酶与酶工程复习

《酶与酶工程》复习思考题

基本概念：自杀底物酶的化学修饰人工酶人工模拟酶抗体酶

进化酶杂合酶工具酶亲本酶酶的固定化（共价结合包埋法吸附法）酶制剂酶分析指示酶酶活力单位酶比活酶的稳定性（半衰期聚合作用）同裂酶酶制剂填充物活化载体合理与非合理设计易错PCR 自引发PCR 有性进化外显子改组 DNA洗牌化学筛选半抗原功能单元蛋白融合底物类似物“反应性”免疫体外定向进化化学酶工程生物酶工程

1.人工酶与人工模拟酶有什么区别？通过进化酶工程得到一种自然

界不存在的酶分子，此酶是人工模拟酶吗？

2. 微生物中酶合成的诱导或阻遏是什么？这对酶制剂的生产有关系吗？

3. 从分子水平论述酶活力温度动力学。

4.研究自杀底物有什么意义？

5.为什么通过酶可以定性或定量一些非酶物质（举例说明）？

6. 同工酶与同裂酶有区别吗？

7. 如何进行同工酶的检测？为什么说同工酶分析具有较大的价值？

8. 如何表达酶的质量？科研中为什么说酶活力的表达较灵活？

9. 酶制剂上标的活力单位能说明什么意思？

10. 为什么说酶制剂生产中产品的活力分析是指导生产的最重要的指标之一？

11. 酶活力分析时应特别注意什么？

12. 酶含量的测定有何意义？

13. 如何使酶制剂产品质量更稳定？

14. 利用酶法分析底物含量的原理是什么？底物含量很低时也能测定吗？

15. 利用酶为什么能进行物质的定性分析？

16. 利用微生物进行酶制剂的生产有何意义？

17. 为什么说菌种的筛选对酶制剂生产极为重要？

18. 菌种的改良可能在哪些方面会对酶制剂的生产产生影响？

19. 对于酶制剂生产，发酵过程的质量应如何评价？

20. 请根据工业化酶制剂生产的特点谈谈质量管理。

21. 酶制剂中的填充物一般有何特性？添加填充物有意义吗？

22. 试述酶制剂生产发展的方向。

23. 试述酶制剂生产的一般工艺过程及其原理。

24. 药用酶在应用上遇到的最大问题是什么？请谈谈克服此问题的理论策略。

25. 酶固定化有何意义？

26. 酶固定化应遵循的原则是什么？

27. 试说明化学结合法固定酶的原理。

28. 比较固定酶的不同方法的特点。

29. 如何评价载体活化的效果？

30. 包埋法固定酶或细胞有何特点？

31. 如何评价酶固定化方法的效果？

32. 固定化后酶主要会发生哪些性质的改变？为什么？

33. 试述固定化后对酶稳定性的影响。

34. 酶固定偶联率如何测定？此指标有何意义？

35. 举例说明酶固定化的应用。

36. 化学酶工程包含哪些主要内容？

37. 酶的化学修饰有何意义？

38. 对酶分子的化学修饰一般有哪些类型？

39. 人工模拟酶研究的理论基础和特点是什么？

40. 酶分子的体外定向进化是什么？

41. 为什么说经过漫长岁月进化的酶分子还具有进化的潜力？

42. 在对酶分子进行改造或创造时，所采用的合理和非合理设计有何不同？

43. 进化酶工程主要采用哪些实验方法？为什么说筛选方法至关重要？

44. 浅谈进化酶研究的生物学意义。

45. 杂合酶与进化酶有何异同？

46. 抗体酶有何特点？

47. 为什么会有抗体酶出现？把抗体作为进化酶研究的亲本酶有意义吗？

48. 蛋白质定向进化的基本策略是什么？

49. 化学酶工程与生物酶工程的异同点主要是什么？

50. 如何测定酶的稳定性？

51. 何为DNA洗牌?

52. 有性进化与无性进化的区别是什么？

举例：

1.进化酶与杂合酶有何异同？（要点：以天然或人为获得的酶为母

本（亲本酶）出发，通过基因突变、重组等非合理设计的手段构建人工突变酶库，从中筛选出某些具期望特性的目标酶，这些酶为进化酶。此过程在极短时间内以模拟自然界的演变促使酶的进化。操作上以非合理设计方法如易错PCR等为主。利用生物技术将来自不同酶（蛋白质）分子的结构单元（功能基团、功能结构域等）进行重新组合或交换，制备出具新性质的杂合酶分子，此酶为杂合酶。此过程以已有的知识为基础，按照生物学原理进行合理设计，如利用外显子重组的基因操作等，进行目标酶的制备。

相对来说，进化酶工程易操作，易出成果，但工作量大。而杂合酶工程工作量要少些，但不易操作。成果难出，但有成果一般为较大的成果。）

2．试述固定化后对酶稳定性的影响及其原因。

（要点：酶固定化后一般热稳定性提高(增加耐热性)；对有机试剂、一些变性剂的抗逆性（稳定性）提高；在储存或一定的条件下与非固定化酶相比，稳定性有变化。总的来说，一般在固定化后，酶的

稳定性增加。

稳定性提高的原因可能有：固定化后酶分子能与载体多点连接, 可使酶分子不易伸展变形；酶活力的缓慢释放使寿命延长；抑制酶的自降解；对环境敏感性下降从而显示稳定性增加等。）