差异表达基因分析趋势性上调和下调基因分析基因集功模板共68页
基因表达数据分析中的差异分析方法
基因表达数据分析中的差异分析方法随着基因组学和生物信息学的发展，基因表达数据分析在生物学研究中扮演着至关重要的角色。
基因表达数据的分析可以帮助我们寻找不同条件下的基因差异，从而进一步了解基因的功能以及生物系统的调控机制。
而在基因表达数据分析中，差异分析方法是最常用和重要的工具之一。
本文将介绍几种常见的基因差异分析方法，包括差异基因筛选、聚类分析和生物学功能注释等。
一、差异基因筛选差异基因筛选是基因表达数据分析中最常见的任务之一。
它的目的是从两个或多个不同条件下的基因表达数据中找出在两个条件之间有显著表达差异的基因。
在差异基因筛选中，常用的方法有t检验、方差分析和Wilcoxon秩和检验等。
t检验是一种基本的统计方法，适用于两个条件的差异分析。
它可以通过比较两个条件下基因的平均表达水平，来判断它们之间的差异是否具有统计学意义。
方差分析则适用于三个以上条件的差异分析。
它基于方差的分解，通过比较组内和组间的方差差异，判断基因的表达是否受到不同条件的显著影响。
Wilcoxon秩和检验是一种非参数检验方法，适用于数据不满足正态分布的情况。
它利用数据的秩次而非具体数值进行比较，更加鲁棒。
二、聚类分析除了差异基因的筛选，聚类分析也是基因表达数据分析中常用的方法之一。
聚类分析可以将基因表达数据分为若干个类别，从而发现具有相似表达模式的基因。
常见的聚类方法包括层次聚类和k均值聚类。
层次聚类是一种树状图分析方法，可以将样本或基因聚成一颗层次树。
它基于距离或相似性的度量，通过自下而上或自上而下的合并或分割，将数据划分为不同的类别。
而k均值聚类则是一种基于样本的聚类方法。
它将数据分为k个类别，并试图使得每个样本到其所属类别的中心距离最小。
三、生物学功能注释在差异分析之后，对差异基因的生物学功能进行注释是进一步理解基因调控机制的重要步骤。
生物学功能注释可以揭示差异基因所参与的生物过程、细胞部位和分子功能等信息。
在生物学功能注释中，常见的工具和数据库包括Gene Ontology （GO）注释、KEGG和Reactome等通路注释以及蛋白质-蛋白质相互作用网络等。
《基因差异表达分析》课件
• 引言 • 基因差异表达分析的方法 • 基因差异表达分析的实验设计 • 基因差异表达分析的结果解读 • 基因差异表达分析的挑战与展望 • 案例分享与讨论
目录
Part
01
引言
基因差异表达分析的定义
基因差异表达分析是通过比较不同条件下基因表达水平的变化，来研究基因功能、 生物体对环境或刺激的响应机制以及疾病发生发展机制的方法。
加强跨学科合作
基因差异表达分析涉及到多个学 科领域，加强跨学科合作有助于 推动该领域的发展。
Part
06
案例分享与讨论
案例一：肺癌中的基因差异表达分析
总结词
肺癌是一种常见的恶性肿瘤，基因差异表达分析有助于揭示肺癌的发病机制和潜在治疗 靶点。
详细描述
通过对肺癌组织与正常组织进行基因差异表达分析，可以发现与肺癌发生、发展相关的 关键基因，如EGFR、KRAS等。这些基因的异常表达可能导致肺癌细胞的增殖、转移和 耐药性产生。基因差异表达分析为肺癌的诊断、治疗和预后评估提供了重要的科学依据
STEP 02
STEP 01
实验可重复性差
样本获取困难
在某些情况下，获取足够 的样本可能非常困难，特 别是在临床研究中。
STEP 03
实验设计不合理
在某些情况下，实验设计 可能不合理，导致无法准 确地检测基因差异表达。
由于实验条件、操作过程 等因素的影响，基因差异 表达分析实验的可重复性 可能较差。
数据质量控制
数据完整性
检查测序数据的完整性，确保数据没有缺失或损坏。
数据一致性
比较不同样本之间的测序数据，确保它们具有相似性和一致性，以便进行后续的 比较分析。
Part
差异表达基因分析
差异表达基因分析
差异表达基因分析（DifferentialExpressionGeneAnalysis，DEGA）是生物学中常用的一种技术，用于检测和确定不同生物样本或环境条件下的基因表达的差异。
本文旨在介绍差异表达基因分析技术，它的原理及其研究应用。
第一部分，定义差异表达基因分析。
差异表达基因分析是一种基因表达谱分析方法，旨在检测出样本在不同条件下有显著不同表达水平的基因。
它通过分析一系列相关的样本，明确哪些基因在不同条件下发生了显著表达差异。
第二部分，介绍差异表达基因分析的原理。
差异表达基因分析的基础是分析样本的RNA产物，即能够表达的基因的cDNA，以确定不
同条件下某些基因的表达差异。
通过使用一种叫做聚合酶链反应（PCR）的技术，可以比较多个样本的cDNA的表达水平，以确定哪些基因在
不同环境下有明显的表达差异。
第三部分，介绍差异表达基因分析的研究应用。
差异表达基因分析技术可以用于检测基因在不同环境、疾病和药物作用下的表达情况。
例如，可以检测癌症发生中不同细胞类型的基因表达差异。
此外，它还可以用于研究不同物种之间基因表达的差异，以及对特定疾病的病因及其预后等方面的研究。
本文综述了差异表达基因分析的定义、原理以及研究应用。
它是一项重要的技术，可用于生物学和疾病研究中的定量分析，为研究者提供重要的细胞和分子级数据，从而极大地推进了生物学研究。
上调表达基因和下调表达基因
上调表达基因和下调表达基因基因表达调控是指通过多种机制，调节基因在细胞内的表达水平，从而控制蛋白质的合成和细胞功能的调节。
在这个过程中，上调表达基因和下调表达基因是两种常见的调控方式。
本文将介绍上调表达基因和下调表达基因的相关概念、机制及其在生物学领域的重要意义。
一、基因表达的调控机制基因表达调控是生命活动中的基本过程之一，它涉及到诸多复杂的机制。
在信号转导途径、转录调控、RNA加工及转运、蛋白合成等多个环节中，参与了许多负责特定功能的蛋白质分子，它们协同作用，使基因表达产生时空特异性，以满足生物体内部和外部环境变化的需要。
最初，生物学家们认为基因表达调控是由DNA序列的不同所决定的，但从染色质结构和功能的研究中，人们逐渐发现除了DNA结构外，还有其他影响基因表达的因素，包括DNA转录的起始和终止点、基因间的距离和朝向、染色质的化学修饰等。
这些因素可以影响基因表达的开始、持续、强度以及终止的时间和方式。
二、上调表达基因的概念上调表达基因是指在一些物理或生化刺激下，某些基因的表达水平会显著增加。
物理或生化刺激可以包括代谢病理刺激、光照等生物或化学因素的作用，或者制备RNA 或基因克隆产物等外源性因素。
不同基因的上调表达可以导致不同的生物学效应，这些效应可以是正反馈效应或负反馈效应。
在细胞分裂、发育、截肢和愈合等生物过程中，上调表达基因是一个重要的调控机制。
例如在哺乳动物的胚胎发育过程中，许多上调表达基因都会参与胚胎建立、体轴发育和器官形成等关键的生物学事件。
此外，上调表达基因还可以为人类疾病的诊断和治疗提供新的选择，例如通过利用上调表达的基因来选择靶向治疗方法，即抑制该基因的作用来达到治疗的效果。
三、上调表达基因的调控机制上调表达基因的调控机制非常复杂，在这个过程中，电话所介导的信号传导和核糖体的中介作用起到了关键的作用。
其中，转录因子是调控上调表达基因的最重要的调控因素之一。
转录因子可以和DNA结合，并在初始化转录复合物形成和RNA聚合酶的招募过程中发挥重要的作用，促进DNA 转录的开始并增加RNA聚合酶的在这个过程中的效率。
第七讲 差异表达基因分析
一般性的方法
选择一个统计量给基因排秩来证明表达有 差异 为排秩统计量选择一个判别值，在它之上 的值将被认为是显著的 前面一个部分更为重要，所以研究的较多， 方法也更多，后面那部分的方法稍微简单
重复芯片（replicates）M值
根据比率平均值或 对基因排序。 M值 为信号强度比值的log2值， 是任一特 定基因在重复序列中M值的均值。 这一排序法忽略了一个基因在重复实验中 的不同芯片上表达水平的差异程度。例如， 可能某一个基因在某一张芯片上M值很大， 但在其他芯片上M值很小，其实这条基因并 没有差异表达，但由于个别M值的影响，从 而显示出一个差异表达的特性，造成假阳 性。
Cluster&Treeview软件
Genesis软件
预分析（Pre-Analysis）
重复值合并（ replicate handling ） 数据转换和标准化（data transformation and standardization） 缺失数据处理（ missing value management ） 基因筛选（pattern selection）
K最近邻法（K-nearest neighborhood method）： 假定某个基因在某个指标上含有缺失值，计算此 包含缺失值的基因与在该指标上无缺失的基因间 的相似性指标或距离指标（相似性或距离的计算 中不包括欲估计的指标），与该基因相似性最大 的K个基因称为该基因的K个最近邻（k nearest neighborhoods），这K个基因在该观测指标上的 数据就是估计缺失基因数据的基础，估计值可以 是这K个基因在该指标上的均数，也可以是这K个 基因的加权均数。在加权均数中，权重为上面计 算的基因间的相似性。K值的确定具有一定的经验 性，但不宜太大和太小。
基因差异表达技术
基因差异表达技术真核生物中，从个体的生长、发育、衰老、死亡，到组织的得化、调亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答，本质上都涉及基因的选择性表达。
高等生物大约有30000个不同的基因，但在生物体内任意8细胞中只有10%的基因的以表达，而这些基因的表达按特定的时间和空间顺序有序地进行着，这种表达的方式即为基因的差异表达。
其包括新出现的基因的表达与表达量有差异的基因的表达。
生物体表现出的各种特性，主要是由于基因的差异表达引起的。
由于基因的差异表达的变化是调控细胞生命活动过程的核心机制，通过比较同一类细胞在不同生理条件下或在不同生长发育阶段的基因表达差异，可为分析生命活动过程提供重要信息。
研究基因差异表达的主要技术有差别杂交（differential hybridization）、扣除（消减）杂交（subtractive hybridization of cDNA，SHD）、mRNA差异显示（mRNA differential display，DD）、抑制消减杂交法（suppression subtractive hybridization，SSH）、代表性差异分析（represential display analysis，RDA）、交互扣除RNA差别显示技术（reciprocal subtraction differential RNA display）、基因表达系列分析（serial analysis of gene expression，SAGE）、电子消减（electronic subtraction）和DNA微列阵分析（DNA microarray）等。
一、差别杂交与扣除杂交差别杂交（differential hybridization）又叫差别筛选（differential screening），适用于分离经特殊处理而被诱发表达的mRNA的cDNA克隆。
为了增加这种方法的有效性，后来又发展出了扣除杂交（subtractive hybridization）或扣除cDNA克隆（subtractive cDNA cloning），它是通过构建扣除文库（subtractive library）得以实现的。
差异基因表达
差异基因表达差异基因表达是指在不同组织、不同时间或不同环境条件下，某些基因的表达水平发生变化的现象。
这种变化可能是由于遗传因素或外部环境因素导致的，它们对生物体的形态和功能具有重要影响。
差异基因表达研究是现代分子生物学和生物信息学领域中的一个重要研究方向。
它可以帮助我们了解生物体在不同条件下的适应性和适应机制，以及某些疾病的发生和发展过程。
同时，通过对差异基因表达进行分析和挖掘，还可以为新药开发、农业育种等领域提供重要参考。
差异基因表达分析通常包括以下几个步骤：1. 样品采集：收集不同组织、不同时间或不同环境条件下的样品，并进行处理，如RNA提取等。
2. RNA测序：利用高通量测序技术对样品中的RNA进行测序，并生成海量的原始数据。
3. 数据预处理：将原始数据进行质量控制、去除低质量序列、去除rRNA等预处理工作，以得到高质量的数据集。
4. 比对分析：将预处理后的数据与参考基因组进行比对，以确定每个基因的表达水平。
5. 差异表达分析：通过统计学方法比较不同样品之间的基因表达水平差异，并筛选出显著差异的基因。
6. 生物信息学分析：对差异表达基因进行功能注释、通路富集分析等生物信息学分析，以了解其在生物体中的作用和调控机制。
在差异基因表达研究中，常用的统计学方法包括DESeq2、edgeR、limma等。
这些方法可以对高通量测序数据进行标准化、归一化和显著性检验，以确定差异表达基因。
同时，生物信息学工具如DAVID、KEGG等可以帮助我们对差异表达基因进行功能注释和通路富集分析。
总之，差异基因表达研究是一个复杂而重要的领域，在生命科学研究和应用中具有广泛应用价值。
随着技术的不断进步和算法的不断优化，我们相信这一领域将会取得更加深入和广泛的发展。
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60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
ห้องสมุดไป่ตู้
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
差异表达基因分析5趋势性上调和下 调基因分析6基因集功
11、用道德的示范来造就一个人，显然比用法律来约束他更有价值。—— 希腊
12、法律是无私的，对谁都一视同仁。在每件事上，她都不徇私情。—— 托马斯
13、公正的法律限制不了好的自由，因为好人不会去做法律不允许的事 情。——弗劳德
14、法律是为了保护无辜而制定的。——爱略特 15、像房子一样，法律和法律都是相互依存的。——伯克
基因差异表达及其功能分析研究
基因差异表达及其功能分析研究基因是生物体内的遗传物质，可以决定生物体的遗传特征和表现型。
而基因的表达则是指基因转录成mRNA并通过翻译作用产生蛋白质的过程，这个过程决定了细胞的生物化学特性和功能。
随着分子生物学的快速发展，我们发现，不同的生物体之间，甚至同一生物体不同的细胞间存在着基因表达的差异，这些差异可能对生物体的形态、功能和健康等方面产生深远影响。
因此，研究基因差异表达及其功能分析，将给人类生物医学科学带来重大突破和进展。
首先，基因差异表达研究的重要性在于它可以对不同组织、不同器官、不同细胞类型的基因表达模式进行比较，找出其中的规律和特点。
这可以为分子病理学、组织学和解剖学等科学研究提供突破口，比如可以发现疾病的发生和发展过程中哪些基因发生了异常表达，从而开发新的药物、诊断方法和预防策略，具有非常重要的应用价值。
其次，在基因差异表达研究中，我们可以通过引入外源基因或通过刻意引发特定的生理或环境刺激来模拟现实情况下的基因调控机制。
这一方法可称为“比较实验”，比如将正常细胞和癌症细胞进行比较，通过对其RNA序列分析，可以发现哪些基因在癌症细胞中过度表达或失活，从而确定疾病的发病机制和关键节点以及治疗靶点。
同时，我们还可以利用不同的基因表达技术手段，比如RNA测序、微阵列技术、蛋白质芯片等，对大量基因进行扫描，找到与疾病相关的基因，并进一步验证和分析其归因机制和生物学功能。
更为重要的是，基因差异表达研究不仅可以分析基因本身在生物学和生理学方面的功能，也可以进一步探究细胞调控机制的动态变化和适应性调整。
即相同细胞或组织，在不同的生理或病理环境下，基因表达和调节方式可能会发生变化，产生不同的表型和生物学行为。
比如，当人体面对营养不良、感染、药物毒性等环境压力时，基因表达和蛋白质产生的规律和数量都会发生改变，这些改变对人体的免疫、代谢和生理学功能都会产生影响。
为此，研究基因的表达差异，有助于深入理解生物体的适应性和生存机理，为生物医学科学提供精准和有效的工具。
差异表达基因分析5趋势性上调和下调基因分析6基因集功
a、Solexa 测序专用的测序芯片（flow cell）表面连接有一层单链引物（Primer）, 单链状态的 DNA片断与芯片表面的引物通过碱基互补被一端固定在芯片上；
b、通过扩增反应使得单链 DNA成为双链 DNA；
c、双链再次变性后成为单链，其一端固定在测序芯片上，另外一端（5’或 3’）随 机和附近的另外一个引物互补，被固定住，形成“桥“(bridge)； d、在测序芯片上同时有上千万 DNA 单分子发生以上的反应；
/2
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4.1差异倍数法
• Fold change= log2(A/B)
Fold change = log2(A/B)
A：sampleA表达值 B：sampleB表达值
通常以1和-1为作为差异表达的阈值，判断基因是否差异表 达
• 倍数法是比较常用的一种方法，因为比较简单和直接。 • 但是，这种方法也是有其重大缺陷的。比如，在某个实验中，基 因表达水平的变化不大，如果选择判别阈值为2倍，则有可能找不 到几个差异表达的基因，假阴性率比较高。但如果是主观缩小判 断阈值，又有可能增大假阳性率。 • 这一方法没有考虑到差异表达的统计显著性。
取准确的DNA序列信息。
• 2）工作流程：
3. GS FLX系统的技术优势和限制 1）读长优势：单个序列的读长平均可达到450个碱基左右；2）操作简便高效，不需建库、 克隆挑取、质粒提取等工作；3）分析结果快速、信息高通量，10小时的运行当中可获得
100多万个读长，读取超过4-6亿个碱基信息；4）应用广泛且稳定，测序结果一致性较高；5）
MPSS(多重性平行定序)：
对于功能基因组研究非常有效，能在短时间内捕获细胞或组织内 全部基因的表达特征；对于鉴定致病基因并揭示该基因在疾病中 的作用机制等发挥了重要作用。 可以侦测到极为罕见的基因表现
差异基因表达
差异基因表达引言差异基因表达是指在不同组织、细胞类型或生理状态下，基因的表达水平存在显著差异。
通过研究差异基因表达，可以深入了解组织与细胞的功能及其在生理和疾病过程中的作用。
本文将探讨差异基因表达的原因、分析方法及其在生物学研究中的应用。
一、差异基因表达的原因差异基因表达的原因可以归结为两类：遗传因素和环境因素。
遗传因素包括基因座的多态性、突变等DNA序列的变异，以及基因调控元件（如启动子和增强子）的变化。
环境因素包括内外部环境的改变，如营养状态、感染、药物刺激等。
差异基因表达的遗传基础主要包括单核苷酸多态性（SNP）、拷贝数变异和结构变异等。
SNP是指基因组中单个核苷酸的变异，可能导致基因表达的差异。
拷贝数变异是指某一段DNA序列的重复拷贝数目的变化，可能导致基因的过量表达或缺失表达。
结构变异是指染色体上的大片段DNA序列插入、删除、重排等的变化，这些变化可能影响基因的转录和翻译过程。
环境因素对差异基因表达的影响主要通过调控基因的表达水平来实现。
一些环境因素如营养物质、药物和化学物质等可以直接作用于细胞并改变基因转录水平。
其他环境因素如感染和创伤则通过免疫系统的活化和细胞信号传导通路的改变来影响基因表达。
二、差异基因表达的分析方法差异基因表达的分析方法可以分为两大类：基于RNA测序的方法和基于芯片技术的方法。
基于RNA测序的方法是目前应用最广泛、最准确的差异基因表达分析方法。
该方法通过建立细胞或组织的转录组数据库，将不同样本中的RNA提取、逆转录合成cDNA，并进行高通量测序。
随后，利用生物信息学手段对测序结果进行比对、拼接和定量分析，最终得到差异基因的表达模式。
基于芯片技术的方法是早期使用较多的差异基因表达分析方法。
该方法通过将样本中的RNA提取、逆转录合成标记的cDNA，并将其与芯片上的探针序列杂交，利用荧光信号检测差异基因的表达水平。
芯片上的探针通常是特异性的DNA片段，可以与不同基因的RNA序列互补配对，从而实现对基因表达的检测。
上调和下调基因的分子机制研究
上调和下调基因的分子机制研究基因调控是生物体内细胞发育、分化、生长和响应外界刺激等过程中的关键环节。
在这一过程中，基因的表达不断发生变化，即上调或下调。
上调和下调的基因表达变化对于维持生物体的正常生理功能至关重要，同时也在疾病的发生和发展中发挥关键作用。
因此，研究上调和下调基因的分子机制具有重要的理论和应用价值。
在研究上调和下调基因的分子机制时，首先需要了解基因表达调控的层级。
基因表达调控主要分为转录水平和转录后水平两个层次。
转录水平调控主要包括染色质沉默、DNA甲基化、组蛋白修饰以及转录因子结合等步骤。
在染色质沉默中，DNA在染色质中被特定修饰酶修饰，如DNA甲基化酶增加DNA甲基化水平或脱甲基化酶降低DNA甲基化程度。
DNA甲基化水平的改变将直接影响到基因表达的上调和下调。
在组蛋白修饰过程中，组蛋白甲基化、乙酰化、磷酸化等修饰形式的变化也会导致基因表达水平的变动。
转录因子是一类重要的转录调控因子，它们能够与DNA特异性结合，从而调控基因的启动子活性。
根据相关实验证据显示，转录因子的表达水平的变化和基因表达上调或下调密切相关。
转录后调控包括转录后修饰和RNA稳定性的调控。
在转录后修饰中，mRNA和非编码RNA会经历剪切、拼接、聚腺苷化、反转录以及RNA修饰等修饰过程。
这些修饰过程会影响RNA的结构和功能，从而对基因表达产生调控作用。
RNA稳定性指的是RNA分子在细胞内降解和保持稳定的程度。
一些RNA分子的寿命较短，而另一些RNA分子则能够在细胞内稳定存在一段时间。
这种不同寿命的RNA可以通过调控降解酶的活性来实现对基因表达的上调或下调。
除了这些基本的上调和下调机制，近年来，一些新的调控机制也被广泛地研究。
例如，通过非编码RNA（如miRNA和lncRNA）的介入，可以在转录水平对基因表达进行调控。
miRNA是一类长度约22nt的小分子RNA，它们通过与mRNA靶标的互补碱基序列结合，抑制其翻译或降解mRNA分子。
差异表达基因分析：差异倍数（foldchange）,差异的显著性（P-value）火山图
差异表达基因分析：差异倍数（foldchange）,差异的显著性（P-value）⽕⼭图Differential gene expression analysis：差异表达基因分析Differentially expressed gene (DEG)：差异表达基因Volcano Plot：⽕⼭图差异倍数(fold change)fold change翻译过来就是倍数变化，假设A基因表达值为1，B表达值为3，那么B的表达就是A的3倍。
⼀般我们都⽤count、TPM或FPKM来衡量基因表达⽔平，所以基因表达值肯定是⾮负数，那么fold change的取值就是(0, +∞).为什么我们经常看到差异基因⾥负数代表下调、正数代表上调？因为我们⽤了log2 fold change。
当expr(A) < expr(B)时，B对A的fold change就⼤于1，log2 fold change就⼤于0（见下图），B相对A就是上调；当expr(A) > expr(B)时，B对A的fold change就⼩于1，log2 fold change就⼩于0。
通常为了防⽌取log2时产⽣NA，我们会给表达值加1（或者⼀个极⼩的数），也就是log2(B+1) - log2(A+1). 【需要⼀点对数函数的基础知识】为什么不直接⽤表达之差，差直接有正负啊？假设A表达为1，B表达为8，C表达为64；直接⽤差B相对A就上调了7，C就相对B上调了56；⽤log2 fold change，B相对A就上调了3，C相对B也只上调了3. 通过测序观察我们发现，不同基因在细胞⾥的表达差异⾮常巨⼤，所以直接⽤差显然不合适，⽤log2 fold change更能表⽰相对的变化趋势。
虽然⼤家都在⽤log2 fold change，但显然也是有缺点的：⼀、到底是5到10的变化⼤，还是100到120的变化⼤？⼆、5到10可能是由于技术误差导致的。
差异表达基因分析趋势性上调和下调基因分析基因集功模板68页PPT
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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差异表达基因分析趋势性上调和下调 基因分析基因集功模板
1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克
《差异表达基因分析》PPT课件
重复值合并
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基因不同命名
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重复值合并
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Gene ID converter
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重复值合并
在特定条件下把所有的重复值合并成一个数值可 能更为方便，而这一个值是给定基因/条件的代表。 通常的合并是指计算这些重复值的集中趋势指标， 如均数、中位数或众数。然而，使用一个集中趋 势指标代替一组数值意味着信息的丢失，因此数 据的合并应谨慎。 去除奇异值。可以通过计算原始数据的均数和标 准差，去除位于给定区间外的数据（如均数加减3 个标准差外的数据）。剩余的数据重新计算均数 和标准差，并消除给定区间外的数据。
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单通道寡核苷酸芯片差异基因（两 个样本直接比较）
Affymetrix，illumina芯片由于有探针重复，可以利用统计方法 计算出一个统计性的P值或者score值，筛选差异表达基因 19
不同类样本差异基因识别
20
评价一组数的统计量
232.7 198.2 137.7 84.3 218.6 181.5 216.7
54
55
基因筛选
针对特别目的选取，比如选取不同类之间 差异表达基因。常用的方法，假设检验， 比如t检验，F检验等 不改变整体数据矩阵的数据结构，去除数 据的冗余性。常用方法，主成分分析等。
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发展
新算法
新角度
合并多种方法
57
主成分分析 (Principle Component Analysis)
11
倍数法
12
倍数法
倍数法是比较常用的一种方法，因为比较简单和 直接。 但是，这种方法也是有其重大缺陷的。比如，在 某个实验中，基因表达水平的变化不大，如果选 择判别域值为2倍，则有可能找不到几个差异表达 的基因，假阴性率比较高。但如果是主观缩小判 断域值，又有可能增大假阳性率。 这一方法没有考虑到差异表达的统计显著性。
基因组学中的差异表达分析
基因组学中的差异表达分析基因组学是现代生物学的一个重要领域，它研究的是生物体内所有基因和基因组的结构、功能、表达及调控等方面。
众所周知，人类基因组中拥有超过20,000个基因，每个基因在不同的组织和不同的生理状态下会表现出不同的表达谱。
因此，深入研究基因表达谱之间的差异是理解生命的基础。
差异表达分析是用来比较不同条件下基因转录本表达的一种方法，它可以揭示不同基因之间的调控网络，从而解析物种在不同生理、病理状态下内部的基因变化。
一般来说，差异表达分析主要包括样本筛选、RNA提取和测序、数据质控、差异表达基因分析及生物信息学注释等步骤。
（一）样本筛选在进行差异表达分析前，需要明确研究设计所需要的样本类型。
有效的样本设计可以降低误差和增加差异表达结果的准确性。
比如，研究者可以通过挑选不同亚型疾病样品，来研究各亚型疾病之间的差异表达情况，或者挑选不同时间点的样品来分析动态变化的基因表达情况等。
（二）RNA提取和测序RNA提取和测序是差异表达分析的前提工作。
RNA提取的目的是将细胞或组织中的RNA分离并纯化放到后续测序分析的平台。
RNA提取可以采用传统的三分体系方法或者信号放大法。
同时，在RNA提取过程中，研究者必须特别注意样品的总量、质量、纯化程度等。
RNA测序是确定RNA序列及表达谱定量的一种技术。
目前，RNA测序技术的发展让高通量、低成本的RNA测序成为可能。
RNA测序可以使用Illumina、PacBio、Oxford Nanopore、SOLiD等不同平台。
同时，为了减少误差和提高测序效果，使用大量的样品来进行RNA-seq，以达到有意义的分析结果。
（三）数据质控RNA测序的结果容易受到实验过程中多种因素的干扰，如细胞样品的质量，RNA提取和测序的技术问题，数据分析的方法问题，等等。
为此，数据质控需要通过有序、严密的参数检测，剔除低质量、干扰的数据，而留下高质量、可靠的数据。
对于每个RNA测序数据，我们可以对其进行FASTQC数据质控分析，进一步排除质量不佳的样本，确保所得到数据质量可靠。