细菌药敏试验概述

laboratory Standards）
美国临床实验室标准委员会 已经被我国卫生部指定为部颁标准 每年有新版 CLSI （Clinical and Laboratory Standards Institute） 美国临床实验室标准化研究所 2012年
CLSI临床微生物检验标准及操作规范
纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼
脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后 不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周 围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无 菌生长的透明圈即为抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，
3
药物分组
判断折点
标准菌株质控范围
特殊的耐药监测
敏感性分类(CLSI的定义)

敏感（Susceptible）
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的
MIC 5倍以上。

耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
0. 0.
MIC的分布
药代动力学和药效学
药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄 药效学：药物对机体的作用
时间依赖型（％T>MIC〕：β-内酰胺类，大环内酯类
浓度依赖型（AUC/MIC比率〕：AGS, FQ
这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案
MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC
第四章
抗菌药物敏感试验
黄露萍
抗菌药物敏感试验
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无
抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏
感性试验（Antimicrobial Susceptibility
Test），简称药敏试验（AST）。
药敏试验的意义
预测抗菌治疗的效果；
指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助临
药敏试验折点的建立
1. MIC的分布 2. 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 3. 临床疗效和细菌清除率 4. 抑菌圈直径的分布 ………定抑菌圈折点
统计学的线性回归 计算错误率：尽可能减少极重要误差 (假敏感率)
0.
10
15
20
0
5
00 8 2 5 5 03 12 0. 2 8 32 12 51 8 2
M100-S20Tables：抗菌药物敏感性试验的实施标准 M2-A10：纸片扩散法敏感性试验的实施标准 M07-A8：需氧菌稀释法敏感性试验方法 M11-A7: 厌氧菌敏感性试验方法 M47-A8: 血培养的原则和步骤
M35-A2: 细菌及酵母样真菌的鉴定方法简本
* M100 每年更新一次 **M2, M7 每三年更新一次
床医生选择合适的药物，避免产生或加重细 菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握 耐药菌感染的流行病学，以控制和预防耐药 菌感染的发生和流行。
药敏试验
MIC：在与微生物生长速率有关的特定
时间间隔内，通常是18～24小时，能够 抑制被测菌生长的最低药物浓度。
对倍稀释的优点：
操作容易 敏感株的MIC呈正态分布 区分异常(R)与敏感(S)的菌群
5.平板置室温干燥3~5分钟，用无菌镊子或纸片分配器 将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不 能移动；各抗菌纸片中距离应大于24mm，纸片距平板 内缘应大于15mm。
6.盖上平板的盖子，置35℃培养箱内孵育16~18小时后 阅读结果，对苯唑西林和万古霉素敏感等应孵育24小 时。
7.用游标卡尺或直尺量取 抑菌环直径，根据CLSI标 准，报告细菌对该抗生素
R
I
v
S
耐药
中介 D1 d2
敏感 抑菌圈直径（mm)
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
抑菌圈直径与MIC的关系
MIC (ug/ml)
>256 256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25 6 8 10 12 14 18 20 22 24 26 28 30 32 34
1 2 2 2 3 5 2 1 2
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2 5
5 9
不同国家的判定折点 －可能不同
原因：
用药剂量不同，服药的间隔不同
敏感(susceptible,S)、 耐药(resistant,R)、
中介(intermediate,I)。
纸片扩散法－影响因素


MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
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纸片扩散法－标准化
CLSI：美国实验室标准化委员会(Clinical
并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。
操作方法 ：
1.将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm的平板，其 厚度4mm。 2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。
3.置于无菌生理盐水中，校正其浊度于McFarland No 0.5管。
4.用无菌棉签浸入细 菌悬液中，将拭子在 试管上壁轻轻挤压以 挤去过多的菌液。棉 签在三个方向均匀抹 琼脂表面（每次转 60℃）使菌液均匀分 布，最后沿平板内缘 涂抹一周。
评价敏感时较保守 更强调检测出耐药株（即特定的耐药群） 技术因素：接种、培养基
在我国主要遵循临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药 物选择原则。
CLSI的简单介绍
NCCLS （The National Committee for clinical
敏感性分类（2）

中介 (Intermediate)
MIC接近血、体液中药物的浓度，治
疗反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
缓冲区：防止操作的系统误差造成重
大结果的判定错误
药敏试验的方法学
半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径)
MIC法：
稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪