病毒性心肌炎小鼠模型(含腹腔注射)

雄性BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型

1.CVB3的繁殖和扩增

将100ul CVB3原液加入约80%满的Hela细胞培养瓶中，48h后收集培养（此时细胞几乎全部死亡，培养液黄而清亮）。

将收集到的上清反复冻融（-70度冰箱放置15min，室温放置30min，如此反复三次），3000转/分离心20分钟，去沉渣，留上清，分装于500ul EP管中，200ul/管，此即新制备的病毒原液。

2.CVB3 TCID50测定

将CVB3病毒液以10倍梯度稀释法稀释成10-1-10-10，将Hela细胞以103/100 l/孔加入96孔培养板中，于37℃培养至约80%满；将10倍梯度稀释的CVB3，以30ul/孔接种Hela 细胞，每稀释度5孔；37℃孵育1h使病毒吸附；将病毒吸弃，以PBS洗3次，然后加入100ul/孔2% NBS 1640维持液；37℃培养，逐日观察细胞病变情况，连续观察5天，细胞病变达50%以上计为阳性。按Reed-Muench方法计算CVB3的TCID50。TCID50＝Log(>50%病变阳性率稀释度)＋距离比。距离比＝(>50%病变阳性率-50)/ (>50%病变阳性率-<50%病变阳性率)，最后换算为TCID50/100 ul。

3.将病毒稀释至适当滴度腹腔注射感染小鼠

以103 TCID50/100ul腹腔注射感染雄性BALB/c小鼠，4-8周龄，此年龄段小鼠CVB3

感染的反应最为适当。

左手提起并固定小鼠，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺，针头刺入皮肤后进针，使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失，有落空感，固定针头，保持针尖不动，注射病毒。

4.鉴定

4.1小鼠外观和心脏外观

小鼠一般第3天开始精神萎靡，活动减少，毛粗糙，体温下降，体重从感染后第3天一般开始下降，随后持续下降；第7天心脏晦暗，纹理不清，心脏表面出现白色点状条索状病变。

4.2病理学

HE染色，感染第7天，心肌组织有大量的炎性细胞浸润，可广泛弥漫，也可呈局灶性，并可有坏死灶。