d或

Standa rdWash ，后者包括洗针。

③MS方法：质谱部分需要调用在tra pcontrol中编辑好的方法。

④Method‐>Save as，保存建好的质谱方法，然后在Hys tar的MS方法部分打开。5）在Sample T able中编辑多行样品，并设置参数及方法，保存样品列表。编辑完样品表后，选中第一个样品，点击Acqu isition键，即可进入控制界面。

6）控制界面下，右键点击各个模块可以进行临时的参数调整，例如更

改流动相比例以便冲柱子等，但是不属于任何方法。点击Start进样，可以选择按列表进一批样品Start sequence，还是进一针样品Start o ne acqu isition。

三、数据处理

1.选择合适的离子流图，比如你要定量已知化合物，可以用EIC提取该离子。对于多个化合物分析，可以用BPC

2.如果需要，可以平滑色谱图：Process ‐>Smooth Chromatogram;

扣除一定高度的基线：Process ‐>Substract Chromatogram Baseline。

3.扣背景：

先定义一段背景。在色谱图空白位置拖动鼠标选择一段背景区域，右击Define Background Mass Spectra。在提取离子流时，Background ‐> Constant，这样提取的色谱图已经扣除背景。

4.标峰并积分：Find ‐>Compounds，视情况对于多级谱选择MS(n)或AutoMS(n) Find, Integrate only 只积分Find, Compounds‐Chromatogram 积分并生成质谱图Find, Compounds‐MS(n) 积分并生成MS(n) 数据的质谱图Find, Compounds‐AutoMS(n) 积分并生成AutoMS(n) 数据的质谱图Find, Compounds Manually‐Chromatogram 手动积分，如果参数不合适，请通过Parameters修改。