细胞爬片制作(Hela细胞为例)

细胞爬片SOP（以Hela为例）

1、在六孔板中加入细胞爬片，然后铺上5X105个细胞培养24h.

2、待细胞贴壁后，配制转染混合液，将2ugDNA加至250ul无血清DMEM中混匀，室温静置5min；加5ul soinfection 转染试剂加至250ul 无血清DMEM中混匀，室温静置5min；然后将两者混匀室温孵育30min.

3、将转染混合液缓慢而分滴加至6孔板中培养48-72h

4去细胞上清，用PBS清洗2次，新配80%冷丙酮固定液加入细胞中，室温作用10min，

5、PBS洗2遍，每次洗5min。加入2%BSA（每孔500ul）封闭30min，再次PBS清洗两次

6、加入0.1% Triton-X100（每孔500ul）孵育10min,PBS清洗两次

7、加入稀释好的一抗（每孔50ul）至孔板中间部位，室温孵育1h。

8、PBS清洗3次，加入稀释好的二抗（每孔50ul）至孔板中间部位，室温孵育1h。

9、用PBS清洗三次后进行细胞核染色。加1:200稀释好DAPI染色，室温作用30min。

10、用PBS清洗2次后，将爬片取出，用吸水纸吸干表面水并去除周边细胞，用记号笔圈出孵育抗体的细胞。

11、滴一滴封片剂在载玻片上，然后将细胞爬片倒放在载玻片上，用白色指甲油封片。