土壤中几种芽孢杆菌的研究

土壤中

几种芽孢杆菌的研究

The Research

of the Bacillus

in Soil

李小凡

山东大学生命科学学院

2002年12月25日

摘要

本实验中，通过对土壤溶液的浓度梯度分离纯化和选择性培养基的培养，取得了土壤中有代表性菌株，并对其中芽孢杆菌属(Bacillus)的几株做了比较详细的，形态学的分析和归类，包括巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus) ，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，多粘性芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)等等。其后，还对某些菌株作了生理生化实验，通过实验进一步分析菌株的生理特征，并验证菌株的分类。

Abstract

To get a common idea for what kinds of bacteria that soil contains, especially for species of Bacillus, we did concentration gradient of soil and made inoculation on 2 selective culture media. By research on morphologic observation and analysis, several strains were identified, i.e. Bacillus megaterium, Bacillus mucilaginosus, Bacillus subtilis, Bacillus polymyxa. Meanwhile, we did physiological test of two strains we selected, with the comparison of 3 other typical strains: Escherichia coli, Bacillus pyocyaneus, and Staphylococcus aureus. The results of our physio- logical test validated our analysis and classification.

关键词

土壤芽孢杆菌浓度梯度形态学生理生化

keywords

soil, bacillus, concentration gradient, morphologic, physiological

正文目录

1．概述 (1)

2．详细过程 (2)

2.1.2 试管、平板及其他准备 (2)

2.1.3 土壤溶液的制备 (3)

2.1.4 接种与培养 (3)

2.1.5 分离纯培养 (3)

2.1.6 观察结果 (3)

2.2.1 试剂的准备 (3)

2.2.2 菌种的选择 (6)

2.2.3 接种及培养 (6)

2.2.4 观察结果 (6)

3．结果展示与分析 (6)

3.1结果展示 (6)

3.1.1 浓度梯度培养结果展示 (6)

选择接种结果展示 (8)

3.1.2

3.1.3 生理试验结果 (12)

4．试验总结 (13)

5．附录 (14)

1．概述

1.1研究目的

对土壤中常见的几种芽孢杆菌的类型和特征有比较详细的了解。

熟悉论文的体裁和论文的写作。

1.2研究背景

土壤中含有丰富的微生物。据统计，每克土壤中含有微生物数量几亿到几十亿不等，包括了从细菌，真菌，藻类以及原生动物几乎所有的类群。土壤内含有细菌生活所需的氮素养料(NH4+，No3-)，各种盐类及微量元素，一般还含有1一15％有机物质(来源予死亡的动植物及动物排泄物)。地表下一定深度的土壤中含有丰富的水分和空气。土壤的PH接近中性，也适宜细菌生活。土壤是由大小不等的团粒组成，团粒之间的孔隙为水和空气所充满，细菌就是生活在这些孔隙中。由于胶体表面的吸附性质，使细菌和土壤中的有机、无机物质互相吸附着而形成无机——有机——生物复合体。所以土壤是细菌生活的良好环境，在其中含有大量的细菌和其它微生物。一克耕作土壤约含几亿细菌和放线菌，几十万个霉菌、5万个藻类植物和25万个原生动物。本试验即试图用选择性培养基来分离出几种有代表性的芽孢杆菌。

1.3研究过程

将土壤配置成土壤溶液，按浓度梯度接种于两种培养基平板上（牛肉膏－蛋白胨培养基，无氮培养基）。培养7d后观察结果，记录平板上的菌落形态，并选择可能是芽孢杆菌的菌落进行分离培养。培养7d后，制片观察。然后选择两株，再加上对比菌株，培养48h后做生理生化试验。

2．详细过程

2.1 菌种的分离

2.1.1 培养基的制备

2.1.1.1 牛肉膏－蛋白胨培养基

成分参数

牛肉膏 1.5g

蛋白胨5g

氯化钠 2.5g

琼脂10g

水500g

pH 7.0~7.2

121 °C灭菌20min.

2.1.1.2 无氮培养基

成分参数

葡萄糖1％

K2HPO4 0.05％

MgSO40 0.02％

CaCO3 0.1％

酵母膏 0.04％

玻璃粉 0.1％

琼脂2％

pH 7.0

121 °C灭菌20min.

2.1.2 试管、平板及其他准备

洗净试管28支，培养皿20套，足量棉塞，10支1mL毛细吸管，三角瓶一只内装90mL水。将试管、培养皿和毛细吸管包好，和装有水、两种培养基的三只三角烧瓶一并放入高压锅，121 °C灭菌20min。

2.1.3 土壤溶液的制备

取地表5厘米处10g土壤，放入盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20min,使土样与水充分混合，使细胞分散。待用。

2.1.4 接种与培养

灭菌完毕后，取5支无菌试管，每支倒入9mL无菌水。用一支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌试管从此试管中已无菌操作吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，依此类推制成不同稀释度的土壤溶液，比浓度分别为10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6。

20套培养皿，倒10个牛肉膏－蛋白胨培养平板，倒10个无氮培养平板。

采用涂布平板法接种。其中必要的平板采用混悬法涂布，即先倒菌液再倒琼脂并混匀的方法，用于分离厌氧菌。

将平板倒置放入30 °C培养箱中培养3天。

其余20支试管，分别用两种培养基倒10支斜面，置于冰箱中备用。

2.1.5 分离纯培养

观察，记录平板上的菌落数量和特征。根据菌落的形态特征，选取可能是芽孢杆菌的菌落接种到斜面上，分离培养并留种。耗时3d。