血友病的基因治疗

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参考文献பைடு நூலகம்
1.王鸿利血友病的基 因治疗内科理论与实践2008年第3 卷第2期 2.李珍珠血友病的基因治疗医学理论与实践2008年第21 卷第3期 3.李珍珠血友病的基因治疗陕西能源职业技术学院学报 2008年第2期总第6期 4.李熙鸿，熊珍玉，陈力基因治疗遗传性疾病临床试验 的研究进展实用儿科临床杂志第21卷第3期2006年2月 5.侯玉香 肖小璞血友病基因治疗概述 中国输血杂志 2007年2月第2O卷第1期 6.张嫒血友病治疗研究进展 血栓与止血学 2006年第12 样第6期 7.孙海英，程海，李振宇，杜冰等重组狗凝血因子Ⅷ 的 慢病毒介导体外表达的研究中国实验血液学杂志JExp Hemaml 2007；15(4)
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1.改造目的基因 改造目的基因 2.选择合适载体 选择合适载体 3.靶细胞 靶细胞 4.动物实验 动物实验 5.临床试验 临床试验
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⒈改造目的基因
对FⅧ 基因的结构作适当改造，以 缩短其长度，提高其表达水平。 FⅧ 基因中B区所编码的结构对 FⅧ 的凝血活性并无显著用．BDD— FⅧ cDNA长度比野生型FⅧ 长度减少 70％ ．使其可完好地包装入常用载体 中，同时使FⅧ 的表达水平也较野生 型FⅧ 基因提高了5—10倍。
血友病的基因治疗
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引言
血友病是一种遗传性出血性疾病。发 病原因是由于患者的血液中先天缺乏某种 因子，根据缺乏因子的不同分为三种类型： 血友病A(缺乏FⅧ ，又称血友病甲)、血 友病B(缺乏Ⅸ，又称血友病乙)和血友病 C(缺乏FⅪ)。
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血友病甲和血友病乙均属x性 联隐I生遗传，一般由女性传递， 男性发病。 血友病C较少见，为常染色体 不完全隐性遗传，男女均可发病。 通常所说的血友病是指血友病A。
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⒌临床试验
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目前亟待解决的问题有： 目前亟待解决的问题有：
1．如何提高转基因效率? 2．如何才能使转基因持久表达? 3．如何预防和解决临床基因治疗中随机整合引 起癌变等严重不良反应? 4．最适合基因治疗的靶细胞是什么? 5．哪些疾病可以作为基因治疗等等?
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目前，常用的载体靶细胞 有肝细胞、骨髓间质细胞 (BMSC)、内皮细胞和肠上皮 细胞等。
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⒋动物实验 动物实验是血友病基因治疗不可缺少的环 节。自然存在的血友病动物甚为罕见，人工基 因剔除血友病动物模型已经制备成功，较理想 的是犬模型。 对动物实验进行全面评估、确定安全、 低(无)毒、持续高效表达且损伤最小，才能 进行人类的基因治疗。
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⒉选择合适载体 基因治疗时，需要合适的载体 (vectors)将目的基因“载”人靶 细胞中。理想的载体需符合无毒、 无抗原性、易于大量制备，且使 目的基因长期、稳定和高效表达。
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常用的载体有以下几种
1. 逆转录病毒载体(retroviral vectors，RV) 2. 慢病毒载体(1entiviral vectors，LV) 3. 腺病毒载体(adenovirus vectors，AV) 4. 腺相关病毒载体(adeno．Associatedvirusvector， AAV) 5. 非病毒载体
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血友病的基因治疗
血友病基因治疗(gene therapy)是通过 基因转导的方法，将正常的凝血因子Ⅷ (FⅧ )或因子Ⅸ(FIX)编码基因分别导人血 友病A或B患者体内，产生“基因替代” 或“基因修复”作用，以纠正血友病基因 缺陷．并持久分泌可满足止血需要的人 FⅧ(hFⅧ )或人FIX(hFIX)蛋白
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血热炽感
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发病机制的研究
FVIII基因定位于Xq28，全长186kb，由26 个外显子和25个内含子组成。已发现约 已发现约300多种 已发现约 多种 基因突变，基因型与表型密切相关。 基因突变，基因型与表型密切相关。点突变， 小的基因缺失引起轻度FVIII缺乏。终止密码子， 大的基因缺失，插入，移位，无义突变往往引 起严重的FVIII缺乏和临床表型
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FVIII 22内含子倒位突变引 内含子倒位突变引 严重缺乏是45%的重型血 起FVIII严重缺乏是 严重缺乏是 的重型血 友病A的分子发病机制 友病 的分子发病机制。最近在1% 的分子发病机制 的重型血友病A中还发现FVIII内含 子1倒位突变。
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这就是历史上著名 的血友病A家系 家系， 的血友病 家系， 其第一代致病基因 携带者为19世纪 携带者为 世纪 英国的维多利亚女 王，致病基因通过 通婚而传到欧洲多 个国家的皇室成员， 个国家的皇室成员， 因此，血友病A又 因此，血友病 又 被称为“皇室病” 被称为“皇室病”。
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已经有人成功构建了携带cFⅧ 的慢病毒载体，经过三质粒包装系 统包装后，感染靶细胞可获得cFⅧ 有效表达，为慢病毒载体介导血友 病A的基因治疗提供有价值的实验 依据。
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⒊靶细胞
选择靶细胞的原则是： 选择靶细胞的原则是： ①必须较坚固，能耐受处理易于由人体分 离和回输； ②具有增殖优势，生命周期长； ③易于受外源遗传物质的转化； ④选用反转录病毒载体时，目的基因表达 最好具有组织特异性的细胞。