差异蛋白组学分析与鉴定方法的研究进展
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ｅ ｕｌ ｒ ｍ ｐ ａ ｉ ｔ ｌ ｔ ｐ ｏｅｉ）：用 于分离 碱性 蛋 白 （ Ｈ ｑ ｉｂｉ Ｈ ｇ ｄｅ ｅ ｒ ｈ ｒ ｓ ｉ ｕ ｒ ｎｅ ｃｏ ｓ ｐ
值 ＞７０）。如果 聚 焦 达 到平 衡 状态 ，碱性 蛋 白会 离 开凝 胶 基 质 ．
而丢 失 ；③ ＩＧ— Ａ Ｔ （ ｍｍ ｂｌ ｅ Ｈ ｇ ａ ｉ ｔ ）：Ｉ Ｇ 过 Ｐ Ｄ Ｌ Ｉ ｏ ｉ ｚ ｄｐ ｒｄｅ ｓ ｉ ｎ Ｐ 通
Ｉ ｍｍｏ ｉｎ 共 价 偶联 于丙 烯 酰胺 产 生 固定 的ｐ 值 梯 度 ，克 服 了 ｂｌ ｅ ｉ Ｈ ＩＦ Ｅ 的缺 点 ，从而 达到 高度 的重 复性 。 】
差异 凝胶 电泳 （ ｆｅｅ ｃ ｅ ｌｃｒｐ ｏｅｉ，ＤＩ Ｄｉ ｒｎ ｅｇ ｌ ｅｔｏ ｈ ｒｓｓ ｅ ＧＥ）是 对
２ 差异蛋 白质组学的研究步骤
差 异蛋 白组学 是依 据样 本在不 同 时期 、不 同组 织 、不 同状 态 或不 同外 界 条件作 用下 所表 达 的蛋 白质 的不 同来达 到鉴定 、筛 选 蛋 白质 的 目的 ，进 而绘 制差 异蛋 白质谱 ，寻找 差异 位点 。其研 究 需要 完 成三 大步骤 ：① 有效 完全 地对 所有 蛋 白质组 分进行 提取 分
因组 图谱 基 本绘 制完 成 ，蛋 白质 组学 理论 及技 术 的迅速 发展 及完 善 ，被认 为 是后 基因组 研究 中的最 主要部 分 。差异 蛋 白质组 学是 结构 蛋 白质 组学研 究 的一个 分支 ，通 过获 得细胞 或 生物 体在 蛋 白 质组 上 的差 别或变 化 的足够 信息 ，就 能够 指证 它们 所处 的状态 ，
Ｏ’Ｆ ｒｅｌ 于 ｌ ７ 年 首 次建 立 并 成 功地 分 离 约 １０ ０ Ｅ ｃ ｌ ａｒ ｌ ’ｓ ９ ５ ０ 个 ．ｏｉ
以及 它们 的状 态是 正常 或是 异常 ，在疾 病 的早期 诊 断 、病 程及 疗 效监 测 、环境 因素影 响 分析 等方 面的应 用价 值是 不 言而喻 的 。文
离 ；② 准确 区分差 异蛋 白质 位点 ，建 立差 异蛋 白谱 ；③ 通过计 算
机 网络 资源或质 谱分 析差 异表 达蛋 白的结 构功 能和 实际意 义 。 】
技 术 中的核 心技术 之 一 ，分别 用含 有轻 重 同位素 的两种 标 记分 子 对 比较研 究样 品 中 的半 胱 氨酸 进行 标记 ，然 后对 混合 的样 品进行
６ｌ ６ Ｏ
吉林 医学 ２ １年 １月 第３ 卷第３ 期 ００ １ １ ３
・
综 述
・ Leabharlann 差异 蛋 白组 学分 析与鉴定 方 法的研究 进展
达 瑞 ，刘永琦 （ 甘肃省 中医学 院，甘肃 兰州 ７０ ０ ３ ０ ０） ［ 关键词】 差异蛋白质组学 ；分析及鉴定方法及技术 ；蛋白质芯片
２０ 年２ ，参 与人 类 基因 组计 划 的各 国科 学家 宣 布人类 基 ０１ 月
ａ ｈ ｌ ｅ Ａ），在 管胶 内建 立ｐ 值梯 度 ；（Ｎ Ｐ Ｇ （ ｎ ｍｐ ｏ ｔ，Ｃ ｙ Ｈ ￣ Ｅ Ｈ Ｅ Ｎｏ． ） １ 蛋 白 组学 与 差 异 蛋 白组 学 的概 述
蛋 白质组学 是研 究细胞 内全 部蛋 白质 的存在 与行 为方式 的一 门学科 ，是 后基 因组 研究 中最 主要 的部 分 ，是从 整体上 对体 系 内 蛋 白质 进行 研究 ” 】 对 而言 ， 异 蛋 白质组学 是对 某个 体 系的蛋 。相 差 白质进 行鉴 定 ，并详 细 阐述其 翻译 后修 饰 的特性差 异 的蛋 白质组 学， 即以 重要 生命 过 程或 人 类重 大疾 病 为对 象 ， 重 要生 理 和病 进行
地 提高 了结果 的 准确性 、可 靠性 和 可重 复性 。在该 技术 中， 由于 每个 蛋 白点都 有 它 自己 的内标 ，且 软件 可全 自动根 据 每个 蛋 白点 的 内标对 其 表达量 进行 校准 ，保 证 了所 检测 到 的蛋 白丰度 变化 的
真 实性 。 ３ 同位 素 标记 亲 和标 签 （ Ｃ Ｔ）技术 ：同位 素标 记 亲 和标签 ． ３ ＩＡ （ ｓｔｐ ｏ ｅ ｆ ｎｔ ｔｇ ｓ Ｃ Ｔ） 术是 差异 蛋 白质组 研究 Ｉ ｏ ｅｃ ｄ ｄａ ｉ ｅ ，Ｉ Ａ 技 ｏ ｉ ｙａ
理 体 系或过 程 的蛋 白质表 达 的 比较 ，通 过各种 先进 技术 研究 蛋 白
质 之 间的相互 作用 ， 某个 体系 的蛋 白质作 用的 网络 图谱 。 绘制 】
２Ｄ 在技 术上 的改进 ，结合 了多重 荧光分 析 的方法 ，即在 同一 块 －Ｅ 胶 上共 同分 离多 个分 别 由不 同荧光 标记 的样 品 ，采用 不 同的荧 光 标 记混 合后 进行 ２ Ｅ 检 测蛋 白质 在两 种 样 品 中表 达情 况 ，极大 Ｄ来
３２ 双 向 电泳 及 差 异 凝 胶 电泳 技 术 ：双 向 电泳 （ ｗｏ ｄｍｅ — ． Ｔ ． ｉ ｎ
ｓ ｎ ｌ ｌｃ ０ ｈ ｒｓ ，２Ｄ ｉ ａ ｅｅｔ ｐ ｏｅｉ ｏ ｒ ｓ － Ｅ）是等 电聚焦 电泳 和 Ｓ —Ａ 的 ＤＳＰ ＧＥ 组 合 ，即 先 进 行 等 电 聚 焦 电泳 （ 照 ｐ 分 离 ），然 后 再 进 行 按 １ Ｓ —ＡＧＥ （ 照 分 子 大小 ），经 染 色得 到 二 维 分 布 的蛋 白质 ＤＳＰ 按 图 。它 是 差 异 蛋 白质 组 学 研 究 的重 要 手 段 之 一 。 双 向 电 泳 由
章对 差异 蛋 白质 组学 相关 分析 及鉴 定技 术研 究方 法及技 术进 行综
述。
蛋 白 ，并 发 现 蛋 白 质 谱 不 是 稳 定 的 ，而 是 随 环 境 而 变 化 。 】 ２Ｄ 分 离蛋 白方法 有 ：① ＩＯ Ｄ Ｔ （ｓｅｅｔｃｆｃｓ －Ｅ３ Ｓ — ＡＬ Ｉ ｌ ｒ ｕ ）：以 ｏ ｃｉ ｏ Ｏ’Ｆ ｒ ｌ’ｓ 术为 基 础． 一 向应 用 载 体两 性 电解 质 （ ａ ｉ ａｒ ｌ 技 ｅ 第 Ｃ ｒｅ ｒｒ
值 ＞７０）。如果 聚 焦 达 到平 衡 状态 ，碱性 蛋 白会 离 开凝 胶 基 质 ．
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Ｉ ｍｍｏ ｉｎ 共 价 偶联 于丙 烯 酰胺 产 生 固定 的ｐ 值 梯 度 ，克 服 了 ｂｌ ｅ ｉ Ｈ ＩＦ Ｅ 的缺 点 ，从而 达到 高度 的重 复性 。 】
差异 凝胶 电泳 （ ｆｅｅ ｃ ｅ ｌｃｒｐ ｏｅｉ，ＤＩ Ｄｉ ｒｎ ｅｇ ｌ ｅｔｏ ｈ ｒｓｓ ｅ ＧＥ）是 对
２ 差异蛋 白质组学的研究步骤
差 异蛋 白组学 是依 据样 本在不 同 时期 、不 同组 织 、不 同状 态 或不 同外 界 条件作 用下 所表 达 的蛋 白质 的不 同来达 到鉴定 、筛 选 蛋 白质 的 目的 ，进 而绘 制差 异蛋 白质谱 ，寻找 差异 位点 。其研 究 需要 完 成三 大步骤 ：① 有效 完全 地对 所有 蛋 白质组 分进行 提取 分
因组 图谱 基 本绘 制完 成 ，蛋 白质 组学 理论 及技 术 的迅速 发展 及完 善 ，被认 为 是后 基因组 研究 中的最 主要部 分 。差异 蛋 白质组 学是 结构 蛋 白质 组学研 究 的一个 分支 ，通 过获 得细胞 或 生物 体在 蛋 白 质组 上 的差 别或变 化 的足够 信息 ，就 能够 指证 它们 所处 的状态 ，
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技 术 中的核 心技术 之 一 ，分别 用含 有轻 重 同位素 的两种 标 记分 子 对 比较研 究样 品 中 的半 胱 氨酸 进行 标记 ，然 后对 混合 的样 品进行
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吉林 医学 ２ １年 １月 第３ 卷第３ 期 ００ １ １ ３
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・ Leabharlann 差异 蛋 白组 学分 析与鉴定 方 法的研究 进展
达 瑞 ，刘永琦 （ 甘肃省 中医学 院，甘肃 兰州 ７０ ０ ３ ０ ０） ［ 关键词】 差异蛋白质组学 ；分析及鉴定方法及技术 ；蛋白质芯片
２０ 年２ ，参 与人 类 基因 组计 划 的各 国科 学家 宣 布人类 基 ０１ 月
ａ ｈ ｌ ｅ Ａ），在 管胶 内建 立ｐ 值梯 度 ；（Ｎ Ｐ Ｇ （ ｎ ｍｐ ｏ ｔ，Ｃ ｙ Ｈ ￣ Ｅ Ｈ Ｅ Ｎｏ． ） １ 蛋 白 组学 与 差 异 蛋 白组 学 的概 述
蛋 白质组学 是研 究细胞 内全 部蛋 白质 的存在 与行 为方式 的一 门学科 ，是 后基 因组 研究 中最 主要 的部 分 ，是从 整体上 对体 系 内 蛋 白质 进行 研究 ” 】 对 而言 ， 异 蛋 白质组学 是对 某个 体 系的蛋 。相 差 白质进 行鉴 定 ，并详 细 阐述其 翻译 后修 饰 的特性差 异 的蛋 白质组 学， 即以 重要 生命 过 程或 人 类重 大疾 病 为对 象 ， 重 要生 理 和病 进行
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真 实性 。 ３ 同位 素 标记 亲 和标 签 （ Ｃ Ｔ）技术 ：同位 素标 记 亲 和标签 ． ３ ＩＡ （ ｓｔｐ ｏ ｅ ｆ ｎｔ ｔｇ ｓ Ｃ Ｔ） 术是 差异 蛋 白质组 研究 Ｉ ｏ ｅｃ ｄ ｄａ ｉ ｅ ，Ｉ Ａ 技 ｏ ｉ ｙａ
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２Ｄ 在技 术上 的改进 ，结合 了多重 荧光分 析 的方法 ，即在 同一 块 －Ｅ 胶 上共 同分 离多 个分 别 由不 同荧光 标记 的样 品 ，采用 不 同的荧 光 标 记混 合后 进行 ２ Ｅ 检 测蛋 白质 在两 种 样 品 中表 达情 况 ，极大 Ｄ来
３２ 双 向 电泳 及 差 异 凝 胶 电泳 技 术 ：双 向 电泳 （ ｗｏ ｄｍｅ — ． Ｔ ． ｉ ｎ
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蛋 白 ，并 发 现 蛋 白 质 谱 不 是 稳 定 的 ，而 是 随 环 境 而 变 化 。 】 ２Ｄ 分 离蛋 白方法 有 ：① ＩＯ Ｄ Ｔ （ｓｅｅｔｃｆｃｓ －Ｅ３ Ｓ — ＡＬ Ｉ ｌ ｒ ｕ ）：以 ｏ ｃｉ ｏ Ｏ’Ｆ ｒ ｌ’ｓ 术为 基 础． 一 向应 用 载 体两 性 电解 质 （ ａ ｉ ａｒ ｌ 技 ｅ 第 Ｃ ｒｅ ｒｒ