病原体分离与鉴定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
罗非鱼鱼苗病原菌的分离与鉴定
一、材料
发病罗非鱼鱼苗
二、培养基
ＨＢＩ培养基
ＬＢ培养基
牛肉膏蛋白胨培养基
仪器材料：
小离心管
200ul百度文库头
灭菌甘油
0.9%生理盐水
75%酒精
镊子
解剖刀
剪刀
显微镜
三、操作步骤
１.取病原
2、鱼体称重
实验前对病鱼进行称重，并记录数据。
3、鱼体消毒
取病鱼浸入75%乙醇中，用无菌镊子取出后，转入无菌生理盐水中，洗涤2—3次，再转至无菌生理盐水中备用。
10、回感试验
加适量生理盐水在试管中，挑取适量菌落分散在生理盐水中。从108－104CFU/ml浸泡健康鱼苗５min，试验鱼置于1.0 m×0.5 m×0.5 m的水族箱中饲养，连续充气，水温28 ~ 29℃。连续观察14 d，进行观察记录。及时将感染后的鱼取出。解剖观察病变情况。从濒死病鱼的肝脏重新分离、纯化细菌，进行二次人工感染试验。
11、分离及鉴定致病菌
12、致病菌的保存
13、致病菌生理生化试验（按需要进行）
4、制备组织
用解剖刀划开鱼腹，用灭菌镊子摘取感病鱼的肝脏、肾脏、胆囊，血液分别转入1.5ml灭菌离心管中，剪碎。
5、加入500ul灭菌水，混均。
６、划平板
吸取200ul，涂布平板
或直接用接种针蘸取4步组织碎片，在脂平板上直接划线，在恒温培养箱中培养24h。
7、镜检观察
观察平板上是否有菌落形成，及形态特征。
8、分离单菌落
挑取优势单菌落，转接至新琼脂平板，同样在恒温培养箱中培养24h进行纯培养。
9、革兰氏染色
挑取溶菌落涂在载玻片上上，草酸铵结晶紫染1分钟，无菌水冲洗，加碘液覆盖涂面染1分钟，再无菌水冲洗，用吸水纸吸去水分。加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。蕃红梁色液染10秒钟后，无菌水冲洗。镜检优势菌的形态特征。
一、材料
发病罗非鱼鱼苗
二、培养基
ＨＢＩ培养基
ＬＢ培养基
牛肉膏蛋白胨培养基
仪器材料：
小离心管
200ul百度文库头
灭菌甘油
0.9%生理盐水
75%酒精
镊子
解剖刀
剪刀
显微镜
三、操作步骤
１.取病原
2、鱼体称重
实验前对病鱼进行称重，并记录数据。
3、鱼体消毒
取病鱼浸入75%乙醇中，用无菌镊子取出后，转入无菌生理盐水中，洗涤2—3次，再转至无菌生理盐水中备用。
10、回感试验
加适量生理盐水在试管中，挑取适量菌落分散在生理盐水中。从108－104CFU/ml浸泡健康鱼苗５min，试验鱼置于1.0 m×0.5 m×0.5 m的水族箱中饲养，连续充气，水温28 ~ 29℃。连续观察14 d，进行观察记录。及时将感染后的鱼取出。解剖观察病变情况。从濒死病鱼的肝脏重新分离、纯化细菌，进行二次人工感染试验。
11、分离及鉴定致病菌
12、致病菌的保存
13、致病菌生理生化试验（按需要进行）
4、制备组织
用解剖刀划开鱼腹，用灭菌镊子摘取感病鱼的肝脏、肾脏、胆囊，血液分别转入1.5ml灭菌离心管中，剪碎。
5、加入500ul灭菌水，混均。
６、划平板
吸取200ul，涂布平板
或直接用接种针蘸取4步组织碎片，在脂平板上直接划线，在恒温培养箱中培养24h。
7、镜检观察
观察平板上是否有菌落形成，及形态特征。
8、分离单菌落
挑取优势单菌落，转接至新琼脂平板，同样在恒温培养箱中培养24h进行纯培养。
9、革兰氏染色
挑取溶菌落涂在载玻片上上，草酸铵结晶紫染1分钟，无菌水冲洗，加碘液覆盖涂面染1分钟，再无菌水冲洗，用吸水纸吸去水分。加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。蕃红梁色液染10秒钟后，无菌水冲洗。镜检优势菌的形态特征。