临床微生物检验_实验第三周
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• 掌握抗链球菌溶血素“O”试验原理、方法及结果 观察
第一天实验内容
1.脓标本(棉拭子)：每人做 接种血平板 （1个大血平/人）、涂片染色
2.肠球菌主要鉴定试验：每人做 菌落观察、涂片革兰染色显微镜观察、触酶、 6.5%NaCl、胆汁七叶苷
3. 肺炎链球菌主要鉴定试验：每人做 菌落观察、涂片革兰染色显微镜观察、触酶、 OP试验（1个小血平/人）、血清菊糖
－＋
血浆凝固酶试验
试管法： 1.试管中加入新鲜血浆（EDTA抗凝）0.5ml，取葡萄球菌5-6个菌落，在
试管中充分研磨混匀。 2.将试管置37℃孵育，每隔30分钟观察一次结果。 3.血浆凝固呈胶冻状,为阳性;若不凝固仍流动,为阴性
耐热核酸酶试验
原理： 平板划线法：
24h培养的肉汤
沸水处理15min
（B群链球菌即无乳链球菌）
--以上试验每人均做
接种环点种在甲苯胺蓝DNA平板
37℃培养24h,观察结果
阳性：划线或点种区出现粉红色
胆汁溶菌试验
滴加100g/L去氧胆酸钠于菌落上，35℃ 15～30min。 结果：平板上菌落消失+
第三天实验内容
1.观察昨天实验结果：杆菌肽试验 CAMP试验 脓标本鉴定结果
2.卡他莫拉菌：菌落形态观察、涂片染色、氧化酶 3.抗链球菌溶血素“O”试验（胶乳法） 4.淋病奈瑟菌涂片革兰染色：示教 5.A链和B链：涂片染色、触酶
中性红
阴性
阳性
OPTOCHIN试验： 抑菌环直径>=14 敏感
18mm
杆菌肽试验
密集划线 B群链球菌 --对照
杆
杆
密集划线 A群链球菌
杆菌肽
14mm
杆菌肽试验： 抑菌环直径>=10 敏感
CAMP试验
B链
阴性对照（A群链球菌）
金葡菌
两线不得相接， 间隔约3～4mm。
血浆凝固酶试验
玻片法：金黄色葡萄球菌表面有结合的凝固酶（聚 集因子），与血浆中的纤维蛋白原交联使 菌体快速凝聚。
--以上试验每人均做
脓汁、分泌物
直接涂片
血平板
革兰染色
可疑菌落
镜检
涂片革兰阳性球菌
初步报告
触酶（+） 触酶（-）
耐热核酸酶 血浆凝固酶 甘露醇 DNA酶 其他生化反应
取菌落触酶试验
取菌落涂片革兰染色
触酶试验：玻片法
6.5%NaCl生长试验
溴甲酚紫
阴性
阳性
胆汁七叶苷
阴性
阳性
血清菊糖分解试验
菌
菌
肠球菌主要鉴定特征
血平板上菌落特征：（每人均观察） 菌落灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，无溶 血环或出现α溶血环。
革兰染色： （每人均做） 革兰阳性球菌，卵圆形，单个、成双或短链排列。
生化反应：触酶（-） （每人均做）
胆汁七叶苷（+） 6.5%NaCl（+）
肠球菌 可表现 为α溶血
α溶血
肠球菌 可表现 为不溶 血
• 试剂
触酶试剂、血清菊糖、6.5%NaCl、胆汁七叶 苷生化微量管、OP纸片、
• 菌种
模拟脓标本、肺炎链球菌、肠球菌、A群及B群链球菌
其他
血平板（大和小每人各一个）、玻片 、接种针、酒精灯
脓汁、分泌物
直接涂片
血平板 巧克力平板等
大气、厌氧、二氧化碳环境 革兰染色 抗酸染色等 可疑菌落
镜检
涂片革兰阳性球菌
临床微生物学检验 实验第三周
2013检本
目的要求
• 掌握从脓标本中分离鉴定化脓性球菌的程序及鉴 定方法
• 掌握金黄色葡萄球菌、链球菌属（A群化脓性链 球菌、B群链球菌和肺炎链球菌）、肠球菌和卡 他莫拉菌的菌落特点、菌体形态、镜下排列和染 色性以及常用的鉴定试验原理、方法
• 掌握淋病奈瑟菌革兰染色镜下形态、排列与染色 特点
生化反应：触酶（-） Optochin敏感试验（+）
（每人均做）
血清菊糖分解试验（+）
胆汁溶菌试验（+）
肺炎链球菌（血平板）
肺炎链球菌（血平板）Hale Waihona Puke Baidu
肺炎链球菌“脐窝状”菌落
肺炎链球菌革兰染色 （×1000）
肺炎链球菌革兰染色 （×1000）
菌
肺炎链球菌荚膜 （×1000）
触酶试验：玻片法，肺双触酶（-）
试管法：细菌分泌到菌体外的凝固酶被血浆中的协 同因子激活形成复合物，再使纤维蛋白原 转变成纤维蛋白。
血浆凝固酶试验
玻片法： 1.取数环生理盐水于干净玻片一端，取3-4环血浆于玻片另一端。 2.用接种环取葡萄球菌5—10个菌落在生理盐水内研磨成细菌悬液（浓菌液），
然后取此悬液2--4环与血浆混匀。 3.10秒内观察结果，有凝块出现，即为阳性；若无凝块出现，则为阴性
OP试验： 操作： 用接种环取待检菌，密集划线于 血平板上，再用镊子贴上OP纸片。
结果观察：量抑菌环直径>=14
注意事项： 纸片贴上，不要再移动。 血平板置于CO2环境培养。
血清菊糖试验 中性红
阴性
阳性
第一天实验内容
1.脓标本(棉拭子)：每人做 接种血平板 （1个大血平/人）、涂片染色
2.肠球菌主要鉴定试验：每人做 菌落形态观察、涂片革兰染色显微镜观察、触酶 试验、6.5%NaCl生长和胆汁七叶苷试验
3. 肺炎链球菌主要鉴定试验：每人做 菌落形态观察、涂片革兰染色显微镜观察、触酶 试验、OP试验（1个小血平/人）、血清菊糖
第二天实验内容
1.第一天实验结果观察：①肠球菌 ②肺双 2.棉拭子标本鉴定：观察菌落并涂片染色、触酶试验，
若阳性 接种甘露醇生化管、DNA酶试验（2平板/ 组，点种）、耐热核酸酶试验（2平板/组） 血浆 凝固酶试验（每人做--玻片法、试管法） 3.肺双：胆汁溶菌试验（平板法） 4.A群链球菌：杆菌肽试验（1个小血平/人） 5.B群链球菌：CAMP试验（1个大血平/人）
粪肠球菌革兰染色 （×1000）
触酶试验：玻片法，肠球菌触酶（-）
胆汁七叶苷试验
阴性
阳性
6.5%NaCl 生长试验
溴甲酚紫
阴性
阳性
肺炎链球菌主要鉴定特征
血平板上菌落特征：（每人均观察） 菌落细小、周围有草绿色溶血环，48小时后，由 于菌落自溶，呈现“脐窝状”
革兰染色： （每人均做） 革兰阳性球菌，矛尖状，成双排列。 在人和动物体内形成荚膜
初步报告
触酶（+） 触酶（-）
耐热核酸酶 血浆凝固酶 甘露醇 DNA酶 其他生化反应
革兰阳性球菌，触酶(-)
PYR 马尿酸盐水解
血清学 杆菌肽 CAMP Optochin 胆汁 胆 6.5%
鉴定
溶菌 七 NaCl
试剂盒 A群 B群
A、B、 化脓 无乳 肺炎
肠
C、D、 性链 链球 链球
球
F、G群 球菌 菌
第一天实验内容
1.脓标本(棉拭子)：每人做 接种血平板 （1个大血平/人）、涂片染色
2.肠球菌主要鉴定试验：每人做 菌落观察、涂片革兰染色显微镜观察、触酶、 6.5%NaCl、胆汁七叶苷
3. 肺炎链球菌主要鉴定试验：每人做 菌落观察、涂片革兰染色显微镜观察、触酶、 OP试验（1个小血平/人）、血清菊糖
－＋
血浆凝固酶试验
试管法： 1.试管中加入新鲜血浆（EDTA抗凝）0.5ml，取葡萄球菌5-6个菌落，在
试管中充分研磨混匀。 2.将试管置37℃孵育，每隔30分钟观察一次结果。 3.血浆凝固呈胶冻状,为阳性;若不凝固仍流动,为阴性
耐热核酸酶试验
原理： 平板划线法：
24h培养的肉汤
沸水处理15min
（B群链球菌即无乳链球菌）
--以上试验每人均做
接种环点种在甲苯胺蓝DNA平板
37℃培养24h,观察结果
阳性：划线或点种区出现粉红色
胆汁溶菌试验
滴加100g/L去氧胆酸钠于菌落上，35℃ 15～30min。 结果：平板上菌落消失+
第三天实验内容
1.观察昨天实验结果：杆菌肽试验 CAMP试验 脓标本鉴定结果
2.卡他莫拉菌：菌落形态观察、涂片染色、氧化酶 3.抗链球菌溶血素“O”试验（胶乳法） 4.淋病奈瑟菌涂片革兰染色：示教 5.A链和B链：涂片染色、触酶
中性红
阴性
阳性
OPTOCHIN试验： 抑菌环直径>=14 敏感
18mm
杆菌肽试验
密集划线 B群链球菌 --对照
杆
杆
密集划线 A群链球菌
杆菌肽
14mm
杆菌肽试验： 抑菌环直径>=10 敏感
CAMP试验
B链
阴性对照（A群链球菌）
金葡菌
两线不得相接， 间隔约3～4mm。
血浆凝固酶试验
玻片法：金黄色葡萄球菌表面有结合的凝固酶（聚 集因子），与血浆中的纤维蛋白原交联使 菌体快速凝聚。
--以上试验每人均做
脓汁、分泌物
直接涂片
血平板
革兰染色
可疑菌落
镜检
涂片革兰阳性球菌
初步报告
触酶（+） 触酶（-）
耐热核酸酶 血浆凝固酶 甘露醇 DNA酶 其他生化反应
取菌落触酶试验
取菌落涂片革兰染色
触酶试验：玻片法
6.5%NaCl生长试验
溴甲酚紫
阴性
阳性
胆汁七叶苷
阴性
阳性
血清菊糖分解试验
菌
菌
肠球菌主要鉴定特征
血平板上菌落特征：（每人均观察） 菌落灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，无溶 血环或出现α溶血环。
革兰染色： （每人均做） 革兰阳性球菌，卵圆形，单个、成双或短链排列。
生化反应：触酶（-） （每人均做）
胆汁七叶苷（+） 6.5%NaCl（+）
肠球菌 可表现 为α溶血
α溶血
肠球菌 可表现 为不溶 血
• 试剂
触酶试剂、血清菊糖、6.5%NaCl、胆汁七叶 苷生化微量管、OP纸片、
• 菌种
模拟脓标本、肺炎链球菌、肠球菌、A群及B群链球菌
其他
血平板（大和小每人各一个）、玻片 、接种针、酒精灯
脓汁、分泌物
直接涂片
血平板 巧克力平板等
大气、厌氧、二氧化碳环境 革兰染色 抗酸染色等 可疑菌落
镜检
涂片革兰阳性球菌
临床微生物学检验 实验第三周
2013检本
目的要求
• 掌握从脓标本中分离鉴定化脓性球菌的程序及鉴 定方法
• 掌握金黄色葡萄球菌、链球菌属（A群化脓性链 球菌、B群链球菌和肺炎链球菌）、肠球菌和卡 他莫拉菌的菌落特点、菌体形态、镜下排列和染 色性以及常用的鉴定试验原理、方法
• 掌握淋病奈瑟菌革兰染色镜下形态、排列与染色 特点
生化反应：触酶（-） Optochin敏感试验（+）
（每人均做）
血清菊糖分解试验（+）
胆汁溶菌试验（+）
肺炎链球菌（血平板）
肺炎链球菌（血平板）Hale Waihona Puke Baidu
肺炎链球菌“脐窝状”菌落
肺炎链球菌革兰染色 （×1000）
肺炎链球菌革兰染色 （×1000）
菌
肺炎链球菌荚膜 （×1000）
触酶试验：玻片法，肺双触酶（-）
试管法：细菌分泌到菌体外的凝固酶被血浆中的协 同因子激活形成复合物，再使纤维蛋白原 转变成纤维蛋白。
血浆凝固酶试验
玻片法： 1.取数环生理盐水于干净玻片一端，取3-4环血浆于玻片另一端。 2.用接种环取葡萄球菌5—10个菌落在生理盐水内研磨成细菌悬液（浓菌液），
然后取此悬液2--4环与血浆混匀。 3.10秒内观察结果，有凝块出现，即为阳性；若无凝块出现，则为阴性
OP试验： 操作： 用接种环取待检菌，密集划线于 血平板上，再用镊子贴上OP纸片。
结果观察：量抑菌环直径>=14
注意事项： 纸片贴上，不要再移动。 血平板置于CO2环境培养。
血清菊糖试验 中性红
阴性
阳性
第一天实验内容
1.脓标本(棉拭子)：每人做 接种血平板 （1个大血平/人）、涂片染色
2.肠球菌主要鉴定试验：每人做 菌落形态观察、涂片革兰染色显微镜观察、触酶 试验、6.5%NaCl生长和胆汁七叶苷试验
3. 肺炎链球菌主要鉴定试验：每人做 菌落形态观察、涂片革兰染色显微镜观察、触酶 试验、OP试验（1个小血平/人）、血清菊糖
第二天实验内容
1.第一天实验结果观察：①肠球菌 ②肺双 2.棉拭子标本鉴定：观察菌落并涂片染色、触酶试验，
若阳性 接种甘露醇生化管、DNA酶试验（2平板/ 组，点种）、耐热核酸酶试验（2平板/组） 血浆 凝固酶试验（每人做--玻片法、试管法） 3.肺双：胆汁溶菌试验（平板法） 4.A群链球菌：杆菌肽试验（1个小血平/人） 5.B群链球菌：CAMP试验（1个大血平/人）
粪肠球菌革兰染色 （×1000）
触酶试验：玻片法，肠球菌触酶（-）
胆汁七叶苷试验
阴性
阳性
6.5%NaCl 生长试验
溴甲酚紫
阴性
阳性
肺炎链球菌主要鉴定特征
血平板上菌落特征：（每人均观察） 菌落细小、周围有草绿色溶血环，48小时后，由 于菌落自溶，呈现“脐窝状”
革兰染色： （每人均做） 革兰阳性球菌，矛尖状，成双排列。 在人和动物体内形成荚膜
初步报告
触酶（+） 触酶（-）
耐热核酸酶 血浆凝固酶 甘露醇 DNA酶 其他生化反应
革兰阳性球菌，触酶(-)
PYR 马尿酸盐水解
血清学 杆菌肽 CAMP Optochin 胆汁 胆 6.5%
鉴定
溶菌 七 NaCl
试剂盒 A群 B群
A、B、 化脓 无乳 肺炎
肠
C、D、 性链 链球 链球
球
F、G群 球菌 菌