自身抗体荧光片判读与讲解

粒细胞 (甲醛固定) 粒细胞 (乙醇固定)
ANA+pANCA
HEp-2 细胞 猴肝
粒细胞 (甲醛固定) 粒细胞 (乙醇固定)
ANCA产品读片要点：
ANA主要会对乙醇固定粒细胞的基质产生干扰 甲醛敏感的pANCA最易被ANA干扰，从而产生误报。 使用多基质组合（HEp-2/猴肝/乙醇固定/甲醛固定）进
靶抗原：Scl-70、 PM-Scl、RNA多 聚酶、原纤维蛋白
核仁型的多种模型
PM-Scl
RNA多聚酶
Scl-70
原纤维蛋白
胞浆颗粒型：抗核糖体P蛋白抗体
HEp-2：间期细胞 浆中出现致密的细 颗粒样荧光，并有 空泡现象，部分核 仁阳性；分裂期细 胞浓缩染色体阴性
肝片： 灵长类肝组 织中可能呈现特异 的由几个肝细胞浆 融合形成的岛状荧 光
核粗颗粒型
HEp-2：间期细胞 核呈颗粒样荧光， 核仁阴性；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性，染色体周围呈 颗粒样荧光
肝片：肝细胞核呈 颗粒样荧光。核仁 阴性；荧光强度与 HEp-2基本一致
靶抗原：nRNP、 Sm
核细颗粒型
HEp-2：间期细胞 核呈细颗粒样荧光， 部分核仁阴性；分 裂期细胞浓缩染色 体阴性，染色体周 围呈颗粒样荧光
靶抗原：核糖体P 蛋白
胞浆颗粒型：抗线粒体抗体
HEp-2：细胞浆内 粗颗粒样荧光
肝片： 肝细胞呈颗 粒样荧光，整个视 野呈细沙状荧光
靶抗原：线粒体
胞浆颗粒型：抗Jo-1抗体
HEp-2：间期细胞浆 中出现颗粒到细块状 荧光，细胞核有时也 出现细颗粒荧光；分 裂期细胞浓缩染色体 阴性，染色体周围区 域呈致密的细颗粒荧 光
肝片：荧光模式不 典型
靶抗原：波形蛋白
抗中心粒抗体
HEp-2：在细胞核 内可见一或两个荧 光点，分裂期细胞 中荧光点位于细胞 纵向对称的两极
肝片：荧光模式不 典型
抗纺锤体纤维抗体
HEp-2：仅见于分 裂期细胞，纺锤体 部位出现特征性荧 光。
肝片：荧光模式不 典型
抗中间体抗体
HEp-2：分裂中期 细胞中间水平方向 产生带状细颗粒荧 光，半数间期细胞 含有大量粗荧光点， 其余细胞为阴性。
猴肝
粒细胞 (乙醇固定)
pANCA
HEp-2 细胞
粒细胞 (甲醛固定)
猴肝
粒细胞 (乙醇固定)
关于肝片：
从纯天然的肝组织的肝血窦中找增强的中性粒细胞 在肝组织上撒布中性粒细胞
EUROIMMUN
关于乙醇固定的中性粒细胞：
OK
Maybe
……..
EUROIMMUN
ANA（干扰）
HEp-2 细胞 猴肝
猴肝：LSP、抗胆管抗体、LMA 鼠肾：AMA/LKM 鼠胃：ASMA（F-actin） 鼠肝：LKM/LC-1
Hep-2 鼠肾 鼠胃
猴肝 鼠肝 猴心
猴心：M7 （横纹肌、润盘）
如何综合判读各基质？
Hep-2 鼠肾 鼠胃
猴肝 鼠肝 猴心
Hep-2 + 猴肝: ANA （ANCA） 鼠肾：AMA 鼠胃+鼠肾+猴肝+Hep-2：ASMA（F-actin）
ANCA荧光模型解析及判读
ANCA筛查：基质
抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） = Anti-Neutrophil Cytoplasm Autoantibodies
ANCA荧光模型
核周型ANCA（pANCA）
胞浆型ANCA（cANCA）
细胞核周围呈现平滑的带状荧光， 细胞浆呈现不均匀的颗粒样荧
细胞核阴性
光，有时形成小团块或粗大颗粒，
核分叶处有荧光增强
ANCA筛查：推荐基质组合
粒细胞（乙醇固定）→ 粒细胞（甲醛固定）→
←猴肝 ←Hep-2
模板片示例 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）
cANCA
HEp-2 细胞 猴肝
粒细胞 (甲醛固定) 粒细胞 (乙醇固定)
pANCA
HEp-2 细胞
粒细胞 (甲醛固定)
鼠肝
抗肝溶质抗原（LC-1）抗体
鼠肝：肝细胞胞浆荧光阳性，肝小 叶中心区域荧光减弱
相关疾病：为 II - AIH 的血清学标志。
鼠肝
如何综合判读各基质？
Hep-2 鼠肾 鼠胃
猴肝 鼠肝 猴心
注意：
一种抗体不仅限于一种基质表现 一种基质也不仅提示一种抗体
如何综合判读各基质？－ 自免肝
Hep-2 + 猴肝: ANA （PBC-核点/核膜/AMA AIH- ANA/ASMA）
肝片：肝细胞核内 可观察到10-20个荧 光点；荧光强度明 显弱于与HEp-2细胞
靶抗原：着丝点蛋 白
核点型
HEp-2：间期细胞 核内出现大小、数 目、强度不均的点 状荧光；分裂期细 胞浓缩染色体阴性。 周围可见点状荧光
肝片：肝细胞核内 出现大小、数目不 均一的点状荧光； 荧光强度与HEp-2 基本一致
鼠肾
鼠肾：肾小管周围纤维 肾小球膜细胞 血管肌层
• 相关疾病：为 AIH 的血清学标志
抗肝肾微粒体（LKM-1）抗体
鼠肾：近端肾小管细胞呈
现胞浆颗粒样，核阴性，
而远端肾小管阴性，呈现
半阴半阳模式
鼠肾
鼠肝：肝细胞胞浆呈现荧
光，细颗粒到均质状，荧
光模型不特异
相关疾病：为 II-AIH 的 血清学标志
肝片： 荧光模式不 典型
靶抗原：高尔基体
胞浆纤维型：抗肌动蛋白抗体
HEp-2：细胞浆中 出现无数束状纤维 样结构，有时可伸 展到细胞核
肝片： 出现 “T” 字或 “丁” 字样荧 光
靶抗原：肌动蛋白
胞浆纤维型：抗波形蛋白抗体
HEp-2：细胞浆中 出现细的纤维网状 荧光；分裂期细胞 浓缩染色体阴性， 染色体周围可出现 无数圆形的荧光点
肝片：肝细胞核呈 颗粒样荧光。部分 核仁阴性；荧光强 度明显弱于HEp-2
靶抗原：SS-A、 SS-B
抗Ku抗体
HEp-2：间期细胞 核呈现细颗粒样荧 光；分裂期细胞浓 缩染色体阴性
肝片： （灵长类） 肝细胞核呈现网状 荧光
靶抗原：Ku蛋白
细胞周期蛋白I型（PCNA）
HEp-2：半数间期 细胞核呈现亮的、 细颗粒样荧光，核 仁阴性；另半数间 期细胞荧光模型相 同，但强度弱10倍 以上；分裂期细胞 浓缩染色体阴性， 周围有较弱的颗粒 荧光
鼠肾+鼠肝：LKM 猴肝+鼠肝：LSP、抗胆管抗体、LMA
鼠肝：LC-1 猴心：M7 （横纹肌、润盘）
其他：鼠肾：（GBM） 鼠胃：（PCA）
Thanks & any questions
肝片：荧光模型不 典型
靶抗原：DNA聚合 酶δ的辅助蛋白
细胞周期蛋白II型
HEp-2：部分间期 细胞核阳性，部分 间期细胞核阴性； 分裂期细胞核均阳 性，呈颗粒样荧光， 浓缩染色体为阴性
肝片：荧光模型不 典型
靶抗原：cyclin蛋白
着丝点型
HEp-2：间期细胞 核内出现大小数目 相同、均匀分布的 点状荧光；分裂期 细胞浓缩染色体处 出现浓缩点状荧光
肝片： 荧光模式不 典型
靶抗原：Jo-1
胞浆颗粒型：抗溶酶体抗体
HEp-2：细胞浆中 出现细小的、中等 大小的、以及粗的 滴状荧光颗粒
肝片： 荧光模式不 典型
靶抗原：溶酶体
胞浆颗粒型：抗高尔基体抗体
HEp-2：间期细胞 核一侧的高尔基体 所在部位呈现网状 的颗粒样荧光；分 裂期细胞无荧光。
靶抗原：Sp100、 PML
核膜型
HEp-2：间期细胞 核呈现均匀荧光， 核周增强；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性
肝片：肝细胞核呈 现特征性环状荧光
靶抗原：板层素、 gp210
核仁型
HEp-2：间期细胞 核仁阳性；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性。
肝片：肝细胞核仁 阳性；荧光强度与 HEp-2基本一致
肝片：荧光模式不 典型
模板片示例— 抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫）
抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫）
绿蝇短膜虫模式图
抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫）
阴性
阴性
阳性
抗dsDNA抗体判读要点
全部虫体动基体 表现为均匀的、 有时边缘增强的 荧光。
细胞核与鞭毛基 体的反应没有任Βιβλιοθήκη Baidu何意义，可不做 结果判断。
核均质型： dsDNA、组蛋白和核小体等
核膜型： 板层素、gp210等
细胞核
核颗粒型
核糖核蛋白：Sm、nRNP、SS-A、SS-B 细胞周期蛋白：I型（PCNA）和II型
ANA
Ku 核仁型： Scl-70、RNA多聚酶、PM-Scl和原纤维蛋白等
核浆点型： 着丝点、核点等
细胞浆
胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等 胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等
分裂期细胞：纺垂体、中间体、中心粒等
读片要点
HEp-2细胞:选取多个视野判断 HEp-2细胞:分裂间期与分裂期细胞综合看 HEp-2与肝片综合看
核均质型
HEp-2：间期细胞核 呈均匀荧光，分裂期 细胞浓缩染色体荧光 增强
肝片：肝细胞核阳性， 呈均匀荧光。荧光强 度与HEp-2基本一致
靶抗原：dsDNA、 核小体、组蛋白
抗核抗体（ANA）荧光模型解析及判读
储韬 FAE for AnHui
ANA筛查（间接免疫荧光法）
检测ANA的“金标准” 基质组合：Hep-2+灵长类肝 抗原谱完整 (细胞核、细胞浆)
ANA筛查（基质组合）
Hep-2细胞
灵长类肝
ANA筛查（基质组合）
抗核抗体荧光模型分类
根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：
行综合判断，可最大限度降低ANA的干扰。
EUROIMMUN
自身免疫性肝病（ALD）相关抗体 荧光模型解析及判读
抗线粒体抗体（AMA）
鼠肾：肾小管上皮细胞胞 浆颗粒样荧光。
鼠肾
相关疾病：原发性胆汁性 肝硬化（PBC）等。
抗平滑肌抗体（ASMA）
鼠胃
鼠胃：黏膜腺体间收缩蛋白 黏膜下肌层 肌层