小鼠MCAO总结

小鼠MCAO模型

一、实验器材：

1.手术器械：眼科剪1、显微剪1、钩镊1、直镊1、显微镊2、止血钳1、持针器1、缝合

线（2-0/5-0）、缝合针、麻醉剂：10%水合氯醛（350mg/kg）

2.栓线：0.18mm（20~25g）、0.20mm (25~30g) ；在栓线10mm的位置用黑色记号笔标记；

75%酒精清洁后置1: 2500单位肝素化生理盐水中备用。

3.其他用品：酒精棉球、75%酒精、生理盐水、注射器（1ml、2ml）、黑色记号笔、固定鼠

用粗线绳、鼠板

二、步骤：Zea Longa 线栓法

1.麻醉：10％水合氯醛腹腔注射（350mg/kg）

2.术前准备：仰卧位固定大鼠，备皮消毒

3.分离血管及挂线：

1)自胸骨柄到下颌骨间取长约1cm 正中切口。见下颌下腺，将其分离至两侧；

2)见右侧肩胛舌骨肌、胸骨舌骨肌、二腹肌形成的三角区，镜下分离此三角区内，暴露右

侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）；

3)首先分离CCA于其上挂线1；

4)随后向头侧分离ECA血管及其分支，于ECA上头尾侧分别挂线2、3；

5)然后清除CCA分叉部脂肪，观察ECA分支与ICA关系，分离ICA及ECA分支，于其

上挂线4；

6)注意操作轻柔避免迷走神经、舌咽神经、气管损伤，避免过度牵拉血管使其严重移位或

断裂。

5.结扎：死结：线1、2；活结：线4；不系结：线3

6.剪口插入：

1)将鼠台逆时针旋转90°，在ECA上距分叉1~1.5mm用显微剪剪一切口；

2)将标记好的线栓由此切口插入CCA 中；

3)将鼠台转回，将线栓从CCA拔出至分叉稍尾侧，右手将线栓转向滑入ICA，右手拉开线

4活结，后继续插入ICA，待有阻力时再进入少许，深度1cm+，到达大脑中动脉与前交通之间；

4)顺利插入后将丝线4扎紧，抽出线3减去多余线头。

6.缝皮

7.术后：小鼠俯卧位，头略抬高，至于温湿度适宜环境。

三、注意事项：

1.雌性鼠对于牵拉等操作的反应更强烈，故建议选择雄性大鼠作为实验对象。

2.大鼠解剖学变异：一般而言，Fisher-344大鼠MCA解剖变异较小，闭塞后形成的梗死体

积一致性好；Wistar-Kyoto 大鼠变异相对最大；而Sprague-Dawley大鼠介于两者之间。

3.麻醉：10%水合氯醛腹腔注射（30ml/kg），一般可持续1~1.5h。如按标准体重计算的麻

醉剂量效果欠佳，可使用总量的10%进行追加。需注意反复多次或过量追加易造成动物死亡，或导致清醒推迟而影响再灌注前评分，从而使再灌注时间不能统一界定在2h。

水合氯醛可使动物呼吸频率下降50%左右,但一般不会导致动物窒息而死亡。术中严密观察动物呼吸频率、深度及有无痰鸣音等。

4.分离气管前肌肉时注意保护好甲状腺和甲状旁腺。甲状腺呈鲜红色，紧密贴在气管前壁

上，甲状旁腺位于甲状腺外上方，颜色略淡。血管分离要到位，使用电凝器可明显减少小血管的出血，从而保证手术野清晰，尤其是肌肉内部的血管和ECA 的一些细小分

支，未明确时不可随意离断。结扎血管时要注意力度和方向，由于血管被膜被分离后血管表面相当光滑，结扎不牢可能导致难以控制的出血；术中还要注意保护与血管紧密相依的神经，注意观察神经的颜色、反光性和轻触时的感觉，切勿损伤或离断。牵拉迷走神经时可见动物呼吸明显减慢甚至血液呈深紫色，出现肢体末端紫绀。在无法给予辅助通气时，应暂停操作。一般来说，动物呼吸可恢复到麻醉后的平稳状态，血液颜色也可恢复到正常，这时再继续手术较为安全。

5.关于是否结扎PPA 文献报道尚不一致。可沿ICA一直分离至看到其入颅分支与PPA分

叉处，观察线栓走行状况，若顺利将长度约1cm的线栓插入，则可固定线栓而无需对PPA进行操作；如只进入5mm左右即遇到明显阻力，则线栓进入PPA的可能性很大，此时可将线栓撤离至ECA/ICA处，提起PPA，以帮助线栓沿ICA进入颅内而最终阻塞MCA。

6.Koizumi等1986年首次报道不开颅经CCA插入尼龙线栓致MCA闭塞；之后，Longa等

进行了改良，将栓线从ECA插入，再灌注时将栓线抽回ECA内，通过CCA实现再灌注。Koizumi使用的丝线末段均匀包被硅胶，直径增加近30~40%，插入后不仅可伸入大脑前动脉ACA）近端，肯定阻塞ACA及前交通动脉，而且阻塞MCA及后交通动脉开口处，彻底阻塞MCA及其所有侧枝供应血管，形成供应区域完全缺血，因此局部梗死面积大，均匀一致，各动物间差异较小。Longa使用的4-0尼龙线末端球形扩大，但并非直接闭塞MCA，而是依靠结扎同侧ICA和其球形扩大的末端伸入ACA腔内、阻断经前交通动脉来自对侧ACA的血流形成局灶性脑缺血，但不能阻断来自后交动脉的侧枝供应，且丝线末端伸入ACA腔内位置不同，所起作用差异很大，因此形成的梗死面积很小，各动物之间差异较大。宋红松等建议采用Koizumi方法。

丁香园：

1.注意尽量不要损伤在颈内颈外分叉下的交感神经节。

2.栓线进入后颈内动脉后即可逐渐插入了，有时候很顺利一插到底，但有时候在中间就怎么

也进不去了，这是因为在血管入颅穿过颅骨时有一个狭窄或者角度。因此，碰上这种明显阻力时，一定不能盲目向前使力插，越插栓线前端变形越进不去且容易损伤血管。这时候正确的作法是往外抽出较多栓线，

也许会有一定的动脉血流出，不必

慌，只要顺着血管走行调整一下进

线角度轻柔的使劲，一般都能进

去，反复试几次还不行最好换根栓

线，很可能前端也经变形角度变

了！颈内动脉的走向为内上方,可

以用眼科镊夹住鱼线插,但进去后

要注意,别太用力,要不血管就要破

了

3.栓线不能在血管里反复进退，否则

及容易造成蛛网膜下腔出血，而且

很容易误解为模型成功，因为这时

的神经功能改变也很明显，但并不是由于栓塞引起的