病原课件第八章 重点
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第八章 重点
1.细菌的分离培养和鉴定程序。 2.直接镜检有诊断意义的细菌有那些? 3. 病毒的分离培养的方法。 4.病毒在细胞培养中增殖的指标。 5.人工自动免疫和人工被动免疫应用 的生物制剂有哪些？ 6.二倍体细胞株、传代细胞系、PFU 。 亚单位疫苗、核酸疫苗。
二、标本的采集与送检
无菌操作
1）细胞形态学改变: (1) 致细胞病变效应（CPE） 无包膜病毒
（三）血清学诊断
血清学诊断:用已知抗原检测病人血清中相应抗体。 双份血清效价呈4倍增长有诊断价值。 检测特异性IgM抗体，有助于早期诊断
常用血清学诊断
试验名称 凝集试验
沉淀试验
胶乳凝集试验 直接免疫荧光技术 SPA协同凝集试验 中和试验
疾病（举例） 伤寒、副伤寒（肥达反应）；斑疹伤寒、恙虫 病（外斐试验）；布鲁菌病、土拉热、钩体病； 支原体肺炎（冷凝集试验）
G-弧菌，暗视野内穿梭样运动 G+竹节状排列，有荚膜的大杆菌，串珠试验阳性
G-两端浓染的球杆菌，可呈多形态性 G+棒状，奈瑟氏染色可见带异染颗粒的棒状杆菌
位于中性粒细胞内外， G-肾形双球菌 位于中性粒细胞内外， G-咖啡不豆状双球菌 G+带荚膜呈矛头状的双球菌 抗酸染色呈红色的分枝状杆菌，背景蓝色 抗酸染色呈红色的束状分枝杆菌，背景蓝色 镀银染色，棕黄色密螺旋体，两端尖直 暗视野中间僵硬，两端带钩呈C或S型 G+ 葡萄状排列的球菌 G+ 链状排列的球菌
（五）细菌的L型检查
血液、骨髓等标本 → 高渗和等渗增菌培养 脓液、尿液、分泌物→ L型培养，可见油煎 蛋样菌落，多形性、G+菌和G-菌混杂现象。 →通过返祖回复后进行细菌属、种、型的鉴 定.
（六）药敏试验
四、细菌学快速鉴定
１．微生物数字编码分类鉴定法
将生化反应项目排序并分组，确定每组试验的检 索编码。可将细菌鉴定到属、种或生物型. 具有简 易微量化、商品标准化等优点。
构；分类细菌。
常用的复染色法有 革兰氏染色法
染色方法 结果判定
抗酸染色法
原理 医学意义
？
形态学检查有意义的细菌 P148表
病原名称
霍乱弧菌 炭疽芽孢杆菌
鼠疫耶尔森氏菌 白喉棒状杆菌
淋病奈瑟菌 流行性脑膜炎球菌 肺炎链球菌 结核分枝杆菌 麻风分枝杆菌 梅毒螺旋体 钩端螺旋体 葡萄球菌 链球菌
染色形态特征
2)二倍体细胞系 在体外分裂50代 后仍保持二倍染色 体数目的细胞，如 人胚肺细胞
应用：可用于病毒 培养,制备疫苗.
3)传代细胞系 来源于肿瘤细胞，能无限分 裂传代的细胞，如Hela细胞 （人宫颈癌细胞）。病毒敏 感性稳定，易于传代，被广 泛应用于培养病毒，但不能 用于生产疫苗。
2.细胞内病毒增殖指标
梅毒（VDRL、RPR）;Ascoli 实验 ;Elek平板 毒力实验
脑膜炎，细菌性痢疾 脑膜炎 细菌性痢疾
风湿热、链球菌咽部感染
（四）动物实验
主要用于:
病原菌分离鉴定; 测定细菌毒力; 制备免疫血清; 建立致病菌动物模型; 生物制品或药品的安全、毒性、疗 效试验. 常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家 兔、绵羊等。 注射途径：
ห้องสมุดไป่ตู้
（二）分离培养与鉴定
取材(无菌 适宜部位 适时采集的标本) 增菌液（血液、脑脊液）
接种于适宜培养基(选择培养基-SS）；鉴别培养基 糖-发酵管、EMB；或营养培养基-血平板) 培养(需氧或厌氧或5%CO2培养) 菌落特点;形态特征 生化反应试验 血清学鉴定 p149-① 必要时进行毒力测定和 抗生素敏感试验
全自动化微生物分析仪，可在24小时内准确鉴定出 常见的致病菌。
2、快速检测细菌特异抗原 免疫标记技术；凝集试验；免疫电泳技术等
3、核酸检测: 核酸探针杂交技术
多聚酶联反应（PCR）技术 细菌的16S rRNA的基因十分保守，故有鉴定 “金 指标”之称。能快速鉴定细菌的种和属
4、气-液相色谱法 利用气-液相色谱法 =测试细菌终末代谢产物(脂肪 酸和醇类)，并与已知对照菌的色谱比较，约1.5～2 小时内鉴定完毕。嗜肺军团菌、结核分枝杆菌.
也可检测病毒核酸
检测病毒颗粒、病毒 抗原、病毒核酸
用于检测潜伏期较短 的病毒感染。
一、病毒标本的采集与送检
基本原则同细菌，强调以下原则。 1.分离病毒或检测病毒抗原 早期取材、无菌操作、加“双抗”（PC/SM）杀菌、
保冷速送。 3.病毒感染血清学诊断
早期血清特异性IgM抗体增高有诊断意义，通常取 急性期和恢复期双份血清，S2〉S1 4倍以上有诊 断意义。
二、病毒的分离培养与鉴定
病毒专性细胞内寄生，活细胞是病毒生存和复制的基本条件
感染诊断“金标准” 分离培养和鉴定病
常用方法： 鸡胚接种法 组织细胞培养法 易感动物的接种法
（一）鸡胚接种
1.羊膜腔和尿 囊腔-有血凝素 的流感病毒、 腮腺炎病毒；
2.绒毛尿囊膜-痘病毒和疱疹病毒等； 3.卵黄囊－嗜神经病毒如 狂犬病毒、 流行性乙型脑炎病毒等。 鸡胚材料廉价，不易发生污染，易 于消毒管理。
（二）动物接种
• 常用动物有: 小鼠和豚鼠等
乙型脑炎病毒、 狂犬病毒和柯萨奇病毒等 分离鉴定常用动物接种。
（三）组织细胞培养
将离体的活组织块或 分散的活细胞培养， 统称组织细胞培养. 细胞培养仍是目前实验室最常用的方法。
1常用细胞株分为三种类型：
1)原代和次代细胞系 来源于 动物、鸡胚、人胚组织的分 散单个细胞。只能传2～3代, 即退化衰亡.
适宜部位取材
提高检测率
三、病原菌检验程序和项目
感染性疾病诊断 分离鉴定出病原菌是金标准
分离鉴定程序 分离培养→菌落观察及形态学检查（与标准菌株比较）
血清学 鉴定;
分子生 物学 鉴
定
抗生素敏感试验；毒素检测。
（一）细菌形态学检查
不染色法-观察细菌形态，运动。
染色法- 单染色法-观察细菌形态
复染色法-观察形态，结
第二节 病毒学诊断
病毒性疾病发病急,传播速度快, 临床症状复杂,早期快 速诊断很重要.
病毒学诊断基本原则是特异、敏感、快速、简便。 根据流行病学和临床表现初步判定，再根据可疑病 毒生物学特性、致病机理、患者所处病程确定病毒学 诊断方法。
病毒学诊断方法
病毒的分离、鉴定 原因不明 的病毒感染
检测特异性IgM或IgG抗体 对潜伏期较长或易产生 持续感染的病毒感染，
1.细菌的分离培养和鉴定程序。 2.直接镜检有诊断意义的细菌有那些? 3. 病毒的分离培养的方法。 4.病毒在细胞培养中增殖的指标。 5.人工自动免疫和人工被动免疫应用 的生物制剂有哪些？ 6.二倍体细胞株、传代细胞系、PFU 。 亚单位疫苗、核酸疫苗。
二、标本的采集与送检
无菌操作
1）细胞形态学改变: (1) 致细胞病变效应（CPE） 无包膜病毒
（三）血清学诊断
血清学诊断:用已知抗原检测病人血清中相应抗体。 双份血清效价呈4倍增长有诊断价值。 检测特异性IgM抗体，有助于早期诊断
常用血清学诊断
试验名称 凝集试验
沉淀试验
胶乳凝集试验 直接免疫荧光技术 SPA协同凝集试验 中和试验
疾病（举例） 伤寒、副伤寒（肥达反应）；斑疹伤寒、恙虫 病（外斐试验）；布鲁菌病、土拉热、钩体病； 支原体肺炎（冷凝集试验）
G-弧菌，暗视野内穿梭样运动 G+竹节状排列，有荚膜的大杆菌，串珠试验阳性
G-两端浓染的球杆菌，可呈多形态性 G+棒状，奈瑟氏染色可见带异染颗粒的棒状杆菌
位于中性粒细胞内外， G-肾形双球菌 位于中性粒细胞内外， G-咖啡不豆状双球菌 G+带荚膜呈矛头状的双球菌 抗酸染色呈红色的分枝状杆菌，背景蓝色 抗酸染色呈红色的束状分枝杆菌，背景蓝色 镀银染色，棕黄色密螺旋体，两端尖直 暗视野中间僵硬，两端带钩呈C或S型 G+ 葡萄状排列的球菌 G+ 链状排列的球菌
（五）细菌的L型检查
血液、骨髓等标本 → 高渗和等渗增菌培养 脓液、尿液、分泌物→ L型培养，可见油煎 蛋样菌落，多形性、G+菌和G-菌混杂现象。 →通过返祖回复后进行细菌属、种、型的鉴 定.
（六）药敏试验
四、细菌学快速鉴定
１．微生物数字编码分类鉴定法
将生化反应项目排序并分组，确定每组试验的检 索编码。可将细菌鉴定到属、种或生物型. 具有简 易微量化、商品标准化等优点。
构；分类细菌。
常用的复染色法有 革兰氏染色法
染色方法 结果判定
抗酸染色法
原理 医学意义
？
形态学检查有意义的细菌 P148表
病原名称
霍乱弧菌 炭疽芽孢杆菌
鼠疫耶尔森氏菌 白喉棒状杆菌
淋病奈瑟菌 流行性脑膜炎球菌 肺炎链球菌 结核分枝杆菌 麻风分枝杆菌 梅毒螺旋体 钩端螺旋体 葡萄球菌 链球菌
染色形态特征
2)二倍体细胞系 在体外分裂50代 后仍保持二倍染色 体数目的细胞，如 人胚肺细胞
应用：可用于病毒 培养,制备疫苗.
3)传代细胞系 来源于肿瘤细胞，能无限分 裂传代的细胞，如Hela细胞 （人宫颈癌细胞）。病毒敏 感性稳定，易于传代，被广 泛应用于培养病毒，但不能 用于生产疫苗。
2.细胞内病毒增殖指标
梅毒（VDRL、RPR）;Ascoli 实验 ;Elek平板 毒力实验
脑膜炎，细菌性痢疾 脑膜炎 细菌性痢疾
风湿热、链球菌咽部感染
（四）动物实验
主要用于:
病原菌分离鉴定; 测定细菌毒力; 制备免疫血清; 建立致病菌动物模型; 生物制品或药品的安全、毒性、疗 效试验. 常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家 兔、绵羊等。 注射途径：
ห้องสมุดไป่ตู้
（二）分离培养与鉴定
取材(无菌 适宜部位 适时采集的标本) 增菌液（血液、脑脊液）
接种于适宜培养基(选择培养基-SS）；鉴别培养基 糖-发酵管、EMB；或营养培养基-血平板) 培养(需氧或厌氧或5%CO2培养) 菌落特点;形态特征 生化反应试验 血清学鉴定 p149-① 必要时进行毒力测定和 抗生素敏感试验
全自动化微生物分析仪，可在24小时内准确鉴定出 常见的致病菌。
2、快速检测细菌特异抗原 免疫标记技术；凝集试验；免疫电泳技术等
3、核酸检测: 核酸探针杂交技术
多聚酶联反应（PCR）技术 细菌的16S rRNA的基因十分保守，故有鉴定 “金 指标”之称。能快速鉴定细菌的种和属
4、气-液相色谱法 利用气-液相色谱法 =测试细菌终末代谢产物(脂肪 酸和醇类)，并与已知对照菌的色谱比较，约1.5～2 小时内鉴定完毕。嗜肺军团菌、结核分枝杆菌.
也可检测病毒核酸
检测病毒颗粒、病毒 抗原、病毒核酸
用于检测潜伏期较短 的病毒感染。
一、病毒标本的采集与送检
基本原则同细菌，强调以下原则。 1.分离病毒或检测病毒抗原 早期取材、无菌操作、加“双抗”（PC/SM）杀菌、
保冷速送。 3.病毒感染血清学诊断
早期血清特异性IgM抗体增高有诊断意义，通常取 急性期和恢复期双份血清，S2〉S1 4倍以上有诊 断意义。
二、病毒的分离培养与鉴定
病毒专性细胞内寄生，活细胞是病毒生存和复制的基本条件
感染诊断“金标准” 分离培养和鉴定病
常用方法： 鸡胚接种法 组织细胞培养法 易感动物的接种法
（一）鸡胚接种
1.羊膜腔和尿 囊腔-有血凝素 的流感病毒、 腮腺炎病毒；
2.绒毛尿囊膜-痘病毒和疱疹病毒等； 3.卵黄囊－嗜神经病毒如 狂犬病毒、 流行性乙型脑炎病毒等。 鸡胚材料廉价，不易发生污染，易 于消毒管理。
（二）动物接种
• 常用动物有: 小鼠和豚鼠等
乙型脑炎病毒、 狂犬病毒和柯萨奇病毒等 分离鉴定常用动物接种。
（三）组织细胞培养
将离体的活组织块或 分散的活细胞培养， 统称组织细胞培养. 细胞培养仍是目前实验室最常用的方法。
1常用细胞株分为三种类型：
1)原代和次代细胞系 来源于 动物、鸡胚、人胚组织的分 散单个细胞。只能传2～3代, 即退化衰亡.
适宜部位取材
提高检测率
三、病原菌检验程序和项目
感染性疾病诊断 分离鉴定出病原菌是金标准
分离鉴定程序 分离培养→菌落观察及形态学检查（与标准菌株比较）
血清学 鉴定;
分子生 物学 鉴
定
抗生素敏感试验；毒素检测。
（一）细菌形态学检查
不染色法-观察细菌形态，运动。
染色法- 单染色法-观察细菌形态
复染色法-观察形态，结
第二节 病毒学诊断
病毒性疾病发病急,传播速度快, 临床症状复杂,早期快 速诊断很重要.
病毒学诊断基本原则是特异、敏感、快速、简便。 根据流行病学和临床表现初步判定，再根据可疑病 毒生物学特性、致病机理、患者所处病程确定病毒学 诊断方法。
病毒学诊断方法
病毒的分离、鉴定 原因不明 的病毒感染
检测特异性IgM或IgG抗体 对潜伏期较长或易产生 持续感染的病毒感染，