HIV抗体检测与质量控制

核酸试验 或2-4周后 随访
报告HIV-1 抗体阴性
报告HIV-1 抗体阳性
根据情况 进一步 检测HIV-2
图5 免疫印迹试剂（WB/RIBA）试验流程
抗体确证试验检测报告
HIV抗体WB及 RIBA/LIA试验结果报告： （1）符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳 性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。符合HIV-2抗 体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性”，并按规定做好 检测后咨询和疫情报告。 （2）符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性”。 如疑似“窗口期”感染，建议 2-4 周后随访或进一步做 HIV 核酸检测，尽早明确诊断。 （3）符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确 定”，在备注中应注明“2-4周后复检”或尽快做核酸检测。
4.由于仪器或加样头造成的交叉污染
ELISA测定中的干扰因素

内源性干扰因素 外源性干扰因素
内源性干扰因素

人血清标本中含有非特异性干扰物质，可
以不同程度影响检测结果。常见的有：类
风湿因子、补体、嗜异性抗体、医源性诱
导的抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药
物小分子等
外源性干扰因素

常常是由于血标本的采集、贮存等不当
问题 可能的原因（非试剂盒本身的原因） 1.加样本及试剂量不准 2.加样过快，孔间发生污染 3.加错样本 测定的重复性差 4.加样本和试剂时，加在孔壁上部非包被区 5.温育时间、洗板、显色时间不一致 6.酶标仪滤光片问题
ELISA试验中可能出现的问题和原因分析
问题 可能的原因（非试剂盒本身的原因） 1.漏加酶结合物 白板（阳性对照 2.洗液配制问题，量筒不干净含酶抑制物 不显色） 3.漏加显色剂A或B 4.终止液当显色剂使用 1.洗板不干净 全部板孔都有显 2.加底物的吸头被酶污染 色 3.洗板液受酶污染
病毒现状


在世界范围内导致了近1200万人的死亡，超过 3000万人受到感染。在感染后会整合入宿主细 胞的基因组中，而抗病毒治疗并不能把病毒根 除。在2004年底，全球有约四千万被感染并与 人类免疫缺陷病毒共同生存的人，流行状况最 为严重的仍是撒哈拉以南非洲。 1986年7月25日，世界卫生组织（WHO）发布 公报，国际病毒分类委员会会议决定，把艾滋 病病毒改称为人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus）简称HIV。
补充试验包括抗体确证试验 [ 免疫印迹试验、 条带 / 线性免疫试验，特定条件下的替代检测（三 种酶联免疫、三种快速试验或酶联加快速试验）， 免疫层析和核酸检测试验（核酸定性检测和核酸定 量检测试验）
HIV抗体确证试验
确证试验的试剂：
必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有 效期内的试剂。
确证样品：
快速检测（RT）及其它检测试验
（1）免疫渗滤试验：斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验

以硝酸纤维膜为载体
HIV抗原点状固定在膜上
加待检样品 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点
有效试验的质控点必须显色
斑点免疫胶体金快速诊断试验
（2）免疫层析试验：

以硝酸纤维膜为载体
用发光或荧光仪测定结果

快速检测（RT）及其它检测试验
酶联免疫吸附试验（ELISA）

百度文库
HIV抗体检测试剂（第三代）：检测HIV-1/2抗
体

HIV抗原抗体联合检测试剂（第四代）：可同时
检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体

用酶标仪测定结果
有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定

ELISA试验中可能出现的问题和原因分析
病毒特点

HIV病毒主要攻击人体的辅助T淋巴细胞系统； 一旦侵入机体细胞，病毒会和细胞整合在一起 终生难以消除；病毒基因变化多样；广泛存在 于感染者的血液、精液、阴道分泌物、唾液、 尿液、乳汁、脑脊液、有神经症状的脑组织液 ，其中以血液、精液、阴道分泌物中浓度最高 ；对外界环境的抵抗力较弱，对乙肝病毒有效 的消毒方法对艾滋病病毒消毒也有效；感染者 潜伏期长、死亡率高；艾滋病病毒的基因组比 已知任何一种病毒基因都复杂。
有反应报 告HIV-1 核酸阳性
无反应报 告HIV-1 核酸阴性
报告 低于检 测限
图８
ＨＩＶ核酸试验流程
核酸补充试验报告



定性检测结果有反应，报告“HIV-1核酸阳性”；无反 应，报告“HIV核酸阴性”。 定量检测结果低于检测限，报告低于检测限； 检测结果大于5000CPs/ml，报告检测值； 检测结果低于等于5000CPs/ml，尽快再次严格按核 酸检测的要求采样检测，报告检测值。 临床医生可结合临床及流行病史、CD4+T淋巴细胞检 测值或者HIV-1抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊 断。
适用于： HIV感染产妇所生婴幼儿； 母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现， 临床怀疑HIV感染的儿童。

婴儿12个月时进行HIV抗体检测 阴性排除感染，纳入正常儿童保健； 阳性者继续追踪随访，至18个月再次进行HIV抗体检 测，结果阴性排除感染。
HIV抗体检测的要点

WB不确定结果

原因：HIV感染早期 HIV感染晚期 非特异性反应 污染 处理：核酸检测 2-4周后随访

重采血
临床诊断相关的检测策略
HIV-1核酸检测
HIV-1核酸定性检测
HIV-1核酸定量试验
低于检测限
高于检测限
>5000cps /ml,报告 检测值 ≤5000cps/ ml重新采 样 检测

实验中质量控制
仪器校准 选择合格试剂，采用正确的检测方法 标准程序 质控品的准备 开展质控图质控

实验后质量控制
结果记录 记录核对 结果解释 记录保存
实验前质量控制
样品的采集：实验室应根据待测项目选用适当的方 法采集样品。 抗体检测可采集血清、血浆和全血； CD4+T淋巴细胞检测可采集K3EDTA或肝素或枸橼酸 钠抗凝全血，并在24小时内室温送检； HIV-1病毒载量测定可采集EDTA或枸橼酸钠(ACD) 抗凝全血，最好在6小时内离心分离血浆和血细胞。 将分离的血浆分装到2-3支，冰冻保存，在冻存管 上编号。做好样品处理记录并注明分装时间。
HIV抗原线状固定在膜上 待检样品（血液、唾液或尿液）沿着固相载体迁移 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带 有效试验的质控带必须显色
第四代快速试剂（SD）：可区分抗原抗体的检测
快速检测（RT）及其它检测试验 全血样品
加50ul样品于样品垫中
手指血方法
15分钟内读取结果
加一滴缓冲液
静脉血方法
质控条 病人条
根据目的选择检测方法及检测策略。 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 结果判定以试剂盒说明书为标准。 筛查试验有反应，须作补充试验
质量控制 质量控制是指为确保实验工作正常 进行而在每一次实验过程中必须采取 的各种措施。以保证检验结果达到允 许的准确度。
质量控制

实验前质量控制
正确的标本采集和处理 正确及时的运送样品 实验前正确地处理和保存样品
实验前质量控制
样品的保存： 用于HIV抗体检测的血清和血浆样品,应存放于20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放 于2-8℃； 用于CD4+T淋巴细胞检测的样品应在室温下 （1823℃）保存，避免极端温度（冷冻或过热）, 样品采集时间超过72h则不可检测； 用于病毒载量检测的样品的保存条件应根据血浆 检测时间而定，4天内可在4℃暂时保存，3个月以 内冻存于-20℃以下，3个月以上应置于-70℃以下 保存。血浆样品冻融次数不可超过3次。每次冻融 在样品上标明。

注意:不同厂家、不同方法临界值计算公式不同
酶联免疫吸附试验（ELISA）

优点：准确性高、价格低廉、判断结果
标准客观、结果便于记录和保存

用途：流行病学监测及临床大量标本的
检测
化学发光或免疫荧光试验


采用发光或荧光底物 既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体 酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧 光底物 用发光仪或荧光仪测定结果
HIV抗体筛查样品


血清/血浆/全血 滤纸干血斑 口腔黏膜渗出液 尿液
筛查试剂


国家食品药品监督管理局注册批准 有效期内 酶联免疫试剂应批批检合格 选择敏感性和特异性高的试剂
筛查方法


酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验 （CIA/IFA） ：采用发光或荧光底物，
体外生存


人类免疫缺陷病毒在人体外生存能力极 差，不耐高温，抵抗力较低，离开人体 不易生存，常温下只可生存数小时至数 天。 HIV对热敏感。在56℃条件下30分钟即 失去活性，但在室温保存7天，仍保持活 性。
灭活方法

国际卫生组织推荐对艾滋病病毒灭活加 热100℃持续20分钟，效果较理想。
病毒形态

假阳性
非特异性反应
操作失误

处理：筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有 反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为 “HIV抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应 一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染 待确定”，不能出具阳性报告。
补充试验
是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体或 者核酸确定艾滋病病毒感染的检测方法。
可采用血清、血浆、滤纸干血斑
确证试验方法：
免疫印迹试验、条带/线性免疫试验，特定条件下 的替代检测（三种酶联免疫、三种快速试验或酶联加快 速试验），免疫层析或免疫渗滤试验
条带免疫试验（RIBA）/重组免疫印迹法（ 万泰）
抗体确证试验检测流程 免疫印迹试验（WB/RIBA）
不确定
阴性
阳性
出现HIV-2指示带
HIV抗体筛查试验 ELISA试验 化学发光法 快速检测 补充试验 抗体确证试验：免疫印迹试剂（WB）和条 带免疫试验（RIBA） 核酸试验：核酸定性和核酸定量试验
HIV抗体检测目的



HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括 临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括 献血员筛查和原料血浆筛查。 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变 化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。
试剂-1
有反应
无反应
试剂1双份或双孔检测或两 种试剂* 均有反应 一有反应 ,一无反应 均无反应
补充实验
报告HIV抗体阴性
图2 使用抗体检测试剂的检测流程
*两种试剂可以是原有试剂加另一种试剂， 也可以是两种不同试剂。
HIV抗体筛查结果的意义及处理

阴性：真阴性
假阴性 阳性：真阳性
未感染HIV病毒
注意窗口期 感染HIV病毒
HIV抗体检测与质量控制
滋病毒（人类免疫缺陷病毒）

艾滋病毒（即人类免疫缺陷病毒）是一种逆转 录病毒，它具有极强的迅速变异能力，这一特 征不仅使人体的免疫系统难以抵御其侵害，而 且给特效治疗药物和预防用疫苗的研制带来困 难。艾滋病毒直接侵犯人体的免疫系统，破坏 人体的细胞免疫和体液免疫。它主要存在于感 染者和病人的体液（如血液、精液、阴道分泌 物、乳汁等）及多种器官中，它可通过含HIV 的体液交换或器官移植而传播。
快速检测（RT）及其它检测试验
优点: 快速 单份标本检测 不需额外试剂或设备 操作简便
缺点:

肉眼判断较主观 价格较贵 结果不易保存（建议拍照保存）
HIV筛查试剂的选择


检测目的
实验设施条件


价格
其他：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等 等
临床诊断相关的检测策略 使用抗体检测试剂的筛查检测流程
所致。如标本溶血、细菌污染、标本贮
存时间过长、凝集不全、反复冻融等
分析ELISA测定中出现的假阳性或假阴性结 果时，需综合考虑试剂因素、操作因素和 标本因素等。
ELISA法结果判断

临界值概念: 将检测的阳性和（或）阴性对照的
OD值代入计算公式计算出来的判断阳性和阴性结 果的界值

判断标准:标本OD值与临界值的比值大于等于 1(S/CO≥1)为阳性
18个月以下婴幼儿的HIV诊断
HIV抗体



母亲 HIV 抗体经胎盘进入胎儿，出生时新生 儿和婴儿早期抗体阳性，不一定是感染 出生时母亲的抗体，80~90% 在生后 9~12 个 月消失，出生后 18 个月基本上全部消失 18 个月后儿童 HIV抗体仍然阳性，视为自身 感染产生的抗体
婴幼儿HIV感染的抗体检测

人类免疫缺陷病毒直径约120纳米，大致 呈球形。
致病机制

HIV选择性的侵犯带有CD4分子，主要有 T淋巴细胞、单核巨噬细胞、树突状细胞 等。
传播途径



HIV感染者是传染源，曾从血液、精液、 唾液、尿液、阴道分泌液、眼泪、乳汁 等分离得HIV。 性接触传播 血液传播 母婴传播
疾病诊断