氨基葡萄糖检测方法

氨基葡萄糖检测方法

样品处理：

取1 mL反应液，离心去除反应中沉淀，用去离子水进行适当稀释后经孔径为0.22 μm的滤膜过滤。

检测方法1

分析方法：OPA 硼酸柱前衍生化

色谱条件：(1)色谱柱：色谱柱C18（250*4.6）mm

（2）柱温：40℃

（3）流动相A：称取3.02 g无水乙酸钠于烧杯中，加去离子水溶解并定容至1 L，然后加入200 μL三乙胺，用5%的醋酸将PH调到7.20±0.05；抽滤后加入5毫升四氢呋喃，混合后备用。

流动相B：称取3.02 g无水乙酸钠于烧杯中；加去离子水溶解并定容至200 mL；用5%醋酸将PH调到7.20±0.05；抽滤后，再向此溶液加入400 mL乙腈和400 mL甲醇，混合后备用。

（4）流速：1.0 ml/min；

（5）紫外检测器：338 nm

（6）柱温：40℃

（7）梯度洗脱：

时间A% B% 流速（ml/min）

0 92 8 1.0

20.0 40 60 1.0

22.5 0 100 1.0

23.5 0 100 1.2

24.5 0 100 1.2

25.0 0 100 1.2

26.5 92 8 1.2

（8）进样程序：

试剂摆放位置：P1A1：OPA P1A3：水

P1A4：硼酸P1A5：水

抽取：使用默认值补偿值从含200ul/min的位置P1A4上抽取7 ul 清洗：在位置P1A3清洗针一次

抽取：使用默认补偿值从含200ul/min的样品位置抽取1 ul

清洗：在位置P1A3清洗针一次

混合：将来自空气中的8 ul与最大速度混合3次

抽取：使用默认补偿值从含200ul/min的位置P1A1上抽取2 ul 清洗：在位置P1A3清洗针一次

混合：将来自空气中的10 ul与最大速度混合15次

抽取：使用默认补偿值从含200ul/min的位置P1A5上抽取30 ul 混合：将来自空气中的20 ul与300ul/min混合3次

进样：进样

（9）定量方法：采用外标法定量

检测结果如图1所示

图1

高效液相色谱法检测氨基葡萄糖图谱

检测方法2

分析方法：高效液相色谱法氨基柱检测GlcN和GlcNAc

色谱条件：（1）色谱柱：Agilent NH2( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm)；

（具体型号如图2所示）

（2）流动相：

（3）检测器：紫外检测器；

（4）检测波长：195nm；

（5）流速：1. 0 mL /min；

（6）进样量：20 μL；

（7）柱温：35℃。

（8）定量方法：外标法定量

图2

检测结果如图3所示：

氨基柱法检测氨糖及乙酰氨糖