黄多孔菌产漆酶最佳培养条件的优化

Ｍａｄ ｌ 营养 盐 浓 缩液 １ ０ｍＬ Ｍａ ｄｌ 微 量 元 素浓 ｎｅ ｓ ０ ， ｎ ｅ ｓ 缩液 １ｍ ， ｕ Ｏ ５ ２ ， ｏ Ｌ 檬 酸 缓 冲 Ｌ Ｃ Ｓ ・ Ｈ ０ ４ｍｇ １ｍ ｌ 柠 ／
液 ５ （ Ｈ ＝５ ０） ０ ｍＬ ｐ ． 。
０ １ｍ ，５℃ 保 温５ｍｉ， 用 ７ ２ ． Ｌ ２ ｎ利 ２ Ｅ型紫 外 可 见 分 光光 度计 测５ ５ａ ９ ｍ处 的 光 密 度 （ Ｄ值 ） 酶 活 力 以 Ｏ ，
第３ ３卷
第 ２期
纺 织 学 报
Ｊ ｕ ｎ １ｏ ｅ ｔ ｅ Ｒｅ ｅ ｒ ｈ ｏ ｒ ａ ｆＴ ｘｉ ｓ ａｃ ｌ
Ｖ０ ． ３．Ｎｏ ２ １３ ．
２ ２年 ２月 ０１
Ｆ ｂ．。２０１ ｅ ２
文章 编 号 ：２ ３ ９ ２ （０ ２ ０ —０ ３ ０ ０５ —７ １ ２ １ ）２ ０ ６ —５
养基 进行 了优 化 ， 优化 后酶 活提 高达 ２ ５倍 ， 漆 酶 ． 为
的工 业化 生 产提供 了基础 。
１ 实 验 部 分
１ １ 材 料 －
实验 菌 株 ： 多 孔 菌 （ ｏｙｏｕ ｌ ａ ｓ（ ｕ ． 黄 Ｐ ｌ ｒｓｅ ｇ ｎ Ｂ ｌ ） ｐ ｅ １ Ｆ ． ， 源 于 中 国林 业 科 学研 究 院森 林 生 态 环 境 与 ｒ）来
一 一
＿ ＿ ＿ ｉ
一
１
一
样 品与底 物反应５ ｍ ｎ ｉ后光 密 度 的改 变值 表示 ， 以每 分 钟 光 密 度 增 加 ０ ０ １ 为 １ 个 酶 活 力 单 ．０ 位 （ ｍＬ 。 Ｕ／ ）
一
｝
液体 发 酵 培 养 基 ： 铃 薯 ２ ０ ｇ Ｌ 葡 萄 糖 马 ０ ／ ，
・
６ ４・
纺织 学报
第３ ３卷
自然 。
４ ６的醋 酸缓 冲液 ３ ５ｍＬ 加 入 ３ ３ ｍ ｌ Ｌ的邻 ． ． ， ． ６ｍ ｏ ／
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８
９
Ｏ
液体 种子 培养基 ： 萄糖 １ ／ ， 葡 ０ｇ Ｌ 酵母 粉 １ｇ Ｌ ／ ，
联 甲 苯 胺 ０ ５ｍ ， 加 入 适 当 稀 释 的 粗 酶 液 ． Ｌ 再
０ １ｍｍ ｌＬ ５ ５时 ， 酶 产 量 从 １８Ｕ ｍ 提 高 到 ４６ Ｕ ｍ 是 优 化 前 的 ２ ５倍 。 ． ｏ 和 ． ／ 漆 ７ ／ Ｌ ４ ／ Ｌ， ． 关 键词 ＰａｋｔＢ ｒ ａ ； 酶 ； 应 面 ；水 平 ｌｅｅｔ ｕｍ ｎ 漆 — 响
文献 标 志 码 ： Ａ
１ ２ ３ 酶 活 测 定 ．．
于表 中的 ７个 列 ， 个 因 素 取低 水 平 “一ｌ 和 高 水 每 ’ ，
平 “ ” 以漆 酶 活 力 为 响 应 值 对 实 验 结 果 进 行 分 １。
析 ， 出各 因 素 的 ｔ 和 可 信 度水 平 。实验 设 计 及 得 值
＿ ＿ － ｉ
一
保护 研究 所 。
所 以漆 酶从 十九 世纪 末至 今受 到 了极 大 的关 注 。 响 应 面法 是 通 过 一 系列 确 定 性 实验 ， 多项 式 用
函数 来 近似 隐式 极 限 状 态 函数 进 行 数 据 分 析 ， 出 得 回归 模 型和 最佳水 平 后 ， 预测 结果是 否 理想 ， 是生 它 产条 件 ， 低 成 本 ， 高 产 量 、 量 的一 种 有 效 方 降 提 质 法 ， 该法 已经 广泛 地 应 用 于 生 物 发酵 条 件 的优 化
Ａｂｓ ｒ ｃ Ｔｈ ａ ｔｒ ｈ ｔｉｆｕ ｎ ｅ ａ ｃ ｓ ｒ ｄ ｃ ｉｎ ｆｏ Ｐｏｙ ｒ ｓｅｅ ａｎ ． ｗｅ ｅ ｓｕｄｅ ｉｇ ｔａ ｔ ｅ９ ｆｃ ｏ ｓｔ ａ ｎ ｌ ｅ ｃ ｄ ｌｃ ａ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔｏ ｒ ｍ ｌｐｏ ｕ ｌｇ ｓＦｒ ｒ ｔ ｉｄ ｕｓｎ Ｐｌｃ ｅｔＢｕ ｍａ ｅ ｉｎ， ｉ ａ ｋ ｔ— ｒ ｎ ｄ ｓｇ ｔ ｗａ ｆｕ ｔ ａ ｔ ｙ ｓ ｏ ｎｄ ｈ ｔ ｈｅ ｗｅ ｅ ｒ ｍａ ｎ ｕ ｒｔｏ ｆ ｃｏ ｓ ｕｃ ａ Ｃ／Ｎ ｒ ｔｏ， ｔ ｅ ｉ ｎ ｔｉｉｎ ａ ｔ ｒ ｓ ｈ ｓ ａｉ ｈ ｃ ｎｃ ｎ ｒ ｔ ｎ ｏ “ ｏ ｅ ｔａ ｉ ｆＣｕ ｏ ａ ｎｄ ｐＨ ． Ｏｎ ｈ ｔ ｂ ｓｓ， ｅ ｐ ｎ ｅ ｓ ｒａ ｅ ｎ ｌ ｓｓ ｗａ ａ ｏ ｔ ｄ ｏ ｎ ｅ ｔ ａｅ ｈｅ ｔ ａ ａ ｉ ｒ ｓ ｏ ｓ ｕ ｆ ｃ ａ ａｙ ｉ ｓ ｄ ｐ ｅ ｔ ｉ ｖ ｓｉ ｔ ｔ ｇ
ｓｆ ａｅｓｏ ｅ ａ ｔｅｌｃａｅａｔ ｉ ａ ４ ／ （ ／ ｅ ｒ ｏｔ ｉ ｔ ｎ ｈ ｎｔｅＣ Ｎ ｏ ｗ ｒ ｈ ｗ ｄｔ ｔ ｈ ｃｓ ｃｉ ｔ ｗ ｓ ６Ｕ ｍＬ １８ Ｕ ｍＬｂ ｆ ｅ ｐｉ ｚ ｉ ）ｗ ｅ ｈ ／ ｔ ｈ ａ ｖｙ ４ ７ ｏ ｍ ａｏ
中 图 分 类 号 ： Ｓ２ ． ５ Ｔ ０１ ２
Ｏ ｐ ｉ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｕｌｕｒ ｏ ｉｉ ｎｓ ｆ ｒ ｌ ｃ ａ ｅ ｐｒ ｄ ｃ ｉ ｎ ｔｍ ｚ ｔｏ ｆｃ ｔ ｅ ｃ ｎｄ ｔｏ ｏ ａ ｃ ｓ ｏ ｕ ｔｏ
ｆ ｏ ｌｐｏ ｕ ｌｇ ｎｓ Ｆｒ ｒ ｍ Ｐｏｙ ｒ ｓ ｅｅ ａ ．
一
－
一
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ห้องสมุดไป่ตู้
一
在前 期 实 验 的 基 础 上 ， 取 可 能 影 响 产 酶 的 选
７个 因素 ：Ｈ值 （ ） 碳 氮 比 （ 、 ｐ Ａ 、 Ｂ） 接种 量 （ 、 液 Ｃ） 装 量 （ 、 离 子 （ 、 离 子 （ 、 导 剂 （ 进 行 Ｄ） 铜 Ｅ） 镁 Ｆ） 诱 Ｇ）
一 一 一 一
ｒ ｔｏ， ｃ ｎ ｅ ｔａ ｉｎ ｏ 。 ａ Ｈ ｒ １ ａｉ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔｏ ｆＣｕ ｎｄ ｐ ｗｅ ｅ ４： ｏ ｈ ｔｕｎ ｅ ｈ ｒｇ ｎ ｌｃ ｌｕ ｅ ｃ ｎ ｔｏ ｓ ｆｔ ａ ｄ ｒｔ ｅ ｏ ｉ ｉ ａ ｕ ｔ ｒ ｏ ｄｉ ｎ ． ｉ Ｋ ｅ ｒ ｓ Ｐｌｃ ｅｔＢｕ ｍａ ｙ ｗｏ ｄ ａ ｋ ｔ— ｒ ｎ；ｌ ｃ ａ ｅ； ｒ ｓ ｏ ｅ ｓ ｒａ ｅ；ｌ ｖ ｌ ａｃｓ ｅ ｐ ｎｓ ｕ ｆ ｃ ｅ ｅ
２ ／Ｌ，ＫＨ２ ０ ｇ ＰＯ４ ３ ｇ ０． ／Ｌ，Ｍｇ Ｏ４ ・ Ｓ ７Ｈ ２ ０ ０． ５ ｇ １ ／Ｌ，
Ｖ ，． １ｇ Ｌ 用蒸馏 水 配制 ，Ｈ值 自然 。 Ｂ ０ ０ ／ ， ｐ
一
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一
一
＿ ＿ ＿
一
１
１ ２ 实验 方 法 ．
１ ２ １ 发 酵培 养 ．．
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一
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Ｔａ １ Ｐｌ ｃ ｔ－ ｂ． ａ ｋｅ ｔＢｕｒ ａ ｘ ｒｍ ｅ ａ ｓｇ ｎｄ ｒ ｓ ｎｓ ａ ｕｅ ｆＮ ＝ １ ｍ ｎ ｅ ｐｅ ｉ ｎｔ ｌｄｅ ｉ ｎ ａ ｅ ｐｏ ｅ ｖ ｌ ｓ ｏ ２
，
０ ｍｏ／Ｌ ａ ｄ ５． ｅ ｐ ｃｉ ｅｙ， ｗｈ ｃ ｓ２ ５ ｏｄ ．１ ｍ ｌ ｎ ５ ｒ ｓ ｅ ｔｖ ｌ ｉ ｈ ｗａ ． ｆｌ ｓ
漆 酶 有 广 泛 的底 物 专 一 性 和 显 著 的 非 特 异 性 ¨ 。漆 酶 可 以 催 化 多 种 耦 合 物 质 氧 化 还 原 成 水 。 。近 年研 究 表 明 ， 酶 还 可 用 于 生 物 传 感 器 漆 的制 造 和生 物修 复 ， 免疫 探 测 器 、 物 等 ， 如 药
黄 多孔 菌产 漆 酶 最佳 培 养 条 件 的优 化
徐 雪 霏 ，毕 云枫 ，蒋 海 芹 ，沈 明浩
（ 林 农 业 大 学 食 品科 学 与 工 程 学 院 ，吉 林 长 春 吉 １０ １ ） ３ １８
摘 要 采 用 Ｐａｋｔ Ｂ ｒ ａ 设 计 法 ， 影 响 黄 多 孔 菌 生 产 漆 酶 的 ９个 因 素 进 行 了 筛 选 。结 果 表 明 ， 响 该 菌 产 ｌ ｅｔ ｕｍ ｎ ｃ — 对 影 生 漆 酶 的 主 要 营 养 因 素 为 碳 氮 比 、 离 子 浓 度 和 ｐ 值 。 在 此 基 础 上 ， 用 响 应 面 法 对 其 中 ３个 显 著 因 子 的 最 佳 水 铜 Ｈ 采 平 范 围进 行 研 究 ， 用 统 计 软 件 Ｄ ｓ ｎＥ ｐ ｒ进 行 二 次 回 归 分 析 。 当 碳 氮 比 、 离 子 浓 度 和 ｐ 值 分 别 为 ４ １ 利 ｅｉ －ｘ ｅ ｇ ｔ 铜 Ｈ ：、
｝ ｌ
酵培养 基 ， 相 同条件 下振 荡培 养 。 在
１ ２ ２ 粗 酶 液 制 备 ．．
一
Ｎ＝１ ２的 Ｐａｋ ｔＢ ｒ ａ ｌｃｅｔ ｕｍ ｎ实 验 。７个 因素 分 别 对 应 —
取培 养 ７～１ ０ ｄ的 发 酵 液 ， ０ ／ ｉ １ ０ ０ ｒｍ ｎ离 心 １ ｎ 上 清液 即为粗 酶液 ， ０ｍｉ， 冰箱４℃保存 备用 。
研究 中 。
斜 面 种 子 培 养 基 ： 铃 薯 ２ ０ｇ Ｌ， 萄 糖 马 ０ ／ 葡
２ ／Ｌ，ＫＨ ２ ０ｇ ＰＯ４０． ／Ｌ ，Ｍ ｇ ３ｇ ＳＯ４ ・７Ｈ２ ０ ５ ／Ｌ， Ｏ ．１ ｇ
本文 采用 响应 面分 析法 对 黄多孔 菌 产漆 酶 的培
收稿 日期 ：０ １ ０ ２ ２ １ — ４— ６ 修 回 日期 ：０ １ ０ ２ ２ １ — ８— １
ＸＵ Ｘｕ ｆ ｉ ＩＹｕ ｆ ｎ ，ＪＡＮＧ Ｈａｑ ｎ，Ｓ ｅｅ ，Ｂ ｎ ｅ ｇ Ｉ ｉｉ ＨＥＮ Ｍｉ ｇ ａ ｎｈｏ （ ｏｌ ｅｏ ｏ ｄＳ ｉ ｃ ａ ｄＥ ｇｎ ｅ ｎ ， ｉ ｎＡ ｒ ｕｔｒ Ｕ ｉ ｒ ｔ ，Ｃ ａ ｇｈ ｎ Ｊｌ １０ １ ， ｈｎ ） Ｃ ｌｇ ｅ ｆＦ ｏ ｃ ｎｅ ｎ ｎ ｉ ｒ ｇ Ｊｌ ｇｉ ｌ ｅ ｎｖ ｓｙ ｈ ｎ ｃ ｕ ， ｉ ｎ ３ １ ８ Ｃ ｉａ ｅ ｅｉ ｉ ｃ ｕ ｅｉ ｉ
２ 结 果 与 分 析
２ １ Ｐａ ｋ ｔ Ｂ ｒ ｎ设 计 筛 选 影 响 因子 ． ｌｃ ｅｔ ｕ ｍａ －
一 一
＿ ＿ － ＿ －
１０ｍ ５ Ｌ三 角 瓶 中装 液 体 培 养 基 ５ Ｌ 接 人 ０ｍ ，
２～３ 日龄 平 板 菌 种 ３片 （０ ｍ ，３ ／ ｎ ３ １ ｍ） １０ ｒｍｉ、 ２℃ 条 件下 恒温 振 荡 培 养 ， 后 取 ８ 的 种 子 液 接 人 发 然 ％
Ｖ ． １ｇ Ｌ 琼 脂 ２ ／ ， 蒸 馏 水 配 制 ， Ｈ 值 Ｂ ０ Ｏ ／ ， ０ｇ Ｌ 用 ｐ
基 金 项 目 ： 林 省 科 技 厅 课 题 （０ ９ ５ ３ 吉 ２ ００ ５ ）
作 者 简 介 ： 雪 霏 （ ９ ６ ） 女 ， 士 生 。主 要 研 究 方 向 为 食 品 安 全 。沈 明 浩 ， 信 作 者 ， － ａ ：ｈ ｎ ｈ ０ ３ ｙ ｈ ｏ ｅｍ． ｎ 徐 １８ 一 ， 硕 通 Ｅ ｍ ｉ ｓｅ ｍ ２ ０ ＠ ａ ｏ ． ｏ ｃ 。 ｌ
一
一
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ｌ
根据 漆酶 活力测 定 方法 ， ０ １ｍｏ Ｌ ｐ 取 ． ｌ Ｈ值 为 ／
结 果 见表 １ 各 因素 主效应 分析 见表 ２ ， 。
表 １ Ｎ ＝ ２的 Ｐ ａ ｋ ｔ Ｂ ｒ ｎ实 验 设 计 及 响 应 值 １ ｌｃ ｅｔ ｕ ｍａ －
一 一 一 一
ｏ ｔｍａ ｅ ｅ ｓｏ ｈｅ３ ｍ ａｎ ｆ ｃｏ ｓ Ｔｈ ｅ ｏ ｄ ｒ ｇｅ ｓｏ ｎ ｌ ｓｓｏ ｈ ｉ ｄ ｎ ｓ ｕ ｉ ｇ Ｄｅ ｉｎ— ｐ ｒ ｐ ｉ ｌｌｖ ｌ ｆｔ ｉ ａ ｔ ｒ ． ｅ ｓ ｃ ｎ ｅ ｒ ｓ ｉｎ ａ ａｙ ｉ ｆｔ ｅ ｆｎ ｉ ｇ ｓｎ ｓｇ Ｅｘ ｅ ｔ