速率法测定ALT
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的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入 血，致血中该酶活性浓度增加，故测定ALT常 作为判断指标。
思考题
比较赖氏法和速率测定ALT。
结果计算： 酶活力=- △A/min*1746（U/L）
操作步骤（半自动）
具体操作先看示教
注意事项
反应准确计时 检测标本最好用新鲜标本 溶血的影响
评价
准确性好 重复性好 操作简便 实验条件要求高，成本高
临床意义
ALT主要存在肝脏 ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细胞
蛋白沉淀剂等终止酶促反应,测定这段时间内底物的减 少量或产物的生成量,也称为”两点法”。
连续监测法：连续测定酶反应过程中某一反应产物的
浓度随时间变化的多点数据,求出酶反应初速度,间接 计算酶活性浓度的方法。
基本原理
L-丙氨酸 + α-酮戊二酸
ALT α -丙酮酸 +
+ L-谷氨酸
NADH
LDH
乳酸 + NAD+
实验用试剂
R1：
α-酮戊二酸
NADH LDH R2： Tris缓冲液 L-丙氨酸
15mmol/L
0.18mmol/L >5000U/L
100mmol/L （PH7.3) 500mmol/L
操作步骤（工作液配制）
取R2 10ml溶解R1
操作步骤（手工）
按S：R=1：100制备各测定管 样本和试剂迅速混匀后，340nm波长，试剂空白调零， 室温测定1、2、3分钟的吸光度，得到-△A/min
ALT测定
速率法
学习目的
掌握速率法的原理 熟悉速率法测定ALT注意事项和比色法与速率
法的区别 了解ALT的临床意义
酶活性浓度测定方法
平衡法:通过测定酶促反应开始至反应达到平衡时产物
或底物浓度的总变化量来求出酶活性浓度的方法,文献 上也称终点法。
定时法: 多将酶固定作用一段时间,然后加入强酸,强碱,Байду номын сангаас
思考题
比较赖氏法和速率测定ALT。
结果计算： 酶活力=- △A/min*1746（U/L）
操作步骤（半自动）
具体操作先看示教
注意事项
反应准确计时 检测标本最好用新鲜标本 溶血的影响
评价
准确性好 重复性好 操作简便 实验条件要求高，成本高
临床意义
ALT主要存在肝脏 ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细胞
蛋白沉淀剂等终止酶促反应,测定这段时间内底物的减 少量或产物的生成量,也称为”两点法”。
连续监测法：连续测定酶反应过程中某一反应产物的
浓度随时间变化的多点数据,求出酶反应初速度,间接 计算酶活性浓度的方法。
基本原理
L-丙氨酸 + α-酮戊二酸
ALT α -丙酮酸 +
+ L-谷氨酸
NADH
LDH
乳酸 + NAD+
实验用试剂
R1：
α-酮戊二酸
NADH LDH R2： Tris缓冲液 L-丙氨酸
15mmol/L
0.18mmol/L >5000U/L
100mmol/L （PH7.3) 500mmol/L
操作步骤（工作液配制）
取R2 10ml溶解R1
操作步骤（手工）
按S：R=1：100制备各测定管 样本和试剂迅速混匀后，340nm波长，试剂空白调零， 室温测定1、2、3分钟的吸光度，得到-△A/min
ALT测定
速率法
学习目的
掌握速率法的原理 熟悉速率法测定ALT注意事项和比色法与速率
法的区别 了解ALT的临床意义
酶活性浓度测定方法
平衡法:通过测定酶促反应开始至反应达到平衡时产物
或底物浓度的总变化量来求出酶活性浓度的方法,文献 上也称终点法。
定时法: 多将酶固定作用一段时间,然后加入强酸,强碱,Байду номын сангаас