细胞免疫荧光的染色方法
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不通透的染色方法:
封闭液:3%BSA 用PBS 配制不加吐温-20,
一抗,二抗用封闭液配制.
1.4% PFA（多聚甲醛）室温固定15min。
2.1xPBS 洗三次，每次5min。
3.3%BSA（不加吐温-20）封闭1hr。
4.一抗4度过夜
5.1xPBS 洗三次，每次5min。
6.二抗37度2hr。
7.1xPBS 洗三次，每次5min。
8.DAPI 染色5min。
9.1xPBS 洗三次，每次5min。
蔺红方法染色：蔺红用的方法封闭液里不加土温20 。我们模拟这个方法封闭液里加了土温20。
1.4% PFA（多聚甲醛）固定15min。
2.1xPBS 洗三次，每次5min。
3.0.2% tritonX-100 通透15min。
4.1xPBS 洗三次，每次5min。
5.3%BSA封闭0.5hr。
6.一抗4度过夜。
7.1xPBS 洗三次，每次5min。
8.二抗37度1hr。
9.1xPBS 洗三次，每次5min。
10.DAPI 染色5min。
11.1xPBS 洗三次，每次5min。
12.封片。
通透的染色方法:
封闭液: :3%BSA 用PBS 配制，加千分之一吐温-20
一抗，二抗用封闭液配制。
1、细胞铺板，处理
2、弃上清，甲醇-20℃固定10min
3、预冷的1X PBS 冲洗两遍
4、0.2% NP40(PBS配)室温通透8min
5、1X PBS 洗5min X 3次
6、1%BSA(PBS+1千分之一的土温20配) 室温封闭40min
7、一抗4℃（1%BSA配制）孵育过夜
8、1X PBS 洗5min X 3次
9、二抗（1%BSA配制）室温避光孵育1h
10、1X PBS 洗5min X 3次，拍照