快速诱导细胞凋亡及检测方法研究_周良彬

生物技术通讯

LETTERS IN BIOTECHNOLOGY Vol.24No.1Jan.,2013

doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2013.01.019研究报告快速诱导细胞凋亡及检测方法研究

周良彬，雷航，谭文佳，陈俊鹏，周晓，余晓丽

武汉工业学院生物与制药工程学院，湖北武汉430023

［摘要］目的：探讨Ca2+和Na+诱导细胞凋亡的最佳浓度及时间，并用甲基绿-派诺宁染色法检测凋亡细胞的形态变化。方法：分别用不同浓度梯度及时间梯度的Ca2+和Na+胁迫处理洋葱鳞茎内表皮细胞，得诱导的最佳浓度及时间；

用甲基绿-派诺宁染色法检测诱导凋亡的洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞和鸡血红细胞的形态特征变化。结果：诱导处理的最佳Ca2+和Na+浓度为0.4mol/L，最适时间约为8h，且CaCl2的诱导效果较NaCl好；经甲基绿-派诺宁染色，洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞、鸡血红细胞凋亡细胞的细胞核均呈蓝紫色，细胞质呈红色。结论：找出了诱导细胞凋亡的最适Ca2+和Na+浓度和时间，并检测到细胞凋亡。

［关键词］细胞凋亡；离子胁迫诱导；甲基绿-派诺宁；洋葱鳞茎内表皮；大蒜根尖；鸡血红细胞

［中图分类号］Q25［文献标识码］A［文章编号］1009-0002（2013）01-0083-04

Study on Methods of Measuring and Inducing Apoptosis Rapidly

ZHOU Liang-Bin,LEI Hang,TAN Wen-Jia,CHEN Jun-Peng,ZHOU Xiao,YU Xiao-Li* School of Biotechnic and Pharmaceutical Engineering,Wuhan Polytechnic University,Wuhan430023,China

*Corresponding author,E-mail:yxl1268@

［Abstract］Objective:To study the optimum concentration and time under Ca2+and Na+,and detect the chang⁃es of apoptosis morphological characteristics by methyl green-pyronin staining.Methods:To get the optimum con⁃centration and the optimum time,onion skin cells within the bulb were observed and counted under the micro⁃scope after different concentration and different time of ions stress treatment.The methyl green-pyronin staining was used to detect the changes of induced apoptosis morphological characteristics for onion skin cells within the bulb,garlic root cells and chicken lurid cells.Results:The optimal concentration of Ca2+and Na+were0.4mol/ L,the optimal induced time was8h,and the effect of CaCl2was better than that of ing methyl green and pyronin staining,we could see that the nucleus of onion skin apoptosis cells within the bulb,garlic root cells and chicken lurid apoptosis cells were dyed blue-violet,and their cytoplasm were red.Conclusion:The optimal ionic stress concentration and the best time were obtained,and the apoptosis was successfully detected.

［Key words］apoptosis;ionic stress;methyl green-pyronin;onion skin cells within the bulb;garlic root cells; chicken lurid cells

随着细胞凋亡检测技术的不断发展和日渐成熟，细胞凋亡检测的实验室教学也显得颇为重要。然而，用于科学研究的检测方法由于耗材、耗时、操作繁琐等原因不适合实验教学，所以研究如何快速诱导细胞凋亡，建立经济、简便、快速的检测细胞凋亡的实验室教学方法是目前实验教学中亟待解决的问题。细胞凋亡的诱导因素主要有物理因素、化学因素及生物因素。物理因子包括射线、水涝[1]、高渗、机械胁迫等；化学因子有H2O2[2]、营养因子[3]、NaCl、AlCl3、CaCl2等盐溶液[4-7]；生物因子涵盖激素、细胞生长因子等。我们选择NaCl、CaCl2胁迫诱导法进行细

胞凋亡的快速诱导，操作简便、经济，更适用于实验

室教学。采用甲基绿-派诺宁试剂可对动、植物细胞进行细胞凋亡的快速检测，凋亡细胞核染成蓝绿色，细胞质染成红紫色。

1材料与方法

1.1材料

洋葱鳞茎内表皮、大蒜根尖、鸡血。

离子胁迫诱导溶液：NaCl、无水CaC12、蒸馏水。

鸡血红细胞处理液：0.75%生理盐水、Hanks液。

甲基绿-派诺宁试剂：2%甲基绿水溶液6mL、5%派诺宁水溶液2mL、0.1mol/L醋酸盐缓冲液

（pH4.8）（0.1mol/L醋酸40mL，0.1mol/L醋酸钠60mL）16mL、蒸馏水16mL，临用时混合，存于冰

箱中，可用数次。

收稿日期：2011-06-29

作者简介：周良彬（1990-），男，本科生

通信作者：余晓丽，（E-mail）yxl1268@

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