快速高效偶联亲和层析介质试剂盒试用装说明书

快速高效偶联亲和层析介质试剂盒说明书

【产品名称】

通用名称：CDI预活化琼脂糖凝胶4B试剂盒。

商品名称：快速高效偶联试剂盒。

【包装规格】

20mL活化柱+500mL缓冲液/盒，附送亲和层析用空柱一支。

【预期用途】

快速高效偶联试剂盒适用于亲和层析填料的快速制备以及固相吸附、固定化酶等用途。

【主要组成成份】

●预活化琼脂糖凝胶4B

●缓冲液

【原理】

本试剂盒系用优质琼脂糖凝胶4B活化后存放于保护液中和适合的偶联缓冲液制成，用活性咪唑碳酸酯基团偶联需要的配体。

使用时，保护液被洗去后就可使欲偶联的配体的氨基和活性咪唑碳酸酯反应，脱去咪唑基，使得配体的氨基通过共价键牢固的链接在基质上，即可方便得到高偶联效率的亲和层析填料。

【存储条件和有效期】

存储条件：原包装应储存于4-8 C。密封保存在阴凉干燥处切忌冷冻。有效期：一年。

【适用仪器】

本产品无需特殊仪器辅助使用，只需要在操作时使用抽滤装置帮助抽去洗涤液，以免洗涤时间过长造成偶联效果不理想。

附送的亲和层析空柱可安装适合的接口用于自动纯化仪。

【配体要求】

配体溶液的质量至关重要。配体需溶解于偶联缓冲液中并使得浓度大于15mg/mL，并且浓度越大，偶联效果越好，如已经溶解在其他缓冲液中，可用偶联缓冲液透析平衡。

【偶联方法】

方法一：

1、预先准备好溶解在偶联缓冲液中的配体（可用直接溶解或透析

方法制备），浓度>15mg/ml或者更高，浓度越高偶联效果越好。

2、将活化琼脂糖摇匀，倒入抽滤漏斗，加5倍体积的去离子水，抽气至快干时拔掉抽气管，注意不可抽干，此步速度宜快。

3、用配体溶液悬浮抽滤漏斗里的琼脂糖固体，摇床缓慢振荡（不可使用磁力搅拌器），室温3小时或4摄氏度过夜，然后洗净即可。洗出来的配体可回收使用。

此方法适用于比较昂贵的配体。

方法二：

1、用干燥枪头吸去保护剂。制备配体在溶液B中的溶液（可用直接溶解或透析方法制备），浓度>15mg/ml或者更高，浓度越高偶联效果越好。

2、用5倍以上体积配体溶液悬浮抽滤漏斗里的琼脂糖固体，4度摇床缓慢振荡（不可使用磁力搅拌器），过夜后用适当缓冲液洗净即可。洗出来的配体可回收使用。

此方法适用于比较廉价的配体。

注意：

如果配体不耐高pH条件，可以用1M盐酸调节缓冲液至适合pH。

【装柱】

塑料层析柱

1、将层析柱固定，封闭层析柱下端出口，向柱内充入去离子水，排开层析柱内空气，先将垫片完全浸没于水面下方，在保持水平的状态下，小心推向底部，避免垫片下方滞留气泡。

2、先将介质混匀，打开层析柱下端出口，排出柱中去离子水；在液面低至距垫片1~1.5cm高度时封闭下端出口，用导流棒沿内壁倒入介质或移液枪吸取介质，将介质加入到层析柱中；静置，待介质自

然沉降。

3、从上端管口将另一垫片缓慢推至介质沉降平面，使介质表面保持水平状态，注意避免垫片与介质接触面滞留气泡。

4、若使用一段时间后，如果层析柱流速减慢，可按2）、3）所述步骤重新装柱。

5、注意整个操作过程无气泡。

玻璃层析柱

1、将层析柱洗净后固定；向柱中加入去离子水，排开柱子中的空气，纯水排尽以前，关闭柱子出口，在柱内保留一定高度的去离子水。

2、先将介质混匀，用导流棒沿内壁倒入介质或移液枪吸取介质，将介质加入到层析柱中；静置，待介质自然沉降。

3、从上端管口将转杆出液端缓慢推至介质沉降平面，使介质表面保持水平状态，注意避免转换杆与介质接触面间滞留气泡。

4、在使用一段时间后，如果流速减慢，可先卸下上转换杆，将介质倒出，再取出下转换接头中滤网，清洗或更换后重新装柱。

5、注意整个操作过程无气泡。

【产品性能指标】

本试剂盒具有快速、简便、高效等优点，是一种迅速偶联配体的方法，偶联效率最高可达到50mg/mL(IgG)，活化基密度并且没有引入电荷，减少了非特异性吸附，共价化合牢固，不会脱落，特别适用于不耐盐的亲和系统。独特的免封闭设计，使得合成更高效，回收配体更容易。

图：偶联配体后纯化效果

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1：发酵液2：流窜液3：洗脱液

【注意事项】

1. 抽滤的时候不能抽干，以免影响效果。

2. 活化琼脂糖倒出来后请尽量一次性使用，不要受潮。

3. 操作越快偶联效率越高。

【参考文献】

1．Mallia A K,Hernanson GT,Krohn R I,et al. Preparation and use of a boronic acid affinity support for separation and quantitation of glysocylated hemoglobins.Anal Lett,1981,14(B8)：649-661 2．Kuhn N.Activation of molecular oxygen by hemin complexes. Prikl Biokhim Mikrobiol,1982,18(4):489-98

【生产企业】

企业名称：柳州市智萃生物试剂研制中心

企业地址：柳州市雅儒路东四巷182号2楼

邮政编码：545001

销售热线：136********

技术支持：151********