平菇液体菌种培养条件的研究

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菌 ,2007 ,26 (5 ):32-33. [2] 温海祥,张景文,肖洪东,等. 液体摇瓶培养平菇菌种的生理与应
用 研 究 [J]. 食 用 菌 ,1998 ,20 (1 ):20-21. [3] 胡贵权. 食用菌液体菌种的制作及应用[J].食用菌,1998,20(1):17-18.
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其次是配方⑤,配方②,配方①,配方④最差。综合菌球密度和
菌球直径指标,最佳培养基为配方③。
表 1 不同培养基菌丝生长情况
培养基 平均干重/(g·100 mL-1) 平均密度/(个·mL-1) 平均直径/mm

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北 虫 草[Cordyceps militaris (L. )Link]与 冬 虫 夏 草 (Cordyceps sinensis Berk.Sacc)同 属 异 种 ,均 系 我 国 传 统 滋 补 强 身 名 贵 药 材, 特 别 是 虫 草 素 (Cordycepin )即 3'- 脱 氧 腺 苷 抗 肿 瘤 的药用价值受到广泛的关注。 北虫草有效成分的种类及含量 与后者接近,而人工培养又较后者成功。 因此, 近年来北虫草 人工栽培尤为活跃,由于虫草菌种在所有真菌中变异退化最 快,所以对菌种的选育和生产面临着巨大的挑战。 现有文献 报道虫草菌种的生产主要集中摇瓶发酵和发酵罐发酵两种, 有关利用细胞悬浮培养瓶生产北虫草菌种的方法尚未见报 道。 试验在利用自然条件的基础上, 重点研究了利用细胞悬 浮培养瓶生产北虫草菌种的工艺过程, 结果表明该技术方法 对北虫草栽培种植户具有明显的实用价值。

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2.2 正 交 试 验 试 验 中 影 响 菌 丝 生 长 的 因 素 主 要 有 培 养 基
的装量、培养温度、摇床转速、菌种接种量,将这四因素设置
3 水平,以 L9(34)作正交 试 验 对 培 养 条 件 进 行 了 调 配 筛 选 ,见
注:耳片大小、厚度系随机取样 50 片,用游标卡尺进行测量的平 均值。
结果表明:桂中、桂南两地域的中试栽培所表现的各项 指标比较优良及稳定;中试栽培的生物学转化率还超过小试 栽培 4%。
3小结
通过分离和驯化,获得 1 株较适应于桑枝秆人工代料栽 培 的 优 良 云 耳 菌 株 — — — Au-6-⑧, 经 过 小 试 栽 培 、 中 试 栽 培 试 验表明,该菌株的各项栽培性能指标及生物学转化率均优于 传统的杂木屑配方(评比试验结果);正常条件下,桂中、桂南 两地域中试的生物学转化率没有明显差别, 分别达到 119.34%和 120.36%。 综合结果分析,该菌株完全可以在桑蚕 区进行推广应用。 为此,根据该菌株分离源的属地,特将 Au6-⑧菌株暂定名为“百云 6 号”。
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1.5819
由表 3 可得: 对高邮 918 菌丝生长影响力因素 D>A>C> B,即 接 种 量 对 菌 丝 生 长 影 响 最 大 ,装 量 次 之 ,温 度 影 响 最 小 ; 最 佳 组 合 为 A3B3C2D3,即 装 量 150 mL,温 度 30℃,转 速 150 r/ min,接种量 15%。
食用菌
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为出发菌株的实际生产效果及其性能的稳定性,我们选择桂 中 、桂 南 两 个 地 域 进 行 扩 大 规 模 的 栽 培 试 验 。 2007 年 8 月 19日 制 菌 包 (17 cm×33 cm 菌 袋 ),2007 年 10 月 初 开 口 催 耳 芽,2007 年 10 月 下 旬 采 收 第 1 潮 ,2007 年 12 月 上 旬 采 收 结 束。 结果详见表 3。
王洪军 1 吕真麟 2 张 锐 3 李春燕 4
(1 沈阳军区联勤部疾病预防控制中心,沈阳 110034; 2 吉林省天达监理有限公司,长春 130062;
3 沈阳工业安装工程股份有限公司南京分公司, 南京 210029; 4 沈阳中天生物工程有限公司,沈阳 110016)
摘 要 研究一种培养北虫草菌种的简单方法。 方法: 利用细 胞悬浮培养瓶直接放大发酵法。 结果: 在 18 ~22℃, 搅拌速度 110 r/min,湿度 45%~60%的暗室中培养 96 h 可获 得 清 澈 透 明 , 菌球小均匀,约占 70%的液体菌种。 结论:工艺方法具有简单方 便、成本低、不易污染、环境可以控制,能达到栽培农户生产高 质量菌种的目的。 关键词 北虫草菌种 细胞悬浮培养瓶 工艺方法 文章编号 1000-8357(2008)06-0022-02
计进行。
1.3.4 测 定 方 法 菌 丝 干 重 测 定 : ① 取 全 部 的 发 酵 液 在
3 000 r/min 条件下离心 10 min,倒去上清液,菌丝体于 60~80℃
烘干至恒重,称量。 ②菌球密度测定:在培养好的液体中吸取
1 mL 摊匀于培养皿中,直观计数。 ⑤菌球直径测定:培养结束
表2、表 3。
表 2 正交试验因素水平
水平
A
装 量 /mL
1
100
2
125
3
150
B 温 度 /℃
20 25 30
因素 C
转 速 / (r·min-1) 120 150 180
D 接 种 量 /%
5 10 15
表 3 正交试验结果
因素
处理 A
B
C
装量/mL 温度/℃ 转速/(r·min-1)
1
1
1
1
后,随机选取 15 个 菌 球 ,排 成 一 排 ,皿 下 衬 坐 标 纸 测 量 15 个
菌球直径,然后计算单个菌球平均直径。
1.3.5 正交试验 根据培养基筛选得到的最佳培养基做正交
收 稿 日 期 :2008-02-07 基 金 项 目 :山 西 省 科 技 攻 关 项 目 (2006031037 )。
1.3.1 培养基配制 固体培养基按常规方法制备。 液体培养
基麸皮煮 20 min,玉米粉煮 5 min,4 层纱布过滤,得滤液 配 加
其它药品,1.08×105 Pa~1.4×105 Pa 压力灭菌 40 min。
1.3.2 培养基筛选 500 mL 三角瓶装各配方培养基 100 mL,
重复 3 次。 每瓶接种量为 0.5 cm2 斜面菌种 3 块,在(24±1)℃,
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试验,得出最佳培养条件。 因素主要有培养基的装量、培养温 度、摇床转速、菌种接种量。
2 结果与分析
利用细胞悬浮培养瓶培养 北虫草菌种
2.1 培养基筛选 由表 1 可见培养基配方③菌丝干重最重,
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平菇液体菌种培养条件的研究
王 芳 张玉萍 孟丽君
(山西省生物研究所,太原 030006)
摘 要 通过对平菇高邮 918 菌 株 进 行 培 养 基 筛 选 ,筛 选 出 最 佳 培 养 基 为 玉 米 粉 6%,KH2PO4 0.05%,MgSO4 0.05%,蔗 糖 1%, VB1 10 mg/L,pH 自然。 并 对 发 酵 条 件 进 行 正 交 试 验 ,得 出 最 佳 组合装量 150 mL,温度 30℃,转速 150 r/min,接种量 15%。 关键词 平菇 液体菌种 培养条件 文章编号 1000-8357(2008)06-0021-01
食用菌液体菌种具有生产周期短、菌龄一致、生命力旺 盛、接种方便、用种量少、接种后恢复生长迅速等优点,适宜作 为配套技术应用于工厂化生产。
平菇是我地栽培量最大的食用菌,平菇栽培是否稳产高产 直接影响着菇农的经济效益和积极性。 为此,对我地栽培中常 用的 1 个平菇菌株高邮 918 的液体菌种培养条件进行试验。
图 1 桂中大棚人工代料栽培 图 2 桂南室内床架人工代料栽培
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供金顶榆黄蘑、黄绿盖元蘑、丰收木耳菌 ①金顶黄菌株: 是长白山特产,色艳、形美、味鲜。 原料广,生产工艺简单,全国 大部分地区四季可栽。 ②黄绿盖元蘑:东北林区特产,无柄、迭 瓦状、盖特厚,低温型。 生产工艺及原料同栽培黑木耳。 ③丰收 牌黑木耳:该菌株每年由当地众多种植户推荐,现场优中选优 分 离 获 得 , 不 断 推 陈 出 新 。 上 述 菌 种 价 格 : 邮 购 2 支 30 元 , 递 增 1 支加 6 元,多购预订更优惠。 地址:吉林蛟河市白石山林 业 局 联 系 人 : 杨 儒 钦 邮 编 :132503 电 话 :0432 -7053818 13039174529 15105476453
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K1 5.0980 6.0135
5.1230
K2 6.0526 5.2572
6.2000
K3 6.2119 6.0918
6.0395
R 1.1139 0.8346
1.077
D
菌丝干重 /(g·100 mL-1)
接 种 量 /%
1
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表 3 不同区域中试栽培结果 试验 出耳 平均每袋 采收 抗杂 耳片 耳片大 耳片厚 耳片 鲜耳总 生物学 区域 袋数 干料重/kg 潮次 能力 颜色 小/cm 度/mm 展开性 重/kg 效率/% 桂中 5 000 0.305 5 较强 棕褐 未测 未测 正常 1 820 119.34 桂南 3 130 0.305 5 较强 棕褐 6.1×4.1 1.64 正常 1 149 120.36
1 材料与方法
1.1 供试菌株 高邮 918, 由 江 苏 高 邮 食 用 菌 研 究 所 提 供 。
母种为 PDA 培养基。
1.2 液 体 培 养 基 ① 玉 米 粉 3% ,KH2PO4 0.3% ,MgSO4 0.15%, 蔗 糖 1%,pH 自 然 ; ②玉 米 粉 5% ,KH2PO4 0.05% , MgSO4 0.05%,蔗 糖 1%,VB110 mg/L,pH 自 然 ;③玉 米 粉 6%, KH2PO4 0.05%,MgSO4 0.05%,蔗糖 1%,VB1 10 mg/L,pH 自然; ④玉 米 粉 1%,酵 母 膏 0.5%,豆 饼 粉 2%,KH2PO4 0.1%,CaCO3 0.2%,pH 自 然 ;⑤玉 米 粉 6%,麸 皮 2%,KH2PO4 0.1%,MgSO4 0.05%,VB1 10 mg/L,pH 自然。 1.3 试验方法
(120±10)r/min 条 件 下 培 养 5 d,测 量 菌 丝 量 、菌 球 密 度 、菌 球
大小筛选最佳培养基。
1.3.3 菌种培养 以筛选的最佳培养基为培养基。 一级摇瓶
培 养 500 mL 三 角 瓶 装 100 mL 培 养 基 ,培 养 同 1.3.2;二 级 摇
瓶培养 500 mL 三 角 瓶 装 培 养 基 以 及 培 养 条 件 按 正 交 试 验 设
1 材料与方法
1.1 供 试 材 料 ①培 养 基 原 料 :虫 草 培 养 基 ;葡 萄 糖 ,蛋 白 胨,磷酸二氢钾,硫酸镁,柠檬酸氨,琼脂粉购自沈阳化学试 剂公司。 去离子水为自行处理制备。 ②供试菌株: 北虫草 (Cordyceps militaris)菌 种 由 沈 阳 中 天 生 物 工 程 有 限 公 司 李 春 燕教授惠增,菌种药号:国家食品药品监督管理局审批的人 工 北 虫 草 药 材 研 究 (批 件 号 2003L01393、 药 物 临 床 研 究 号 2003L01394)。③仪器: 26504-1L 细胞悬浮培养瓶:(CORNIG 股份有限公司,挪威),78-1 型磁力加热搅拌器:(杭州仪表电 机厂,中国), H2-9211K 恒温震荡器:(太仓市科教器材厂,中 国),LRH-250-G 生化培养箱:(广东医疗机械厂,中国),SWCJ-2FD 超 净 工 作 台 :(江 苏 苏 州 安 泰 空 气 技 术 有 限 公 司 ,中 国)。 1.2 试验方法 1.2.1 培养基的配制与灭菌 ①菌种分离 : 平板马铃薯 、葡
广西除桑枝秆外,尚有丰富的甘蔗渣(叶)、木薯秆、玉米 秆等秸秆类原料,该菌株对这些原料的适应性如何,有待进 一步研究。
参考文献
[1] 陈芝兰,何建清,张涪 平 ,等.金 耳 分 离 驯 化 试 验 简 报[J].食 用 菌 , 2005(6):14-15.
[2] 黄建成,池美香 ,王 茂 珠 ,等. 绣 球 菌 驯 化 栽 培 研 究[J]. 江 西 农 业 学 报 ,2007 ,19 (8 ):120-122.
3结论
试验结果表明:平菇高邮 918 菌株液体菌种最佳培养基为 玉米粉 6%,KH2PO4 0.05%,MgSO4 0.05%,蔗糖 1%,VB1 10 mg/L, pH 自然; 摇床发酵培养条件最佳组合为装量 150 mL, 温 度 30℃,转速 150 r/min,接种量 15%。
参考文献 [1] 张 玉 林 ,谭 永 忠.平 菇 液 体 菌 种 栽 培 菌 株 筛 选 试 验[J]. 中 国 食 用
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