亲和色谱法

（3）包合配合物配位体 包合配合物配位体是由主体分子与客体分子 间的特殊亲和作用而形成的。常用的主体分子为 β-环糊精、冠醚等。
（4）生物特效配位体 利用生物活性物质间存在的可逆的、特效的作 用进行分离。 如：氨基酸、肽、抗体、抗原、蛋白质、核苷 和核苷酸，以及微生物等多种生物小分子或大分子。
（5）电荷转移配体
手性基酸、多肽、生物酶、 纤维细胞生成因子、凝固因子 、脂蛋白及多种手性药物
氨基酸、蛋白质、核酸、核苷 酸
电荷转移 亲和色谱法
共价 亲和色谱法
含硫多肽和蛋白质、含ຫໍສະໝຸດ Baidu多氯 核苷酸
三、亲和色谱的固定相 亲和色谱的固定相由基体、间隔臂和配位体三部分组成。分别 介绍如下： 1 基体 亲和色谱的基体材料由天然有机高聚物、合成有机高聚物 和无机载体材料。 基体材料具备的条件（有一定的机械强度和刚性；稳定； 表面具有一定活性的官能团） A.天然有机高聚物：葡聚酸、琼脂糖 B.合成有机高聚酸：聚丙烯酰胺及衍生物、甲基丙烯酸脂共 聚物、苯乙烯一二乙烯基苯高聚物 C.无机载体材料
（6）共价配位体 主要用于含硫蛋白质分离。
三、亲和色谱的流动相 需使用pH值接近中性稀缓冲溶液，以保持其 生物活性。
亲和色谱使用的流动相：由磷酸盐、硼酸盐、乙酸 盐、柠檬酸盐具有不同pH值的缓冲溶液体系，有机碱三 羟甲基甲烷与盐酸顺丁烯二酸构成的缓冲溶液体系也有 较多应用。 此外，在生物大分子亲和色谱中，还广泛使用生物 研究中常用的非离子缓冲物。 如：N-(2-) 乙基-N-（2-磺化乙基）-哌嗪 （HEPES）、N,N,N',N'-四乙基乙二胺（TEEN）。
方法名称 生物特效 亲和色谱法
分离机理 利用可形成锁匙结构的不同 生物分子间的生物特效识别功能
应用对象 生物活性物质，包括抗体、抗 原、病毒、细胞碎片
染料配位 亲和色谱法
定位金属离子 亲和色谱法
利用生物分子与三嗪和三苯甲烷染 料间的特小型相互亲和作用
利用生物分子与金属-有机物螯合物 之间的特效性相互亲和作用
2 间隔臂 在亲和色谱固定相中，需通过间隔臂将配位体连 接在基体上，由于间隔臂占据一定的机动空间。当配 位体与被测定的生物分子（尤其是生物大分子）产生 亲和作用时，有利于克服空间阻碍作用。 通式：
NH2 (CH2 )n R
R可为羧基、胺基或配位体自身
3 配位体 （1）染料配位体 大多是三嗪染料，主要用于蛋白质的分离与纯 化。 （2）定位金属离子配位体 它是将具有鳌合作用的有机官能团键合在间隔 壁的机体上，然后与Cu2+ ， Ni2+ ， Fe2+ ， Fe3+ 等金属离子生成稳定鳌合物，利用螯合物中的定 位金属离子与生物分子的特效亲和作用实现生物 分子的分离与纯化。
亲和色谱法（Affinity Chromatography）
亲和色谱法是一种利用生物大分子间存 在的专一特殊亲和力进行分离、分析和纯 化的色谱方法。
• 亲和色谱法优点： 可对天然产物活性物质进行高特效的分离和纯 化：可从大量样品基体中分离，纯化出所希望获 得的少量生物活性物质。
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应用： 20世纪70年代末期，由于新型高效固定相基体 的使用，发展了高亲和色谱技术。目前，该方法 在生物化学、分子生物学、生物工程、基因工程 中广泛使用（生物活性物质的常规分析），而且 显示出越来越重要的使用。
核碱、核苷、核苷酸、核酸、 核酸键合的蛋白质、生物酶 （脱氢酶、脂酶、肽酶等）
肽、蛋白质、核酸、生物酶
包含配合物 亲和色谱法
利用生物分子与环糊精（或冠醚、 环芳径）及其衍生之间的持效性包 含作用
利用生物分子与卟啉衍生物之间的 电子给予和电子接受基团间的特殊 静电吸引亲和作用 利用含氨基酸的生物分子与含二硫 健配位体（2-吡啶二硫化物）间存 在的特效亲和作用
• 在载体（无机填料）上键合间隔臂（如环 氧，联氨等），再连接上配基（酶，抗原 等）。与和配基之间有亲和力的生物大分 子作用，对其进行分离。
一 、分离原理（生成锁匙结构络合物） 亲和色谱固定相上键合的配体与被分离的生物活 性分子间的相互作用，可用锁匙结构合物的生成来 表示：
二、 亲和色谱法的分类