LC-MS操作步骤

液质联用使用流程
一、开机步骤
1.质谱开机步骤
1）检查氮气和氩气，并打开主阀。

2）检查机械泵泵油的水平线是否在窗口的1/2～2/3 之间。

3）打开UPS电源，打开计算机和离子阱质谱仪下方的主机电源。

4）启动trapcontrol 软件，待真空度达到2*10-5mbar 以下，按《离子阱质谱仪使用流程》正常操作。

（如果长时间关机或更换He 钢瓶，在离子阱控制画面，选择菜单：Options > Vacuum System…，选择Flush Helium Line 两次）
二、液相开机步骤
1）检查流动相并补加好，确保柱子装的是3.5µm 2.1 x 50mm的。

2）打开计算机，依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源，等待仪器自检过后方可操作。

3）打开变色龙的软件，对泵进行洗泵和排气。

4）设定各部参数，让仪器平衡一段时间待基线平稳
三、液质联用使用步骤
1. 质谱方法的建立
1）单击桌面图标或者通过程序目录启动trapcontrol 软件；Start - Programs - Bruker Daltonics - esquireControl 软件可能要求输入操作人员的姓名。

2）选择软件中质谱仪处于操作状态<Operate>
3）参数调节，初学者建议采用Tune -> Smart 模式，调节下图蓝色标识部分。

A 雾化气、干燥气流量和温度，建议以下列值为基准调节：Nebulizer
5 psi - 15 psi ，Dry Gas 5 l/min ，Dry Temp 300 °C 。

B 设置正负离子模式，或者正负离子交替模式。

C 选择合适的质量范围，如对于小分子化合物，设置Scan 100
to 1500 m/z。

D 设置目标质荷比：在Smart 模式下，只需要将Target Mass 设置
在目标化合物附近即可。

也可以选中某一个信号，右击，选择Run SPS，优化这个信号相关参数。

4）保存新建方法
通过菜单Method->Save Method as 方法可保存并命名，如：NEWMETHOD.MS。

2. 操作步骤
1）点击Hystar图标启动液相或液质联用控制软件。

点击Har dware Setup，
选择相应的液相或液质硬件配置。

打开相应配置后，直接点击Cl ose关闭，如果跳出激活配置的对话框，选择Yes。

注意：修改硬件配置请在工程师指导下进行，不要擅自修改！
2）建议直接打开以前的样品列表Sam ple Table，选择File > Save as另存。

删除列表的多余行，只留一行修改即可。

3)在General 选项卡中输入样品名，样品位置，进样量，保存路径。

4)在Methods 选项卡中编辑液相方法，设置进样方法调用质谱方法。

①LC方法部分，可以通过Open打开适合的方法，也可以通过Edit编辑液相方法。

编辑液相方法的界面如下：
General 用于输入操作人员和方法描述LC Param eters 用于设置液相时间和初
始条件：Total Ru ntime为总时间，Data Acquisition Runtime 为采集时间。

LC Pump 选项用于设置流速和初始流动相比例；Autosam pler ‐>Para meters 设置进样和洗针参数；Column/Oven设置柱温；UV/DAD Detector 设置采样频率和AutoZero。

LC Timet able 用于设置梯度。

Signals 1‐8用于紫外检测波长和离子流的编辑。

②AutoSample r用于设置自动进样的方法，建议选择Standar d或
Standa rdWash ，后者包括洗针。

③MS方法：质谱部分需要调用在tra pcontrol中编辑好的方法。

④Method‐>Save as，保存建好的质谱方法，然后在Hys tar的MS方法部分打开。

5）在Sample T able中编辑多行样品，并设置参数及方法，保存样品列表。

编辑完样品表后，选中第一个样品，点击Acqu isition键，即可进入控制界面。

6）控制界面下，右键点击各个模块可以进行临时的参数调整，例如更
改流动相比例以便冲柱子等，但是不属于任何方法。

点击Start进样，可以选择按列表进一批样品Start sequence，还是进一针样品Start o ne acqu isition。

三、数据处理
1.选择合适的离子流图，比如你要定量已知化合物，可以用EIC提取该离子。

对于多个化合物分析，可以用BPC
2.如果需要，可以平滑色谱图：Process ‐>Smooth Chromatogram;
扣除一定高度的基线：Process ‐>Substract Chromatogram Baseline。

3.扣背景：
先定义一段背景。

在色谱图空白位置拖动鼠标选择一段背景区域，右击Define Background Mass Spectra。

在提取离子流时，Background ‐> Constant，这样提取的色谱图已经扣除背景。

4.标峰并积分：Find ‐>Compounds，视情况对于多级谱选择MS(n)或AutoMS(n) Find, Integrate only 只积分Find, Compounds‐Chromatogram 积分并生成质谱图Find, Compounds‐MS(n) 积分并生成MS(n) 数据的质谱图Find, Compounds‐AutoMS(n) 积分并生成AutoMS(n) 数据的质谱图Find, Compounds Manually‐Chromatogram 手动积分，如果参数不合适，请通过Parameters修改。

所有化合物信息显示在Compound list窗口中（红框内）可以在窗口上右击Layout选看想要的信息，如保留时间，峰面积，最高质谱峰m/z 等。

点击Compound list（红框内）或左侧Analysis list ‐>Compound Spectra （篮框内）中的任意化合物，就能在Compound Spectra（紫框内）中看到这个化合物的质谱图。

如果某些峰不想要，可以在Compound list中右击Delete，如果想手动标峰，可以用Find ‐>Compounds Manually，然后在色谱图上从峰左下角点击拖动到右下角，完成标峰和积分。

5.扣除质谱背景：
1）将您想要进行处理的质谱图显示在Compound mass spectra 窗口中。

2）在色谱图上选中一个或者一段背景，生成质谱图，显示
在Mass Spectrum View窗口中。

3）在Compound mass spectra窗口右击，或者在Analysis List点击条目选择要进行处理的质谱图然后点击Process，选择Subtract View Spectrum as Background。

这时会在原来的质谱图下生成一个扣背景后的质谱图。

6.报告：一般选用Chromatogram Report，Compound Spectrum Report等，可以自行设计模板。

如把Chromatogram Report中的三维图删掉。

四、质谱使用须知
在使用质谱仪前请确认并检查以下条件：
● 仪器已经正确安装并且经过厂商工程师的检测；
● 质谱仪属于精密贵重仪器，未经专门培训人员不得擅自开启使用，更不得随意“调校”氮气和氦气压力或更改仪器参数等；
● 检查液氮罐和氦气钢瓶是否有一定压力，以便为测试样品提供符合流速和压力要求的氮气（喷雾气体和干燥气体）和氦气（碰撞气体）；
● 常规ESI 源已安装完毕
● 样品溶液必须澄清透明，不含有固体微粒，不得将粗提物直接用于测定，以免堵塞喷雾针或者污染毛细管。

测试用的液相溶剂体系不得含有不挥发性的酸、碱、盐。

● 流动相中不可以加三氟乙酸，以免损坏离子阱，流动相尽量选用甲醇和水或乙腈和水，样品溶剂也是一样。