全国艾滋病检测技术规范解读
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X 3.新增补充试验概念,其内容包括抗体确证试验（WB 、 RIBA/LIA等）和核酸试验（定性和定量试验）；
X 4.完善HIV-1抗原检测一章，细化了定性试验的种类，完善 了相应检测方法的质控；
X 5.完善了检测报告； X 6. 取消实验室生物安全和艾滋病检测实验室质量管理。
新版规范目录
一、样品采集和处理 二、HIV抗体检测 三、HIV-1新发感染检测 四、HIV-1抗原检测 五、HIV 核酸检测 六、艾滋病病毒感染实验室检测策略 七、HIV-1基因型耐药检测 八、CD4+和CD8+T淋巴细胞检测 九、HIV-1的分离培养 十、附表
HIV抗体筛查试验方法
X 2.化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA） 采用发光或荧光底物，可使用血液(包含血清
和血浆)、尿液样品，既可检测抗体，也可联合 检测抗原抗体。
HIV抗体筛查试验方法
X 3.快速检测（RT）及其它试验 可使用血液、口腔黏膜渗出液，操作简便快速，
适用于应急、门诊、急诊、VCT及检测点等。在10～ 30分钟内出结果。 X 3.1明胶颗粒凝集试验（PA）： X 3.2免疫渗滤试验 X 3.3免疫层析试验
• When is a 3rd test needed in high prevalence
settings? No • 3rd test should have superior specificity; • Using 3rd test as a “tiebreaker” is NOT
recommended.
z 减少需要随访的不确定结果：以前的程序需要使用WB 对所有初始检测有反应的标本进行确证，有大约1020%的标本被诊断为HIV抗体不确定。新的程序用能够 区分HIV-1和HIV-2抗体的试剂进行补充检测，可大幅 度减少不确定结果。
2014年美国CDC推荐HIV检测新策略
HIV-1 抗原 抗体联合检 测试剂
试剂或能区分HIV-1与HIV-2感染的确证试剂检测。
第六章 艾Βιβλιοθήκη Baidu病病毒感染 实验室检测策略
X 疫情监测相关的检测策略及结果报告； X 临床诊断相关的检测策略及结果报告； X 血液筛查相关的检测策略及结果报告。
提出新策略之目的
z 提高对急性期HIV感染诊断的能力：发现并及时治疗和 干预急性期HIV感染者对于控制个体的病程以及减少传 播都具有重要的意义。
包被了HIV 抗 原的检测板
加入患者的 血清
加入酶标 记抗体
显色剂
阳性
阴性
HIV抗原抗体检测ELISA： 双抗体(双抗原)夹心法
HIV Ag检测：
HIV Ag
P
固相
血清 / 血浆 结合物 1 / 结合物 2
TMB / H2SO4
HIV 1 Ab : 抗p24单抗 ………..… 生物素标记的抗HIV单抗 …….. 亲和素标记的过氧化物酶结合物
HIV抗体确证试验使用附表2（HIV抗体确证检测报告）。 （1）符合HIV-1抗体阳性或HIV-2抗体阳性判断标准，报 告“HIV-1抗体阳性”或“HIV-2抗体阳性”，并做好检测 后咨询和疫情报告。 （2）符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性”。 如疑似“窗口期”感染，建议做核酸检测或2-4周后随访。 （3）符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确 定”，在备注中注明“2-4周后复检”或尽快做核酸检测。
《全国艾滋病检测技术规范》 （2015年修订版）解读
郭志宏 浙江省疾控中心
规范修改背景
X 1. 艾滋病疫情的不断发展，出现早期（急性期） 和晚期病例大幅度增加等，原有规范不能满足 目前艾滋病检测工作的实际需求。
X 2.国家相关政策的出台，扩大检测，诊断即治 疗等，要求检测提供更多更好的方法。
X 3. 艾滋病检测新技术不断进展。出现了抗原抗 体联合诊断试剂和核酸检测技术的应用等等。
快速法抗体检测质控
X 1.试剂内对照--质控带。 X 2.室内质控品 X 采用商用质控品或自制，包含抗体阳性样
品和阴性样品。
X 下列情况需做：更换试剂厂家或批号；更 换检测人员；更换包装。除此之外，建议每个 检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检 测量大于50份样品，至少应作2次质控。
HIV抗体筛查报告
疫情监测相关的检测策略及结果报告
HIV抗体确证试验方法
X 条带/线性免疫试验（RIBA/LIA） 采用间接法检测样品中的抗HIV-1/2特异性抗体。 HIV-1/HIV-2不同的重组抗原片段包被在膜条上，
加入待测样品后，其中的相应抗体与膜条上抗原发生 特异性的免疫反应；随后加入抗人IgG（碱性磷酸酶 标记）和底物后，膜条相应部位出现肉眼可见的条带, 按照说明书判定标准，判断待测样品为阳性、阴性或 不确定。
HIV低流行地区诊断HIV感染血清学检测策略
WHO HIV 诊断指南 • 2P0re1v5alence
• < 5% in the population to be tested.
• Test reagent
• A1: RDTs, EIAs • A2: RDTs, EIAs or NAT • A3: EIAs, WB or NAT
Multispot HIV-1/HIV-2 Rapid Test
2004年11被美国FDA批准，快速定性检测并区分HIV-1与HIV-2抗体 对照点呈阳性的前提下，HIV-1两个点均阳性判断为HIV-1抗体阳性，只有一个 点阳性判断为HIV-1抗体不确定；HIV-2的点呈阳性判断为HIV-2抗体阳性
HIV抗体确证试验方法
X 免疫印迹试验（WB）
采用间接法检测样品中的抗HIV-1/2特异性抗体。
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分离分子量大小不等的 HIV-1蛋白，然后再转移到硝酸纤维素膜上。待测样品加 至硝酸纤维素膜上，血清中若含有HIV抗体，就会与膜条 上抗原带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，相应 位置出现条带显色情况, 按照说明书判定标准，判断待测 样品为阳性、阴性或不确定。
HIV Ab检测:
IgG, IgA, IgM
P
固相
血清 / 血浆
稀释液/结合物2
TMB / H2SO4
HIV 1 Ag : HIV 2 Ag:
gp 160 重组蛋白 ……………………………….. gp 41 多肽 过氧化物酶结合物 功能性保守多肽 ………………… ..................... 功能性保守多肽过氧化物酶结合物 gp36多肽 ………………………………….. gp 36 多肽过氧化物酶结合物
HIV-1/-2 抗体鉴别 试剂
HIV-1核 酸检测 试剂
HIV高流行地区诊断HIV感染血清学检测策略
WHO HIV 诊断指南
2015 • Prevalence (national or subnational)
• ≥5% in the population to be tested.
• Test reagent
第二章 HIV抗体检测
HIV抗体检测目的： 1.“诊断”目的是为了确定个体HIV感染状况，包括
临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。 2.“血液筛查”目的是为了防止输血传播HIV，包括
献血员筛查和原料血浆筛查。 3.“监测”目的是为了解不同人群HIV感染率及其变
化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。
• A2 comprising a different antigen preparation to avoid false cross‐reactivity with A1
CFDA：2014年 明确规定申报检测原理和抗原出处
• Result:
A1 A2 A3
Report
1
+
+ + HIV‐positive
对复检结果有反应，既可以选择抗体确证，也可选择核酸诊断； 将WB不确定结果随访由4周改到2-4周进行核酸检测；
⑶新增加抗原检测流程图；新增核酸检测流程图； ⑷新增特定条件下抗体检测策略； ⑸新增血液HIV血清学筛查试验流程和血液核酸HIV试验流程；
主要修改、增补和完善内容
X 2.增加了HIV-1新发感染检测一章，增加了新的亲和力检测 新发感染的方法；
• A1: RDTs, EIAs • A2: RDTs, EIAs • A3: EIAs, WB
• ResulAt1: A2 A3
Report
1 + + N HIV‐positive
2+
‐
+ HIV‐inconclusive
3+
‐
‐
HIV‐negative* HIV‐inconclusive**
N: not need *: A1 = 2nd or 3rd generation reagent **: A1 = 4th generation reagent
质量控制
酶免或发光法抗体检测的室内质量控制
X 1. 试剂盒内部对照 X 2. 室内质控品 X 3. Levey-Jennings质控图
当外部质控品的S/CO值超出 x
x x
+ 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制
质控规则 实验室在报告结果之前必须评价质控数据，目前有许多质控规则 ，常用的是12S和13S规则。 （1）告警（12S）：当外部质控品的S/CO值超出2s范围时，系统 处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若 将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。 （2）失控（13S）：当外部质控品的S/CO值超出+3s范围时，系统 处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机 误差或外部质控品 稳定性下降所致。
HIV-2抗体确证检测报告
X 使用能够区分HIV-1和HIV-2的抗体确证试剂，根据试剂盒说 明书直接判定结果;
X 使用以检测HIV-1抗体为主的抗体确证试剂，只有1条HIV-2指 示带，当出现HIV-2指示带时，根据具体情况决定： （1）HIV-1抗体阳性，报告HIV-1抗体阳性，不推荐再检测
HIV-2； （2）HIV-1抗体不确定或阴性，需再用单纯的HIV-2抗体确证
X 4. 国际上发达国家的艾滋病指南也不断更新， WHO也出台了很多技术性文件。
主要修改、增补和完善内容
X 1.完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；将检 测流程全部放进本章，规范了流程图； ⑴增加了疫情监测的HIV匿名无关联试验流程； ⑵修改HIV抗体筛查流程，增加了可以用原有试剂双孔复检，
与WB确证具有同等的效能，切具有更好的敏感性和特异性
HIV快速确证试剂和确证小型仪器
•2013年4月，美国Bio-Rad公司确证检测的快速试剂 （Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory System，左图）。
国内尚无快速确证试剂研发的立项课题，有正在 进行该项目探索研究的企业。
HIV抗体筛查试验报告使用附表1（HIV抗体筛查检测 报告）。筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反 应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗 体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应 需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能 出具阳性报告。
HIV抗体确证报告
不同体外诊断检测方法和窗口期
Source: Rosenberg et al., 2015 (1).
HIV抗体筛查试验方法
X 1. 酶联免疫吸附试验（ELISA） ELISA多为HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联
合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和 HIV-1/2抗体。
HIV抗体检测ELISA：双抗原夹心法
补充试验：
通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、抗原或者核 酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。
包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带/线性免疫试验， 特定条件下的替代检测）和核酸试验（核酸定性和定量试验）
替代检测：三种酶联免疫试验、三种快速试验或酶联免 疫加快速试验
特定条件：高流行地区（流行率大于5%）、高危人群 （如男男同性恋，吸毒人群）、三种试剂均经过使用地区中 心实验室评价。
2
+
+ ‐ HIV‐inconclusive
3
+
‐ Repeat Test with A1 & A2
‐
‐
HIV‐negative
+
‐
HIV‐negative*
+
‐
HIV‐inconclusive**
*: A1 = 2nd or 3rd generation reagent **: A1 = 4th generation reagent
X 4.完善HIV-1抗原检测一章，细化了定性试验的种类，完善 了相应检测方法的质控；
X 5.完善了检测报告； X 6. 取消实验室生物安全和艾滋病检测实验室质量管理。
新版规范目录
一、样品采集和处理 二、HIV抗体检测 三、HIV-1新发感染检测 四、HIV-1抗原检测 五、HIV 核酸检测 六、艾滋病病毒感染实验室检测策略 七、HIV-1基因型耐药检测 八、CD4+和CD8+T淋巴细胞检测 九、HIV-1的分离培养 十、附表
HIV抗体筛查试验方法
X 2.化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA） 采用发光或荧光底物，可使用血液(包含血清
和血浆)、尿液样品，既可检测抗体，也可联合 检测抗原抗体。
HIV抗体筛查试验方法
X 3.快速检测（RT）及其它试验 可使用血液、口腔黏膜渗出液，操作简便快速，
适用于应急、门诊、急诊、VCT及检测点等。在10～ 30分钟内出结果。 X 3.1明胶颗粒凝集试验（PA）： X 3.2免疫渗滤试验 X 3.3免疫层析试验
• When is a 3rd test needed in high prevalence
settings? No • 3rd test should have superior specificity; • Using 3rd test as a “tiebreaker” is NOT
recommended.
z 减少需要随访的不确定结果：以前的程序需要使用WB 对所有初始检测有反应的标本进行确证，有大约1020%的标本被诊断为HIV抗体不确定。新的程序用能够 区分HIV-1和HIV-2抗体的试剂进行补充检测，可大幅 度减少不确定结果。
2014年美国CDC推荐HIV检测新策略
HIV-1 抗原 抗体联合检 测试剂
试剂或能区分HIV-1与HIV-2感染的确证试剂检测。
第六章 艾Βιβλιοθήκη Baidu病病毒感染 实验室检测策略
X 疫情监测相关的检测策略及结果报告； X 临床诊断相关的检测策略及结果报告； X 血液筛查相关的检测策略及结果报告。
提出新策略之目的
z 提高对急性期HIV感染诊断的能力：发现并及时治疗和 干预急性期HIV感染者对于控制个体的病程以及减少传 播都具有重要的意义。
包被了HIV 抗 原的检测板
加入患者的 血清
加入酶标 记抗体
显色剂
阳性
阴性
HIV抗原抗体检测ELISA： 双抗体(双抗原)夹心法
HIV Ag检测：
HIV Ag
P
固相
血清 / 血浆 结合物 1 / 结合物 2
TMB / H2SO4
HIV 1 Ab : 抗p24单抗 ………..… 生物素标记的抗HIV单抗 …….. 亲和素标记的过氧化物酶结合物
HIV抗体确证试验使用附表2（HIV抗体确证检测报告）。 （1）符合HIV-1抗体阳性或HIV-2抗体阳性判断标准，报 告“HIV-1抗体阳性”或“HIV-2抗体阳性”，并做好检测 后咨询和疫情报告。 （2）符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性”。 如疑似“窗口期”感染，建议做核酸检测或2-4周后随访。 （3）符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确 定”，在备注中注明“2-4周后复检”或尽快做核酸检测。
《全国艾滋病检测技术规范》 （2015年修订版）解读
郭志宏 浙江省疾控中心
规范修改背景
X 1. 艾滋病疫情的不断发展，出现早期（急性期） 和晚期病例大幅度增加等，原有规范不能满足 目前艾滋病检测工作的实际需求。
X 2.国家相关政策的出台，扩大检测，诊断即治 疗等，要求检测提供更多更好的方法。
X 3. 艾滋病检测新技术不断进展。出现了抗原抗 体联合诊断试剂和核酸检测技术的应用等等。
快速法抗体检测质控
X 1.试剂内对照--质控带。 X 2.室内质控品 X 采用商用质控品或自制，包含抗体阳性样
品和阴性样品。
X 下列情况需做：更换试剂厂家或批号；更 换检测人员；更换包装。除此之外，建议每个 检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检 测量大于50份样品，至少应作2次质控。
HIV抗体筛查报告
疫情监测相关的检测策略及结果报告
HIV抗体确证试验方法
X 条带/线性免疫试验（RIBA/LIA） 采用间接法检测样品中的抗HIV-1/2特异性抗体。 HIV-1/HIV-2不同的重组抗原片段包被在膜条上，
加入待测样品后，其中的相应抗体与膜条上抗原发生 特异性的免疫反应；随后加入抗人IgG（碱性磷酸酶 标记）和底物后，膜条相应部位出现肉眼可见的条带, 按照说明书判定标准，判断待测样品为阳性、阴性或 不确定。
HIV低流行地区诊断HIV感染血清学检测策略
WHO HIV 诊断指南 • 2P0re1v5alence
• < 5% in the population to be tested.
• Test reagent
• A1: RDTs, EIAs • A2: RDTs, EIAs or NAT • A3: EIAs, WB or NAT
Multispot HIV-1/HIV-2 Rapid Test
2004年11被美国FDA批准，快速定性检测并区分HIV-1与HIV-2抗体 对照点呈阳性的前提下，HIV-1两个点均阳性判断为HIV-1抗体阳性，只有一个 点阳性判断为HIV-1抗体不确定；HIV-2的点呈阳性判断为HIV-2抗体阳性
HIV抗体确证试验方法
X 免疫印迹试验（WB）
采用间接法检测样品中的抗HIV-1/2特异性抗体。
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分离分子量大小不等的 HIV-1蛋白，然后再转移到硝酸纤维素膜上。待测样品加 至硝酸纤维素膜上，血清中若含有HIV抗体，就会与膜条 上抗原带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，相应 位置出现条带显色情况, 按照说明书判定标准，判断待测 样品为阳性、阴性或不确定。
HIV Ab检测:
IgG, IgA, IgM
P
固相
血清 / 血浆
稀释液/结合物2
TMB / H2SO4
HIV 1 Ag : HIV 2 Ag:
gp 160 重组蛋白 ……………………………….. gp 41 多肽 过氧化物酶结合物 功能性保守多肽 ………………… ..................... 功能性保守多肽过氧化物酶结合物 gp36多肽 ………………………………….. gp 36 多肽过氧化物酶结合物
HIV-1/-2 抗体鉴别 试剂
HIV-1核 酸检测 试剂
HIV高流行地区诊断HIV感染血清学检测策略
WHO HIV 诊断指南
2015 • Prevalence (national or subnational)
• ≥5% in the population to be tested.
• Test reagent
第二章 HIV抗体检测
HIV抗体检测目的： 1.“诊断”目的是为了确定个体HIV感染状况，包括
临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。 2.“血液筛查”目的是为了防止输血传播HIV，包括
献血员筛查和原料血浆筛查。 3.“监测”目的是为了解不同人群HIV感染率及其变
化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。
• A2 comprising a different antigen preparation to avoid false cross‐reactivity with A1
CFDA：2014年 明确规定申报检测原理和抗原出处
• Result:
A1 A2 A3
Report
1
+
+ + HIV‐positive
对复检结果有反应，既可以选择抗体确证，也可选择核酸诊断； 将WB不确定结果随访由4周改到2-4周进行核酸检测；
⑶新增加抗原检测流程图；新增核酸检测流程图； ⑷新增特定条件下抗体检测策略； ⑸新增血液HIV血清学筛查试验流程和血液核酸HIV试验流程；
主要修改、增补和完善内容
X 2.增加了HIV-1新发感染检测一章，增加了新的亲和力检测 新发感染的方法；
• A1: RDTs, EIAs • A2: RDTs, EIAs • A3: EIAs, WB
• ResulAt1: A2 A3
Report
1 + + N HIV‐positive
2+
‐
+ HIV‐inconclusive
3+
‐
‐
HIV‐negative* HIV‐inconclusive**
N: not need *: A1 = 2nd or 3rd generation reagent **: A1 = 4th generation reagent
质量控制
酶免或发光法抗体检测的室内质量控制
X 1. 试剂盒内部对照 X 2. 室内质控品 X 3. Levey-Jennings质控图
当外部质控品的S/CO值超出 x
x x
+ 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制
质控规则 实验室在报告结果之前必须评价质控数据，目前有许多质控规则 ，常用的是12S和13S规则。 （1）告警（12S）：当外部质控品的S/CO值超出2s范围时，系统 处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若 将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。 （2）失控（13S）：当外部质控品的S/CO值超出+3s范围时，系统 处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机 误差或外部质控品 稳定性下降所致。
HIV-2抗体确证检测报告
X 使用能够区分HIV-1和HIV-2的抗体确证试剂，根据试剂盒说 明书直接判定结果;
X 使用以检测HIV-1抗体为主的抗体确证试剂，只有1条HIV-2指 示带，当出现HIV-2指示带时，根据具体情况决定： （1）HIV-1抗体阳性，报告HIV-1抗体阳性，不推荐再检测
HIV-2； （2）HIV-1抗体不确定或阴性，需再用单纯的HIV-2抗体确证
X 4. 国际上发达国家的艾滋病指南也不断更新， WHO也出台了很多技术性文件。
主要修改、增补和完善内容
X 1.完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；将检 测流程全部放进本章，规范了流程图； ⑴增加了疫情监测的HIV匿名无关联试验流程； ⑵修改HIV抗体筛查流程，增加了可以用原有试剂双孔复检，
与WB确证具有同等的效能，切具有更好的敏感性和特异性
HIV快速确证试剂和确证小型仪器
•2013年4月，美国Bio-Rad公司确证检测的快速试剂 （Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory System，左图）。
国内尚无快速确证试剂研发的立项课题，有正在 进行该项目探索研究的企业。
HIV抗体筛查试验报告使用附表1（HIV抗体筛查检测 报告）。筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反 应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗 体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应 需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能 出具阳性报告。
HIV抗体确证报告
不同体外诊断检测方法和窗口期
Source: Rosenberg et al., 2015 (1).
HIV抗体筛查试验方法
X 1. 酶联免疫吸附试验（ELISA） ELISA多为HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联
合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和 HIV-1/2抗体。
HIV抗体检测ELISA：双抗原夹心法
补充试验：
通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、抗原或者核 酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。
包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带/线性免疫试验， 特定条件下的替代检测）和核酸试验（核酸定性和定量试验）
替代检测：三种酶联免疫试验、三种快速试验或酶联免 疫加快速试验
特定条件：高流行地区（流行率大于5%）、高危人群 （如男男同性恋，吸毒人群）、三种试剂均经过使用地区中 心实验室评价。
2
+
+ ‐ HIV‐inconclusive
3
+
‐ Repeat Test with A1 & A2
‐
‐
HIV‐negative
+
‐
HIV‐negative*
+
‐
HIV‐inconclusive**
*: A1 = 2nd or 3rd generation reagent **: A1 = 4th generation reagent