食品中合成着色剂的测定06.07.02
DBS52 023-2017 食品安全地方标准 食品中13 种水溶性合成着色剂的测定.pdf
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DBS52/ 023—2017 AA
附录A （资料性附录） 13 种合成着色剂的参考保留时间
13种合成着色剂的参考保留时间见表A.1。
表A.1 13 种合成着色剂的参考保留时间（按波长排序）
合成着色剂名称 柠檬黄 日落黄
喹啉黄
酸性红 2G 诱惑红 胭脂红 苋菜红 赤藓红 食用绿 S 亮蓝 亮绿 靛蓝 专利蓝 V
3.3 标准品
3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.3.4 3.3.5 3.3.6 3.3.7 3.3.8 3.3.9
喹啉黄（CAS：8004-92-0）。 食用绿 S（CAS：860-22-0）。 亮绿（CAS：633-03-4）。 柠檬黄（CAS：1934-21-0）。 苋菜红（CAS：915-67-3）。 胭脂红（CAS：15876-47-8）。 诱惑红（CAS：25956-17-6）。 酸性红 2G（E128）（CAS：3734-67-6）。 赤藓红（CAS：568-63-8）。
5 分析步骤
5.1 试样制备
取50 g样品，用刀切成碎末，置食物粉碎机中，打碎，混匀，作为试样。
5.2 色素提取
称取试样4 g（准确至0.01 g）置100 mL容量瓶中，加提取液（3.2.4）约80 mL，至超声波中超声 30 min，取出放至室温，用提取液定容（V1），摇匀，转移至离心管中。以5000 r/min离心5 min，取 上清液滤过，弃去初滤液约10 mL，取续滤液50 mL（V2）至蒸发皿中，置水浴蒸至近干，残渣加50%乙 醇溶解，转移至10 mL（V3）量瓶，并用50%乙醇定容，摇匀转移至离心管中，5000 r/min离心5 min， 上清液，进高效液相色谱测定。
3.2 试剂配制
3.2.1 柠檬酸溶液：称取 20 g 柠檬酸（C6H8O7•H2O），加水至 100 mL，溶解混匀。 3.2.2 乙酸铵溶液（20 mmol/L）：称取 1.54 g 乙酸铵加水超声溶解定容至 1000 mL。 3.2.3 氨水：量取氨水 2 mL，加水至 100 mL，混匀。 3.2.4 提取液：95%乙醇-氨水-水（184+1+66，体积比）溶液，量取 95%乙醇 736 mL，氨水 4 mL，水 264 mL，混匀。
食品中合成着色剂的测定色素提取
3. 除杂质 组装好G3漏斗，将样品倒入漏斗，抽滤； PH4的水（70℃）洗涤3次，每次20mL（洗涤沉淀物）； 甲醇-甲酸洗涤3次，每次20mL（洗涤天然色素）； 400mL PH4的水洗涤。
4. 解吸附 更换抽滤瓶。用乙醇-氨水-水溶液洗涤三次（5mL、10mL、
5mL），收集解吸液。
5. 样品浓缩
器材： 烧杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽滤瓶*2、 针筒、温度计、5mL玻璃离心管 电子天平、水浴锅
三、实验步骤
1. 取样、脱气 称取饮料20g，倒入50mL烧杯，碳酸饮料用电炉加热除去
二氧化碳。（已脱气）。
2. 色素吸附 称取聚酰胺3g，用少许PH4的水（70℃）调成糊状，加入待
测样品，搅拌5min。
检测器：二极管阵列检测器
3.结果分析
保留时间（定性）：根据样品中各物质被 洗脱至检测器的时间差异来进行定性分析；
峰面积（定量）：根据样品峰面积与标准 品峰面积的比较来进行定量分析。
二、试剂与器材
试剂
配方
作用
聚酰胺粉
吸附
柠檬酸溶液
20g柠檬酸，100mL水溶解
调PH
PH 4的水（70℃） 水+柠檬酸溶液，调至PH=4， 洗涤 加热
解吸液倒入蒸发皿中，80℃水浴蒸发至约2mL，以乙酸 （一小滴）调节PH至6。收集样品至玻璃离心管，加水定容至 5mL。
食品中9种人工合成着色剂的检测
广东化工2019年第11期·196·第46卷总第397期食品中9种人工合成着色剂的检测吴嘉彦，戴辉(品测(上海)检测科技有限公司，上海201108)The Determination of Nine Synthetic Colors in FoodWu Jiayan,Dai Hui(Pince Testing Co.,Ltd.,Shanghai201108,China)Abstract:This study was based on the national standard method,and use ammonia-70%methanol(1︰99V/V)as extract solvent.Sample solution was purified by weak anion solid phase extraction,and finally carried out by the ultra high pressure liquid chromatography with ultraviolet detector.Analyses were separated by gradient elution and measured by the different waves.Nine types synthetic colors in food that could be measured simultaneously.The limitation of determination was0.2mg/kg,the range of calibration curves was0.2~10mg/L,the range of recoveries was85.0%~110.0%and the repeatability was2.0%~8.9%).Keywards:synthetic colors；colors in food；ultra high pressure liquid chromatography食品着色剂，又称食用色素，是种以给食品着色为主要目的的添加剂。
食品中人工合成着色剂的测定
食品中人工合成着色剂的测定序列号：DM-P1071、适用范围本方案适用于糕点、果酱、水果罐头、黑芝麻糊、果冻、冰淇淋、乳饮料、糖果和红酒中人工合成着色剂的检测；检出限：亮蓝是1.0 mg /kg，其他的是0.2 mg /kg；2、提取2.1 糕点、果酱(1) 取1.0 g样品，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 取下层残留物，加入10 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(3) 将下层残留物用10mL提取液A* 按照步骤(2)重复提取一次，合并三次上清液；(4) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约15 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。
2.2 水果罐头、黑芝麻糊(1) 取1.0 g样品，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 取下层残留物，加入10 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，合并两次上清液；(3) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约15 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。
2.3 冰淇淋(1) 取1.0 g样品，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约7 mL，再加入1.5 mL甲酸混匀，待净化。
2.4 果冻取1.0 g样品，加入10 mL水，40℃水浴超声提取15 min，加入5 mL甲醇和3 mL甲酸混匀，待净化。
2.5 乳饮料、糖果取1.0 g样品，加入10 mL水、5 mL甲醇和3 mL甲酸混匀，待净化。
2.6 红酒取1.0 mL样品，加入0.5 mL甲醇和0.3 mL甲酸混匀，待净化。
食品中合成着色剂的测定色素提取讲解材料
6. 上机测定 3000rpm离心5min，取上层10μL进高效液相色谱。
7. 结果分析 （1）保留时间 （2）含量计算
X——试样中着色剂含量（g/kg） V2——进样体积（mL） m——试样质量（g）
A——样液中着色剂含量（μg） V1——试样稀释总机体（mL） 结果保留两位有效数字
2020/4/18
检测器：二极管阵列检测器
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3.结果分析 保留时间（定性）：根据样品中各物质被 洗脱至检测器的时间差异来进行定性分析； 峰面积（定量）：根据样品峰面积与标准 品峰面积的比较来进行定量分析。
2020/4/18
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二、试剂与器材
器材： 烧杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽滤瓶*2、 针筒、温度计、5mL玻璃离心管 电子天平、水浴锅
加热脱气
抽滤过程注意 搅拌、倒废液
G3漏斗抽滤 70℃ PH4水，20mL，洗3次
Hale Waihona Puke 甲醇-甲酸，20mL，洗3次
目标物
70℃ PH4水，400mL洗涤 更换抽滤瓶
乙醇-氨水-水，洗三次，5ml、10mL、5mL
收集滤液，80℃水浴至2mL
清洗漏斗：自来水-盐酸-蒸馏水
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乙酸调PH至6，离心管定容至5mL，冰箱保存
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合成色素：用人工合成的方法从煤焦油中制取，或以苯、 甲苯、萘等芳香烃化合物为原料合成的有机色素。包括苋 菜红、柠檬黄、亮蓝、日落黄、诱惑红、赤鲜红等等。
2020/4/18
合成着色剂的潜在危害——致泻性、致癌性
国际：JECFA制定各种合成着色剂的ADI 我国：食品安全国家标准、食品添加剂使用标 准（GB2760-2011）
液相色谱法测定食品中合成着色剂
液相色谱法测定食品中合成着色剂作者：***来源：《食品安全导刊·下》2024年第05期摘要：目的：建立一种液相色谱法测定食品中合成着色剂的方法。
方法：用乙醇氨水溶液提取食品中的合成着色剂，经固相萃取柱净化后，用液相色谱仪（配二極管阵列检测器）测定，外标法定量。
结果：11种合成着色剂在0.2～10.0 μg·mL-1线性关系良好，线性相关系数为0.999 4～1.000 0，加标回收率为94.2%～109.6%，相对标准偏差在0.55%～5.52%。
柠檬黄、喹啉黄、日落黄、胭脂红、新红和赤藓红的检出限均为0.5 mg·kg-1，定量限均为1.5 mg·kg-1；苋菜红、诱惑红、亮蓝、酸性红和靛蓝的检出限均为0.3 mg·kg-1，定量限均为1.0 mg·kg-1。
结论：该方法的重复性好、灵敏度高、实用性强，可以同时测定食品中多种合成着色剂的含量。
关键词：合成着色剂；液相色谱法；固相萃取Determination of Synthetic Colorants in Food by Liquid ChromatographyZHU Xiaolei（Guangdong Dongguan Quality Supervision & Testing Center， Dongguan 523000， China）Abstract： Objective： To establish a method for the determination of synthetic colorants in food by liquid chromatography. Method： The synthetic colorants in food were extracted with ethanol ammonia solution， purified by solid phase extraction column， determined by liquid chromatography （ with diode array detector ）， and quantified by external standard method. Result： The linear range of 11 synthetic colorants was 0.2～10.0 μg·mL-1， the linear correlation coefficient was 0.999 4～1.000 0， the recovery rate was 94.2%～109.6%， and the relative standard deviation was 0.55%～5.52%. The detection limits of tartrazine， quinoline yellow， sunset yellow， carmine， new red and erythrosine were 0.5 mg·kg-1， and the limits of quantification were 1.5 mg·kg-1. The limits of detection of amaranth， allura red， brilliant blue， acid red and indigo were 0.3 mg·kg-1， and the limits of quantitation were1.0 mg·kg-1. Conclusion： The method has good repeatability， high sensitivity and strong practicability， and can simultaneously determine the content of various synthetic colorants in food.Keywords： synthetic colorants; liquid chromatography; solid-phase extraction着色剂在食品加工过程中可以改善食品的口感和外观，但过量使用会对人们的健康造成不良影响。
高效液相法测定食品中合成着色剂的确认报告
高效液相法测定食品中合成着色剂的确认报告1.方法依据本报告依据为： GB/T 5009.35-2003，中华人民共和国国家标准食品中合成着色剂的测定。
本法适用于食品中合成着色剂的测定。
2.方法原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
3.仪器和试剂3.1仪器器材3.1.1 高效液相色谱仪，带紫外检测器，254nm波长。
3.2试剂3.2.1 正己烷。
3.2.2 盐酸。
3.2.3 乙酸。
3.2.4 甲醇：经0.5μm滤膜过滤。
3.2.5 聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛。
3.2.6 乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取 1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45μm滤膜过滤。
3.2.7 氨水：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。
3.2.8 氨水-乙酸铵溶液（0.02mol/L）：量取氨水0.5mL，加乙酸铵溶液（0.02mol/L）至1000mL，混匀。
3.2.9 甲醇-甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。
3.2.10 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸(C6H8O7·H20),加水至100mL，溶解混匀。
3.2.11 无水乙醇-氨水-水(7+2+1)溶液：量取无水乙醇70mL，氨水20mL，水10mL，混匀。
3.2.12 三正辛胺正丁醇溶液(5%)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
3.2.13 饱和硫酸钠溶液。
3.2.14 硫酸钠溶液(2g/L)。
3.2.15 pH6的水:水加柠檬酸溶液调pH值到6。
3.2.16 合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝各0.100 g置100mL容量瓶中，加pH6水至刻度，配成水溶液（1.00mg/mL）。
3.2.17 合成着色剂标准使用液：临用时上述溶液（或将 3.2.16）加水稀释20倍，经0.45μm滤膜过滤，配成每毫升相当于50.0μg的合成着色剂。
食品中人工合成着色剂的测定
食品中人工合成着色剂的测定摘要：在日常试验用HPLC测定食品品中人工合成着色剂的国家标准GB/T5009.35- 2003时，我们发现该方法测定高蛋白质油脂等固态样品的前处理方法以及梯度洗脱程序存在一定的不足，因此，对该方法的前处理以及梯度洗脱程序加以改进，使得样品前处理简便快捷，六种色素回收率均在90%以上，而且延长了色谱柱的寿命。
关键词：人工合成着色剂 HPLC 食品前处理Through daily test with HPLC determination food products in the artificial synthesis colors agent of national standard GB/T5009.35-2003， we found law determination high protein oil，solid samples of processing method and gradient wash program exists must of insufficient， therefore， on the method of processing and gradient wash program be improved， makes samples processing easy shortcut， six kind of pigment recovery are in 90% above， and extended the spectrum column of life人工合成着色剂作为一种添加剂广泛用于食品中，GB2760-2011对其使用有明确的限量标准，但在市场上却时有发现这些人工合成着色剂被滥用，如染色馒头，所以对它的检测监管是相当重要的，测定这些人工合成着色剂方法有高效液相色谱法、薄层色谱法等[1] ，但无论哪一种方法都涉及样品前处理。
国标法第一法是用HPLC测定合成着色剂，将食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和峰面积比较进行定量[1] 。
食品中合成着色剂的测定标准操作规程
目录Table of Contents一、目的Objective -------------------------------------------------------------------------------------------2二、适用范围Scope -----------------------------------------------------------------------------------------2三、职责Responsibilities -----------------------------------------------------------------------------------2四、工作程序Contents --------------------------------------------------------------------------------------2五、相关文件Related Documents -------------------------------------------------------------------------3六、相关记录Related Records -----------------------------------------------------------------------------3七、历史修订记录Revisions ------------------------------------------------------------------------------3八、附录Appendix ------------------------------------------------------------------------------------------4文件审批记录Review And Approval1 目的为了规范食品中合成着色剂的检测。
2017年新版食品中和合成着色剂的测定
一、编制目的为规范食品中合成着色剂的检验方法，编制本指导书。
二、适用范围本作业指导书规定了饮料、配置酒、硬糖、蜜饯、淀粉软糖、巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂（不含铝色锭）的测定方法。
本作业指导适用于饮料、配制酒、硬糖、蜜饯、淀粉软糖、巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂（不含铝色锭）的测定。
三、编制依据GB5009.35-2016《食品中合成做着色剂的测定》四、实验原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
五、试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
5.1 试剂5.1.1甲醇（CH3OH):色谱纯。
5.1.2 正乙烷（C6H14）。
5.1.3 盐酸（HCl）。
5.1.4冰醋酸（CH3COOH）。
5.1.5 甲酸（HCOOH）5.1.6 乙酸铵（CH3COONH4）。
5.1.7柠檬酸（C6H8O7 〃H2O）。
5.1.8硫酸钠（Na2SO4）。
5.1.9 正乙醇（C4H10O）。
5.1.10 三正辛铵（C24H51N）。
5.1.11 无水乙醇(CH3CH2OH).5.1.12氨水（NH3〃H2O):含量20%-25%。
5.1.13 聚酰胺粉（尼龙6）：过200μm（目）筛。
5.2 试剂配置5.2.1 乙酸铵溶液( 0.02mo l/L):称取1.54g乙酸铵,加水至1000mL,溶解,经0.45μm微孔滤膜过滤。
5.2.2 氨水溶液:量取氨水2mL,加水至100mL,混匀。
5.2.3 甲醇-甲酸溶液( 6+4,体积比):量取甲醇60mL,甲酸40mL,混匀。
5.2.4柠檬酸溶液:称取20g柠檬酸,加水至100mL,溶解混匀。
5.2.5无水乙醇-氨水-水溶液(7+2+1,体积比):量取无水乙醇70mL、氨水溶液20mL、水10mL,混匀。
5.2.6 三正辛胺-正丁醇溶液:量取三正辛胺5mL,加正丁醇至100mL,混匀。
食品中合成着色剂的测定
食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定1范围本标准规定了饮料㊁配制酒㊁硬糖㊁蜜饯㊁淀粉软糖㊁巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂(不含铝色锭)的测定方法㊂本标准适用于饮料㊁配制酒㊁硬糖㊁蜜饯㊁淀粉软糖㊁巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂(不含铝色锭)的测定㊂2原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量㊂3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂3.1试剂3.1.1甲醇(C H3O H):色谱纯㊂3.1.2正己烷(C6H14)㊂3.1.3盐酸(H C l)㊂3.1.4冰醋酸(C H3C O OH)㊂3.1.5甲酸(H C O O H)㊂3.1.6乙酸铵(C H3C O O N H4)㊂3.1.7柠檬酸(C6H8O7㊃H2O)㊂3.1.8硫酸钠(N a2S O4)㊂3.1.9正丁醇(C4H10O)㊂3.1.10三正辛胺(C24H51N)㊂3.1.11无水乙醇(C H3C H2O H)㊂3.1.12氨水(N H3㊃H2O):含量20%~25%㊂3.1.13聚酰胺粉(尼龙6):过200μm(目)筛㊂3.2试剂配制3.2.1乙酸铵溶液(0.02m o l/L):称取1.54g乙酸铵,加水至1000m L,溶解,经0.45μm微孔滤膜过滤㊂3.2.2氨水溶液:量取氨水2m L,加水至100m L,混匀㊂3.2.3甲醇-甲酸溶液(6+4,体积比):量取甲醇60m L,甲酸40m L,混匀㊂3.2.4柠檬酸溶液:称取20g柠檬酸,加水至100m L,溶解混匀㊂3.2.5无水乙醇-氨水-水溶液(7+2+1,体积比):量取无水乙醇70m L㊁氨水溶液(3.2.2)20m L㊁水10m L,混匀㊂3.2.6三正辛胺-正丁醇溶液(5%):量取三正辛胺5m L,加正丁醇至100m L,混匀㊂3.2.7饱和硫酸钠溶液㊂3.2.8p H6的水:水加柠檬酸溶液调p H到6㊂3.2.9p H4的水:水加柠檬酸溶液调p H到4㊂3.3标准品3.3.1柠檬黄(C A S:1934-21-0)㊂3.3.2新红(C A S:220658-76-4)㊂3.3.3苋菜红(C A S:915-67-3)㊂3.3.4胭脂红(C A S:2611-82-7)㊂3.3.5日落黄(C A S:2783-94-0)㊂3.3.6亮蓝(C A S:3844-45-9)㊂3.3.7赤藓红(C A S:16423-68-0)㊂3.4标准溶液配制3.4.1合成着色剂标准贮备液(1m g/m L):准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄㊁日落黄㊁苋菜红㊁胭脂红㊁新红㊁赤藓红㊁亮蓝各0.1g(精确至0.0001g),置100m L容量瓶中,加p H6的水到刻度㊂配成水溶液(1.00m g/m L)㊂3.4.2合成着色剂标准使用液(50μg/m L):临用时将标准贮备液加水稀释20倍,经0.45μm微孔滤膜过滤㊂配成每毫升相当50.0μg的合成着色剂㊂4仪器和设备4.1高效液相色谱仪,带二极管阵列或紫外检测器㊂4.2天平:感量为0.001g和0.0001g㊂4.3恒温水浴锅㊂4.4 G3垂融漏斗㊂5分析步骤5.1试样制备5.1.1果汁饮料及果汁㊁果味碳酸饮料等:称取20g~40g(精确至0.001g),放入100m L烧杯中㊂含二氧化碳样品加热或超声驱除二氧化碳㊂5.1.2配制酒类:称取20g~40g(精确至0.001g),放入100m L烧杯中,加小碎瓷片数片,加热驱除乙醇㊂5.1.3硬糖㊁蜜饯类㊁淀粉软糖等:称取5g~10g(精确至0.001g)粉碎样品,放入100m L小烧杯中,加水30m L,温热溶解,若样品溶液p H较高,用柠檬酸溶液调p H到6左右㊂5.1.4巧克力豆及着色糖衣制品:称取5g~10g(精确至0.001g),放入100m L小烧杯中,用水反复洗涤色素,到巧克力豆无色素为止,合并色素漂洗液为样品溶液㊂5.2色素提取5.2.1聚酰胺吸附法:样品溶液加柠檬酸溶液调p H到6,加热至60ħ,将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状,倒入样品溶液中,搅拌片刻,以G3垂融漏斗抽滤,用60ħp H为4的水洗涤3次~5次,然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次~5次(含赤藓红的样品用5.2.2法处理),再用水洗至中性,用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次~5次,直至色素完全解吸,收集解吸液,加乙酸中和,蒸发至近干,加水溶解,定容至5m L㊂经0.45μm微孔滤膜过滤,进高效液相色谱仪分析㊂5.2.2液-液分配法(适用于含赤藓红的样品):将制备好的样品溶液放入分液漏斗中,加2m L盐酸㊁三正辛胺-正丁醇溶液(5%)10m L~20m L,振摇提取,分取有机相,重复提取,直至有机相无色,合并有机相,用饱和硫酸钠溶液洗2次,每次10m L,分取有机相,放蒸发皿中,水浴加热浓缩至10m L,转移至分液漏斗中,加10m L正己烷,混匀,加氨水溶液提取2次~3次,每次5m L,合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素),用正己烷洗2次,氨水层加乙酸调成中性,水浴加热蒸发至近干,加水定容至5m L㊂经0.45μm微孔滤膜过滤,进高效液相色谱仪分析㊂5.3仪器参考条件5.3.1色谱柱:C18柱,4.6mmˑ250mm,5μm㊂5.3.2进样量:10μL㊂5.3.3柱温:35ħ㊂5.3.4二极管阵列检测器波长范围:400n m~800n m,或紫外检测器检测波长:254n m㊂5.3.5梯度洗脱表见表1㊂表1梯度洗脱表时间m i n流速m L/m i n0.02m o l/L乙酸铵溶液%甲醇%01.095531.0653571.00100101.0010010.11.0955211.09555.4测定将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据保留时间定性,外标峰面积法定量㊂6分析结果的表述试样中着色剂含量按式(1)计算:X=cˑVˑ1000mˑ1000ˑ1000(1)式中:X 试样中着色剂的含量,单位为克每千克(g/k g);c 进样液中着色剂的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样稀释总体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);1000 换算系数㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留两位有效数字㊂7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂8其他方法检出限:柠檬黄㊁新红㊁苋菜红㊁胭脂红㊁日落黄均为0.5m g/k g,亮蓝㊁赤藓红均为0.2m g/k g (检测波长254n m时亮蓝检出限为1.0m g/k g,赤藓红检出限为0.5m g/k g)㊂。
食品中合成着色剂的测定06.07.02.
食品中合成着色剂的测定1 范围本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。
本标准适用于食品中合成着色剂的测定。
本方法检出限:新红5ng,柠檬黄4ng,苋菜红6ng,胭脂红8ng,日落黄7ng,赤鲜红18ng,亮蓝26ng,当进样量相当0.025g时,检出浓度分别为0.2mg/Kg,0.16mg/Kg,0.24mg/Kg,0.32mg/Kg,0.28mg/Kg,0.72mg/Kg,0.72mg/Kg,1.04mg/Kg.第一法高效液相色谱法2 原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或掖-液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
3 试剂3.1 正己烷。
3.2 盐酸。
3.3 乙酸。
3.4 甲醇:经0.5um滤膜过滤。
3.5聚酰胺粉(尼龙6:过200目筛。
3.6 乙酸铵溶液(0.02mol/L;称取1.54g乙酸铵,加水至1000mL,溶解,经0.45um滤膜过滤。
3.7 氨水:量取氨水2Ml.加水100Ml.混匀。
3.8 氨水-乙酸铵溶液(0.02,mol/L:称取氨水0.5mL,加乙酸铵溶液(0.02mol/L至1000mL,混匀。
3.9 甲醇-甲酸(6+4溶液:量取甲醇60mL,混匀。
3.10 柠檬酸溶液:称取20g柠檬酸,加水至100mL,溶解混匀。
3.11 无水乙醇-氨水-水(7+2+1溶液:量取无水乙醇70mL,氨水20mL,水10mL,混匀。
3.12 三正辛胺正丁醇溶液(5%:量取三正辛胺5mL,加正丁醇至100mL,混匀。
3.13 饱和硫酸钠溶液。
3.14 硫酸钠溶液(2g/L。
3.15 pH6的水:水加柠檬酸溶液pH值到6。
3.16 合成着色剂标准溶液:准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄,日落黄,苋菜红,胭脂红,新红,赤鲜红,亮蓝,靛蓝各0.100g,置100mL容量瓶中,加Ph6水到刻度,配成水溶液(1.00mg/mL。
食品检测中合成着色剂的测定方法
食品检测中合成着色剂的测定方法作者：王峰来源：《中国科技博览》2016年第14期[摘要]随着社会的快速进步，经济的迅猛增长，食品行业也迅速的繁荣发展起来，随着人们生活水平与质量的不断提高，食品种类与形态更是形形色色。
许多食品生产厂商为了追求更多的经济效益，满足消费者对食品味觉和视觉的需求，会在食品中增加各种添加剂。
民以食为天，食品的安全问题现今已成为社会的大众关注的重点。
为了保障市场上各种食品不会对消费者的健康造成恶劣的影响，相关部门需要加强管理与监测。
合成着色剂是食品检测环节中的关键环节，其检测、鉴定方式是否科学合理直接影响检测的效果。
[关键词]食品检测；合成着色剂；测定方法中图分类号：F407.44 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）14-0204-01引言在众多的食品安全问题发生之后，食品安全问题已经成为全民关注的热门话题。
双汇，上海福喜，三鹿等著名品牌都曾出现过严重的食品安全问题，这也让公众对食品的安全产生极大的担忧。
结合现今的食品市场的具体情况来看，食品安全的确存在较多的问题，一些不良的商家为了谋取更多的利润，往往忽视食品的品质与安全，违背国家相关规范和标准，在食品中添加超量的食品合成着色剂，这些不符合标准的食品也必然会给消费者带来较大的危害。
一、合成着色剂的简要概述1.1 着色剂的分类着色剂是食品添加剂中的重要一员，按照来源可以分为天然着色剂和合成着色剂两种。
天然着色剂顾名思义就是从动物以及植物中提取的天然色素，大多是植物的色素。
最常见的天然着色剂有辣椒红、红曲红。
姜黄、胡萝卜素以及焦糖色素等。
其特点是不易分散且相溶性不高，一般价格高于合成着色剂。
由于食品行业的发展十分迅速，天然色素的价格、易褪色的性质等方面都无法满足现代食品工业的要求。
十九世纪开始，人工合成着色剂登上了历史的舞台，深受食品生产商的青睐。
由于合成着色剂是化工生产的产品，因此颜色较之天然色素更胜一筹，且颜色持久性更长，价格更低。
高效液相色谱测定食品中合成着色剂方法的探讨
高效液相色谱测定食品中合成着色剂方法的探讨
邢文静;李海建
【期刊名称】《现代测量与实验室管理》
【年(卷),期】2009(017)004
【摘要】探讨了具有灵敏度高、混合着色剂分离好和速度快等优点的高效液相色谱法对五种人工合成着色剂的检测.实验表明,在应用GB/T5009.35-2003第一法过程中,控制各实验条件:吸附、解吸附、浓缩温度及体积,梯度洗脱,变波长检测,含亮蓝的样品不用甲醇一甲酸溶液洗脱,各着色剂分离度良好,回收率满意.
【总页数】3页(P3-5)
【作者】邢文静;李海建
【作者单位】河北省保定市产品质量监督检验所,保定,071051;河北省保定市产品质量监督检验所,保定,071051
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7+2
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食品中合成着色剂的测定1 范围本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。
本标准适用于食品中合成着色剂的测定。
本方法检出限：新红5ng，柠檬黄4ng,苋菜红6ng，胭脂红8ng,日落黄7ng，赤鲜红18ng，亮蓝26ng，当进样量相当0.025g时，检出浓度分别为0.2mg/Kg,0.16mg/Kg,0.24mg/Kg,0.32mg/Kg,0.28mg/Kg,0.72mg/Kg,0.72mg/Kg,1.04mg/Kg.第一法高效液相色谱法2 原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或掖-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
3 试剂3.1 正己烷。
3.2 盐酸。
3.3 乙酸。
3.4 甲醇：经0.5um滤膜过滤。
3.5聚酰胺粉（尼龙6：过200目筛。
3.6 乙酸铵溶液（0.02mol/L）;称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45um滤膜过滤。
3.7 氨水：量取氨水2Ml.加水100Ml.混匀。
3.8 氨水-乙酸铵溶液（0.02,mol/L）:称取氨水0.5mL，加乙酸铵溶液（0.02mol/L）至1000mL，混匀。
3.9 甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60mL，混匀。
3.10 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。
3.11 无水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取无水乙醇70mL，氨水20mL，水10mL，混匀。
3.12 三正辛胺正丁醇溶液（5％）：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
3.13 饱和硫酸钠溶液。
3.14 硫酸钠溶液（2g/L）。
3.15 pH6的水：水加柠檬酸溶液pH值到6。
3.16 合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100％质量的柠檬黄，日落黄，苋菜红，胭脂红,新红，赤鲜红，亮蓝，靛蓝各0.100g，置100mL容量瓶中，加Ph6水到刻度，配成水溶液（1.00mg/mL）。
3.17 合成着色剂的标准使用液：临用时上述溶液（或将3.16）加水稀释20倍，经0.45um滤膜过滤，配成每毫克相当于50.0um的合成着色剂。
4 仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器，254nm波长。
5 分析步骤5.1 式样处理5.1.1 橘子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.0g-40.0g,放入100mL烧杯中，含二氧化碳式样加热除去二氧化碳。
5.1.2 配制酒类：称取20.0g-40.0g,放100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，加热除去乙醇。
5.1.3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取5.00g-10.00g粉碎式样，放入100mL 小烧杯中，加水30mL，温热溶解，若式样溶液pH值较高，用柠檬酸溶液调pH 值到6左右。
5.1.4 巧克力豆及着色糖衣制品：称取5.00g-10.00g，放入100mL小烧杯中，用水反复洗涤色素，到式样无色素为止，合并色素漂洗液为式样溶液。
5.2 色素提取5.2.1 聚酰胺吸附法：式样溶液加柠檬酸溶液调pH值到6，加热至60℃，将1g 聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入式样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃ pH=4的水洗涤3次到5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次到5次（含赤藓红的式样用5.2.2法处理），再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次到5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。
经0.45um滤膜过滤，取10uL进高效液相色谱仪。
5.2.2 液-液分配法（适用于含赤藓红的式样）：将制备好的式样溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺正丁醇溶液（5％）10mL-20mL，振摇提取，分取有机相，重复提取至有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，再次10mL，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL，转移到分液漏斗中，加60mL正己烷，混匀，加氨水提取2次到3次，每次5mL，合并氨水溶液层（含水溶性酸性色素），用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL。
经滤膜0.45um过滤，取10uL进高效液相色谱仪。
5.3 高效液相色谱参考条件5.3.1 柱：YWG-C18 10um不锈钢柱4.6mm(I,d)*250mm.5.3.2 流动相：甲醇：乙酸铵溶液（pH=4，0.02mol/L）。
5.3.3 梯度洗脱：甲醇：20％-35％，3％/min；35％-98％，9％/min;98％继续6min.5.3.4 流速：1mL/min.5.3.5 紫外检测器，254nm波长。
5.4 测定取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
5.5 结果计算式样中着色剂的含量按式（1）进行计算。
X=（A*1000）/[m*V2/V1*1000*1000] 1式中：X---式样中着色剂的含量，单位为克每千克（g/kg），A---样液中着色剂的质量，单位为微克（ug），V1---式样稀释总体积，单位为毫克（mL），V2---进样体积，单位为毫升（mL），M---式样质量，单位为克（g）。
计算结果保留两位有效数字。
5.6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。
5.7 其他第二法薄层色谱法6 原理水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下被吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后，与标准比较定性、定量。
最低检出量为50ug。
点样量为1uL时，检出浓度约为50mg/kg。
7 试剂7.1 石油醚：沸程60℃-90℃。
7.2 甲醇。
7.3 聚酰胺粉（尼龙6）：200目。
7.4 硅胶G。
7.5 硫酸：（1+10）。
7.6 甲醇-甲酸溶液：（6+4）。
7.7 氢氧化钠溶液（50g/L）。
7.8 海砂：先用盐酸（1+10）煮沸15min，有水洗至中性，再用氢氧化钠溶液（50g/L）煮沸15min,用水洗至中性，再于105℃干燥，贮于具玻璃塞的瓶中，备用。
7.9 乙醇（50％）。
7.10 乙醇-氨溶液：取1mL氨水，加乙醇（70％）至100mL。
7.11 pH6的水：用柠檬酸溶液（20％）调节到Ph6。
7.12 盐酸（1+10）。
7.13 柠檬酸溶液（200g/L）。
7.14 钨酸钠溶液（100g/L）。
7.15 碎瓷片：处理方法同7.8。
7.16 展开剂如下：7.16.1 正丁醇-无水乙醇-氨水（1％）（6+2+3）：供纸色谱用。
7.16.2正丁醇-吡啶-氨水（1％）（6+2+4 ）：供纸色谱用。
7.16.3 甲乙酮-丙酮-水（7+3+3）：供纸色谱用。
7.16.4 甲醇-氨水-乙醇（5+1+10）：供薄层色谱用。
7.16.5 甲醇-氨水-乙醇（5+1+10）：供薄层色谱用。
7.16.6 柠檬酸钠溶液（25g/L）-氨水-乙醇（8+1+2）：供薄层色谱用。
7.17 合成着色剂标准溶液：按3.16方法，分别配制着色剂的标准溶液浓度为每毫升相当于1.0mg。
7.18 着色剂标准使用液：临用时吸取色素标准溶液各5.0mL，分别置于50mL容量瓶中，加pH6的水稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于0.10mg着色剂。
8 仪器8.1 可见分光光度计8.2 微量注射器或血色素吸管。
8.3 展开槽，25cm*6cm*4cm.。
8.4 层析缸。
8.5 滤纸：中速滤纸，纸色谱用。
8.6 薄层板：5cm*20cm.。
8.7 电吹风机。
8.8 水泵。
9 分析步骤9.1 式样处理9.1.1 果味水、果子露、汽水：称取50.0g式样于100mL烧杯中，汽水需要加热除去二氧化碳。
9.1.2 配制酒：称取100.0g式样于100mL烧杯中，加碎瓷片数块，加热除去乙醇。
9.1.3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖：称取5.00g或10.0g粉碎的式样，加30.0mL水，温热溶解，若样液pH值较高，用柠檬酸溶液（200g/L）调至Ph4左右。
9.1.4 奶糖：称取10.0g粉碎均匀的式样，加30mL乙醇-氨溶液溶解，置水浴上浓缩至约20mL，立即用硫酸溶液（1+10）调至微酸性，再加1.0mL硫酸（1+10），加1mL钨酸钠溶液（100g/L），使蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液。
9.1.15 蛋糕类：称取10.0g粉碎均匀的式样，加海砂少许，混匀，用热风吹干用品（用手摸已干燥即可），加入30mL石油醚搅拌。
放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，全部倒入G3垂融漏斗或普通漏斗中，用乙醇-氨溶液提取色素，直至着色剂全部提完，以下按9.1.4自“置水浴上浓缩至约20mL……“起依法操作。
9.2 吸附分离将处理后所得的溶液加热至70℃，加入0.5g-1.0g聚酰胺粉充分搅拌，用柠檬酸溶液（200g/L）调pH到4，使着色剂完全被吸附，如溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉。
将吸附着色剂的聚酰胺全部转入G3垂融漏斗中过滤（如用G3垂融漏斗过滤可以用水泵慢慢地抽滤）。
用pH4的70度水反复清洗，每次20mL，边洗边搅拌，若含有天然着色剂。
再用甲醇-甲酸溶液洗涤1次到3次，每次20mL，至洗液无色为止。
再用70度水多次洗涤至流出的溶液为中性。
洗涤过程中要充分搅拌，然后用乙醇-氨溶液分次解吸全部着色剂，收集全部解吸液，于水浴上渠氨。
如果为单色，则用水准确稀释至50mL，用分光光度法进行测定。
如果为多种着色剂混合液，则进行纸色谱或薄层色铺法分离后测定，即将上述溶液置水浴上浓缩到2mL后移入5mL容量瓶中，用百分之50的乙醇洗涤容器，洗液并入容量瓶中并稀释到刻度。
9.3 定性9.3.1 纸色谱取色谱用纸，在距底边2cm的起始线上分别点3ul-10ul式样溶液，1ul-2ul着色剂标准溶液，挂于分别盛有7.16.1、7.16.2的展开剂的层析缸中，用上行法展开，待溶剂前沿展到15cm处，将滤纸取出于空气中凉干，与标准斑比较定性。
也可取0.5mL样液，在起始线上从左到右点成条状，纸的左边点着色剂标准溶液，依法展开，凉干后先定性后再供定量用。
靛蓝在碱性条件下易褪色，可用7.16.3展开剂。
9.3.2 薄层色谱9.3.2.1 薄层板的制备称取1.6g聚酰胺粉、0.4g可溶性淀粉及2g硅胶G，置于合适的研钵中，加15ml水研匀后，立即置涂布器中铺成厚度为0.3mm的板。
在室温凉干后，于80℃干燥1小时，置干燥器中备用。
9.3.2.2 点样离板底边2cm处将0.5ml样液从左到右点成与底边平行的条状，板的左边点2um色素标准溶液。
9.3.2.3 展开苋菜红与胭脂红用7.16.4展开剂，靛蓝与亮蓝用7.16.5展开剂，柠檬黄与其他着色剂用7.16.6展开剂。
取适量展开剂倒入展开槽中，将薄层板放入展开，待着色剂明显展开后取出，凉干，与标准斑比较，如Rf相同即为同一色素。