江南大学2011微生物(食品)真题

2011江南大学微生物（食品）（回忆版）

一、名词解释（每题两分）

同型乳酸发酵、荚膜、质粒、拮抗、CFU、PCR、BOD5、选择性培养基、巴斯德效应、溶源转变

二、简答(每题六分)

1、什么是芽孢，它有什么特性，它的研究和实践意义

2、图解营养物质进入细胞的四种运输方式

3、测微生物生长量的方法（任选两种）

4、简要描述单细胞微生物在液体培养集中的生长曲线

5、什么是病毒，它有什么特性

以上为公共部分，下为食品学院特有部分

三、问答题（1-6十分，7、8二十分）

1、以下食品的变质及致病原因，怎么预防

（1）、市售熟牛肉，顾客腹泻，但未检出致病菌

（2）、封口杀菌果奶变质

2、高温热致死规律，影响因素，并举例说明

3、鉴定菌种：Escherichia Coli, Bacillus Subtilis,Clostridium butyrium,Staphylococcus aureus,Saccharomyces Cerevisiae

4、根据突变株的表现型，突变可分为哪些类型，以产量突变为例，兼书记引诱变育种的一般过程

5、什么是酸性食品，什么是非酸性食品，它们的安全保藏应采取什么温度杀菌，为什么

6、从自然环境中筛选高产酸性蛋白酶菌株，注意关键步骤，如何鉴定保藏所筛选的菌株

7、列四种影响食品安全的微生物或微生物代谢产物，哪些实验技术或方法可快速分离与鉴定，任举一例，说明具体实验方案

8,一种微生物作为直接食用的食品或作为食品资源应满足那些条件，从哪些方面进行评价，举例说明

2010江南大学微生物（食品）（回忆版）

一、名词解释：（共10个）

菌落、温和性噬菌体、益生菌、生长因子、

二、图解

酿酒酵母的生活史、Ames test、D值和Z值

三、填空

1、一般消毒的条件（）摄氏度（）分钟；干热灭菌的条件（）摄氏度，（）分钟

2、米粉变质的主要微生物及原因

3、新鲜蔬菜变质的主要微生物及原因

四、简答题

1、比较枯草芽孢杆菌与大肠杆菌的异同

2、PCR技术

3、单克隆抗体的制备

五、论述题

1、影响延滞期的因素，并利用此原理说明制备酸奶是应注意什么

2、如何制备甲型H1N1疫苗

3、如何鉴定大肠菌群，所用培养基属于什么类型

三、简答：

4、影响微生物耐热性的因素并论证D、Z值的关系

B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B 淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。

过程

1）免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。

2）骨髓瘤细胞的培养与筛选在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。

3）细胞融合的关键:

1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。

2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。

4）阳性克隆的筛选应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA 法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。

5）克隆化克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀释法。

（1）显微操作法：在显微镜下取单细胞，然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂，效率低，故不常用。

（2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后，按每孔1个细胞接种在培养皿中，细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化，所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成。应该注意的是，每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存，以便重复检查，避免丢失有意义的细胞。

（3）软琼脂法：将杂交瘤细胞稀释到一定密度，然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自

由移动，彼此互不相混，从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。

（4）荧光激光细胞分类法：用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞，然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞，并进行单细胞培养。

6）细胞的冻存与复苏

7）大规模单克隆抗体的制备选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。

意义：

用于以下各种生命科学实验并具有医用价值

（1）沉淀反应：Precipitation reaction

（2）凝集实验：haemaglutination

（3）放射免疫学方法检测免疫复合物

（4）流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离。

（5）ELISA 等免疫学检测

（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的

亲和力。

(7) 免疫印记（western blotting)

（8）免疫沉淀：

（9）亲和层析：分离蛋白质

（10）磁珠分离细胞

（11）临床疾病的诊断和治疗；