实验室诊断(一)皮肤病检查

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真菌
• 真菌主要包括酵母菌、霉菌、癣菌三大类 • 临床上引起犬、猫皮肤真菌病的主要为癣菌,分 别有犬小孢子菌、石膏样小孢子菌和须毛癣菌 • 犬小孢子菌和须毛癣菌属亲动物型,主要侵害动 物;石膏样小孢子菌是亲土壤型,多数腐生于土 壤中,也可感染人和动物 • 皮肤癣菌对外界的抵抗力很强。犬小孢子菌能在 干燥环境中长达13个月保持活性,有些甚至可存 活几年
实验室诊断(一)
皮肤病
北京观赏动物医院
化验室
郑晓玉
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个人简介
• 2002年毕业于北京农业职业学院,之后 参加中国农业大学继续教育,并完成本科 学业;自2002年毕业后,一直从事小动 物临床护士工作,至2005年很荣幸的加 入北京观赏动物医院,并成为化验室的一 员,2008年至今得到领导的信任,兼北 京观赏动物医院化验室主任一职至今。
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疥 螨 (刮片要点)
• 能挖掘隧道,刮片时应多摩擦,反复刮; • 临床上病变常以耳部刮取较容易检测; • 临床上以剧烈瘙痒为典型症状;
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姬螯螨
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姬螯螨
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姬螯螨
• 无严格的宿主特异性,以幼犬多发 • 以组织液为食,不打洞,有大量皮屑 • 姬螯螨虫体很大,有4对腿,末端呈梳子 状,最具特征的是钩子样的附属口器或触 须,称为螯针,这是与其他螨虫鉴别的重 要标志。 • 寄生于宿主的表皮角质层,在皮屑形成的 假隧道内快速移动,会定期用螯针刺入表 皮,从而将自己牢牢固定在皮肤上
采样基本工具
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刮片法流程
• 刮片法:适用于检查疥螨 、皮肤癣菌 等 • 采样的处局部剪毛(剪毛部要大于要刮 取的病变部) • 用手术刀轻轻刮取新患部与健康皮肤交 界处 (1)其中一把手术刀刮取皮肤表层皮屑 置于事先准备好的10%KOH中(起到 透明化作用)备用,主要查看真菌 (2)表层刮取后,用手挤压其患部,并 用另一把手术刀将挤压处毛囊内的皮肤 表层下刮取物置于事先准备好的50%甘 油中(起到固定和透明化作用)备用, 主要查看螨虫 • 在另一患处做同样的取样,分别将刮取 物置于载玻片上相应的溶液中 • 取盖玻片分别将刮取物轻轻按压,尽量 使刮取物与溶液混匀 • 采样结束后,在采样部位涂擦碘酒消毒
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穿刺的方法
2、细针活检:适用于细胞较脆弱的组织,
如淋巴结,或是采集样本部位的血管比较 丰富,或是用细针抽吸方法会采到血液或 是其他类型液体使之不易判读时 方法: A拉开注射器活塞 B使针头部分在被检样本内以不同角度刺入 C拔出注射器
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制片的技术与要领
1、推片技术(适用于淋巴活检组织这样比较
迪夫染色液
(主要用于血液、骨髓、脱落细 胞的涂片等)
染色步骤:
迪夫A液浸泡30秒---磷 酸盐缓冲液冲洗A液--甩干---迪夫B液浸泡 30秒---水洗---甩干--镜检
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常用染色液用途及步骤
革兰氏染色液
(主要用于区分G+菌和G-菌)
染色步骤:
龙胆紫---10秒---水洗 ---甩 干---碘溶液---10秒---水洗 ---甩干---脱色液---10秒--水洗 ---甩干---沙黄溶液--10秒---水洗 ---甩干---镜检
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雌雄疥螨
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疥螨
• 卵经3-8d孵化成幼虫,移至皮肤表面蜕皮发育为 1期幼虫、2期幼虫和成虫。整个生活史需10-14d; • 虫体终生寄生于皮肤内 • 虫体呈卵圆形,体表覆以平行的细毛,有三对足 • 直接接触传染,具有高度传染性,可引起患畜剧 烈的瘙痒,导致自我擦伤 • 寄生于外耳、面部、肘部,严重时波及全身; • 局部表现脱毛、丘疹、红斑、皮肤增厚和结痂
↓恶性 • 预后良好
→ • 恶性 • 预后不良
1.圆形细胞瘤 2.细胞质或细胞外可见大量嗜碱性 染色的颗粒 3.“煎蛋样”外观 4.预后较复杂
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淋巴瘤
1.发生于皮肤的病灶早期出现皮屑和瘙痒,后形成结痂 2.*细胞核呈现明显嗜碱性染色; *部分细胞核中可见明显巨大核仁或多个核仁; *染色质质地粗糙,染色性低于正常淋巴细胞;
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传染性性病肿瘤
• 淡蓝色或烟灰色胞浆 • 细胞核多偏于细胞一 侧 • 细胞质内可见数量不 等的透明空泡
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伍德氏灯检查法
• 伍氏灯:适用于查看 部分小孢子属的癣菌 感染 • 用手提式伍德氏灯在 暗室内开启灯光,预 热5-10分钟,光源与 皮肤距离约5-10cm左 右,光线对准被检处, 观察有无荧光出现
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染色法流程
• 细菌、马拉色氏菌:通常临床使用革兰 氏染色法。
操作步骤:
1、抹片后自然晾干或采用火焰固定(待玻片完全恢 复常温) 2、按照革兰氏染色步骤进行染色 3、晾干或用滤纸沾去玻片表面的水份备用
• 细胞:通常临床使用瑞-姬氏染色法或迪 夫染色法。(操作步骤同上)
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常用染色液用途及步骤
瑞氏-姬姆萨染色液
(主要用于血液、骨髓、脱落细胞 的涂片等)
染色步骤:
瑞氏-姬姆萨A液1-2滴; 瑞氏-姬姆萨B液2-4滴; 将AB液混匀,静止3-5分钟 左右---水洗---甩干---镜检
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常用染色液用途及步骤
脆弱的样本或含有较多液性成分的样本)
2、拉片技术(同上) 3、海星技术(适用于细胞脆弱,而且是液性
的样本)
4、压片技术(适用于不易采到样本的固体)
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恶性细胞核标准
1、巨型细胞核 2、细胞核大小不等 3、核仁不规则(大小、形态、数量) 4、非典型,不对称的有丝分裂相 5、染色质粗糙
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肥大细胞瘤
耳痒螨
• 虫体呈卵圆形,足较疥螨长,有4对足,从卵 到成虫需要2—3周
细胞学
(部分借鉴于陈宇驰老师课件)
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穿刺的技术与要领
1、尽量避免反复穿刺 2、以左手触摸穿刺物,右手持注射 器一次进针(进针深浅根据穿刺物大小), 拔出再进针(只限在穿刺物内,不可将针 头拔出皮肤外),反复3-4次操作即可
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穿刺的准备
1、选择适当的注射器(一般建议
20G-40G的针头和5-20ml的针管)
2、清理病灶表面,必须严格无菌操作, 以防感染 3、穿刺的部位(怀疑是肿瘤时,穿刺的部
位应是手术时会切除的部位)
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穿刺的方法
1、细针抽吸:
A注射器刺入被检样本 B拉动活塞并使针头部分在被检样本内以不 同角度刺入 C松开活塞 D拔出注射器
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拔毛法流程
• 拔毛法:适用于查看 外寄生虫、蠕形螨、 皮肤癣菌,毛发形态 等 • 在病变处用止血钳拔 出少量毛发(连同毛 根拔出),置于KOH 中/甘油中备用
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挤压法流程
• 挤压法:适用于查看 蠕形螨 • 在病变部位,以拇指 和食指捏起皮肤,用 力挤,使毛囊扩张, 用刀片刮取经挤压毛 囊液置于甘油中备用
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癣菌
• 浅部癣菌主要为皮肤丝状菌,侵犯皮肤、 毛发、指甲等角化组织引起癣症,又称 癣菌 • 癣症病灶可见有隔菌丝和关节孢子;菌 丝深入角化组织内生成营养菌丝体,纵 横交织成网状;孢子可排列成链状或零 散分布,在病发上可见孢子在毛干外排 成厚鞘
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伍德氏灯下
癣 菌
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癣菌引起的朽木样毛发
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显微镜的正确使用
5、用粗调焦手轮,调节 焦距,使载物台上升 6、不能上升时再调节载 物台下降,到视野中 出现清晰的物象止 ; 7、瞳距调节:左右推拉 目镜,调节屈光度
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显微镜使用的注意事项
• 使用高倍镜、油镜时,应按从低倍镜逐步至 高倍镜,用细调节器螺旋调节。 • 使用完毕转动粗调手轮将工作台下降到底; • 每次油镜用后,必须用擦镜纸擦去镜头上的 油镜油; • 使用后4-10倍镜间把镜头八字形放置,镜体 复原。
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• • • • • • • •
设有专家室、诊疗室 免疫室 中西医结合室 影像室、B超室 药房、注射室、输液室 内窥镜室、无菌手术室 处置室、住院区 化验室
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显微镜的正确使用
1、开电源开关 2、调光(光圈、聚光器) 3、低倍镜头对准通光孔
4、将要观察的部位调到
通光孔正中
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• 耳道感染常见的真菌:主要是马拉色氏菌 常见细菌:球菌
耳道常见寄生虫
• 耳痒螨:寄生于外耳道,它们采食表皮碎 屑并对患病动物造成严重的刺激,感染通 常是双侧的,表现为甩头和搔抓耳部。严 重的感染可以引起中耳炎,继续发展可能 形成耳血肿。临床多见于猫的耳痒螨感染 ,感染耳痒螨的猫耳道内常有大量棕黑色 的分泌物,分泌物多干结成块。耳痒螨可 以通过直接接触在犬猫群中高度传播。
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皮肤片在显微镜下的适用倍数
• • • • • 癣菌: 40 X10、100X10镜 螨虫: 10X 10、20X 10镜 细菌: 40X 10、100X10镜 马拉色氏菌: 40X 10、100X10镜 细胞学: 40X 10、100X10镜
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病变分布
• • • • • 局部 多处 全身 对称性分布 非对称性分布
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孢子(10*10和10*20)
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孢子100*10
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孢子
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↓20*10
↓40*10
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孢子
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瑞-姬氏染色
菌 丝
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真菌培养
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细菌
• 临床以G+球菌、链球菌多见 • 大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌
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酵母菌 厚皮马拉色氏菌
• 红斑、黄色皮 屑和结痂,油 腻和恶臭皮肤 • 多见于面部、 趾部、颈腹侧、 腹部、指间、 皮肤皱褶处 • 瘙痒
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皮Байду номын сангаас病变特征
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皮肤病变特征
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皮肤病变特征
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皮肤病变特征
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皮肤病采样前准备
• 了解患病动物的病史: 包括性别、年龄、是否绝育、皮肤瘙痒程度、 持续时 间、病变部位、临床症状、有无季节性、食物种类、 生活环境、用药史、 用药时间等。 • 观察皮肤的整体印象,包括:皮肤及被毛干燥、油腻、 易掉毛、气味等 • 观察有无跳蚤、跳蚤排泄物、虱子、蜱等 • 与主人沟通,了解有无新生的患处,瘙痒最严重部位 等,最好刮取新生病变与健康皮肤交界处,取2-3处病 变局部剪毛,(75%酒精稍作擦拭),采样。
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蠕形螨 疥螨 姬螯螨 癣菌 细菌 马拉色氏菌 过敏性皮炎 细胞学
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蠕形螨
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蠕形螨
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蠕形螨
• • • • • • 整个生活史共需24d; 虫体寄生于皮肤毛囊和皮脂腺内; 有4对足,口器小,体表无毛,吻突小而钝, 正常犬猫体表均会有少量蠕形蟎存在; 病变以动物眼、唇、耳、前肢内侧的无毛处; 病变周围有界限分明的红斑,痒感不强烈。但 严重时,身体大面积脱毛、浮肿、皮脂溢和脓 性皮炎; • 本病是一种可以使动物致死的外寄生虫病;
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显微镜使用的注意事项
• 忌频繁开关显微镜电源,临时不用时只需 将光源亮度调至最弱。 • 重找或换片时的顺序: 1、在加油区外应按:低倍→高倍→油镜 2、在加油区内重找应按:低倍→油镜
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显微镜的维护
对于显微镜的维护保养,主要做到防尘、 防潮、防热、防腐蚀。用后及时清洗擦拭 干净,并定期在有关部位加注中性润滑油 脂。对于一些结构复杂,装配精密的零部 件,如果没有一定的专业知识,一定的技 能和专用工具,就不能擅自拆装,以免损 坏零部件。(不能放在离心机附近!)
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采样工具的准备
• 剪毛剪1把、手术刀2把(钝刀片)、止血钳 一把、载玻片、盖玻片、碘酒棉球、酒精棉 球 • 在载玻片上分两点各滴上一滴50%甘油(主 要查看螨虫类)和10%KOH(主要查看真菌 类)备用 • 干净的载玻片备用(主要查看细胞、细菌类) • 根据采样方法还可选择胶带、伍德氏灯等
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蠕形螨临床症状
皮损可出现头面部、趾(指)部。临床症 状各异,起初常为局灶性皮损,随后扩大, 出现斑片状、局灶性、多灶性或弥漫性脱 毛,伴有各种红斑、皮屑、丘疹、瘙痒等, 感染皮肤可能出现苔藓化、色素过度沉着、 脓包、糜烂、浅表性溃疡或深部脓皮病。
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蠕形螨(刮片的要点)
• 临床上多以头面部、四肢关节处刮片较 容易检测; • 刮片时应挤压或拔毛;
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过敏性皮炎
• 多见于过敏性引起的皮肤病; • 皮肤刮片染色可见嗜酸性粒细胞;
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耳道检查
采样工具的准备 • 两根棉签、两张载玻片
采 样
用棉签取患病耳道深处的分泌物,在玻片 上涂抹均匀。
检查方法
• 将一张样本片火焰固定、染片后观察细菌 和真菌。
• 另一张直接看活片,检查是否有螨虫。
耳道常见菌
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胶带法流程
• 胶带法:适用于查看 外寄生虫、癣菌、细 菌、细胞学 • 选择合适的透明胶带, 在患病处皮肤上粘取 一些皮屑和组织碎片, 粘置于载玻片上备用
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抹片法流程
• 抹片法:适用于查看细 菌,癣菌,细胞学等 • 在用刀片浅层刮取后, 直接用载玻片于皮肤上 按压,尽量较均匀涂满 玻片,火焰固定或自然 晾干备用
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