苏丹红检测方法
苏丹红
二、苏丹红的结构性质
• 苏丹红是一种人工合成的偶氮类、油溶性 的化工染色剂，1896年科学家达迪将其命 名为苏丹红并沿用至今，苏丹红被大量的 用于生物化学领域，用于机油、汽车、蜡、 鞋油等工业产品。随着人们对苏丹红结构 及致毒性的逐步了解，国际癌症研究机构 （IARC）将苏丹红列为第三类可致癌物质， 这类物质缺乏足够的直接使人类致癌的证 据，但是具有潜在的致癌危险。
用正己烷定容至25mL,此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、 2.56ug/ml,绘制标准曲线。
6.计算
GB/T 19681---2005:按公式（1）计算苏丹红的含量
R= C * V / M-----(1)
R----样品中苏丹红含量，单位为毫克每千克（mg/kg）
C----由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度，单位为微克每毫升 （ug/mL）
五、苏丹红的检测方法
时间 0 10.0 25.0 32 35 40
流动相A% 25 25 0 0 25 25
流动相B% 75 75 100 100 72 75
曲线 线性 线性 线性 线性 线性 线性
五、苏丹红的检测方法
5.2标准曲线
• 吸取标准储备液0、0.1 、0.2 、 0.3 、 0.4 、0.8 、1.6ml ，
五、苏丹红的检测方法
五、苏丹红的检测方法
•5.色谱条件
5.1 仪器条件 色谱柱：Zorbax SB-C18 3.5um 4.6mm*150mm 流动相： 溶剂A 0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85:15
食品中苏丹红的快速检测方法课件
苏丹红检测的意义
提高公众健康水平
提升食品安全监管水平
通过苏丹红检测，能够减少含有苏丹 红的食品对公众健康的危害，提高整 体健康水平。
苏丹红检测技术的不断发展和完善， 有助于提高食品安全监管机构的监管 能力和水平。
规范食品行业秩序
加强苏丹红检测能够促使食品企业自 律，遵守食品安全法规，规范行业秩 序。
趋势分析
对多次实验结果进行趋势分析， 了解苏丹红含量的变化趋势。
因素分析
分析影响实验结果的各种因素， 为改进实验方法提供依据。
结果解读与报告撰写
结果解读
对实验结果进行深入解读，理解苏丹红在食品中 的存在状态和潜在风险。
报告撰写
根据实验结果和分析结论撰写实验报告，包括数 据记录、结果分析和建议措施等。
根据实验需要，准备适量的苏丹 红标准品、提取剂、缓冲液等试 剂，确保其质量和纯度。
实验操作步骤
提取
将处理好的样品加入适 量的提取剂中，进行充 分搅拌、纯 化，去除杂质，提高检
测准确性。
显色反应
加入适量的缓冲液和苏 丹红标准品，进行显色
反应。
检测
使用分光光度计在 550nm波长处测定吸光 度值，根据标准曲线计
算苏丹红含量。
05
实验结果分析
数据处理与结果判定
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括 平均值、标准差等。
结果判定
根据实验数据判定食品中是否含有 苏丹红，以及苏丹红的含量是否超 标。
可信度评估
对实验结果的可信度进行评估，确 保结果的准确性和可靠性。
结果分析方法
对比分析
将实验结果与标准值进行对比， 分析差异原因。
气相色谱-质谱联用法
总结词
有毒有害物质的快速检测
第二十页，编辑于星期五：十点 十一分。
（3）消毒液有效氯的快速测定
消毒液在食品加工过程中使用广泛，控制消毒液的有效浓度是一个重要的环节。 目前使用较多的是含氯消毒液，测定有效氯的方法有两种试纸法。
方法：于盛有2mL牛乳的试管中加入2mL玫瑰红试剂，乳中无碱性物质则呈黄色，有碱性物质时呈玫瑰红色，其碱性物质的存在量与反应颜色的深浅成正比。
0.00 0.03 0.06 0.09
相当于掺入碳酸钠的百分含量
第五页，编辑于星期五：十点 十一分。
5、牛乳中淀粉和麦芽糊精的快速检测
意义：牛乳掺水后乳密度会降低，很容易检出，加入淀粉和麦芽糊精后乳密度会升高，但营养成份并未增加。检测淀粉和麦芽糊精是否存在，主要是检测牛乳是否掺假。 方法：取5mL牛乳注入试管中（有条件时稍稍煮沸，待冷却后），加入数滴淀粉检测试液，如有淀粉和麦芽糊精存在时，则有蓝色或青蓝色沉淀物出现。
第十七页，编辑于星期五：十点 十一分。
三、 食品加工贮藏安全度的快速测定
食品中心温度、食品加工和贮藏温度 消毒间紫外线辅照强度 消毒液有效氯 游离性余氯
第十八页，编辑于星期五：十点 十一分。
（1）食品中心温度、加工和贮藏温度的快速测定
细菌生长最适宜的温度在10～60℃范围之内。因此,食品的储存温度应控制在10℃以下。食品加工应当烧熟煮透其中心温度应在70℃以上并保持一定的时间才可杀灭细菌。 在烹饪后至食用前超过2小时的食品，应当在高于60℃或低于10℃的条件下存放。需要冷藏的熟制品，应当放凉后在0～10℃之间冷藏。 煎炸食品时，油温最高不得大于250℃，一般不得超过190℃。 温度对于食品的质量起着重要作用。国家卫生部《餐饮业食品卫生管理办法》中对各环节的温度控制有明确的规定 。采用食品中心温度计和红外线瞬时测温仪可有效加以监控。
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红陈 英（周至县食品药品检验检测中心，陕西西安 710400）摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。
通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。
在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。
苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0μg/kg。
本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
关键词：超高效液相-串联质谱法；苏丹红；非法添加苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。
市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。
目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。
本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。
本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
1 材料与方法1.1 仪器与试药液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；配有电喷雾离子源（ESI）；LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。
苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的薄层层析
苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的薄层层析一、苏丹红(Sudan Red)苏丹红是一种常用的红色染料，被广泛应用于食品、化妆品、药品、指甲油等业界，能够赋予产品艳丽的色泽。
然而苏丹红也被认为是致癌物质之一。
为了避免食品安全问题，许多国家和地区禁止苏丹红的使用。
在分析检测方法方面，薄层层析技术是一种比较简单、快捷、经济的方法。
下面是针对苏丹红的薄层层析过程：试料：苏丹红试剂：正洁净丙酮、橄榄油(甘油)、硅胶G工具：薄层层析板、层析罐、玻璃棒、显色剂方法：1.将硅胶G加入根据需要加入橄榄油(甘油)加至湿润状态。
2.将硅胶G加至薄层层析板上。
3.将湿润硅胶G平均的铺置于薄层层析板上，待干燥。
4.取适量的苏丹红加入正洁净丙酮中，使其完全溶解（尽量不要加多）。
0.2克左右即可。
5.将Sudan Red加入到上一步得到的层析板中。
6.晾干后，将层析板塞于等温层析罐中，上面加入适量的正洁净丙酮，将罐盖好。
7.将等温层析罐放入直线扫描层析仪中，使其等温30-60分钟。
8.测定苏丹红的吸收峰，记录其波长和相对强度。
9.采用显色剂可更加准确的测定吸收峰的波长和相对强度，进而进行定量分析。
苏丹黄是一种荧光亮黄色的有机颜料，被广泛用于染料、涂料、食品、饮料等多个领域，亦为一种致癌物质。
因此，人们对其分析检测越来越重视。
下面是苏丹黄的薄层层析方法：试剂：苯酚，四氯化碳1.取得薄层层析板，并在上面用硅胶G均匀的抹上一层。
2.将苯酚和四氯化碳混合，其配比为1：1，得到的混合溶液为显色剂。
3.将苏丹黄与混合溶液按需要的含量混合，制成样品溶液。
4.将样品溶液放在层析板边缘上，慢慢靠近层析板中心。
5.用含四氯化碳小槽将薄层层析板放入液面中，控制好溶液高度。
6.让样品溶液慢慢上升，进行层析分离。
7.分离结束后，将层析板晾干。
8.将晾干的层析板放入紫外灯下进行检测，通过温和化学反应，苏丹黄将被氧化，产生出淡黄色的荧光。
9.将层析板放入显色剂中，用显色剂复过程进行检测，最后根据相对迁移率计算定量分析。
食品中苏丹红的检测
高效液相色谱法（HPLC）
我国国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管 理委员会发布的高效液相色谱法在欧洲委员会公 布的检测方法基础上做了改进。 国标法的提取液由乙腈改为正己烷，将液体、浆 状样品混合均匀，固体样品磨细后用正己烷提取、 过滤，必要时加入无水硫酸钠脱水后稍加温溶解， 用旋转蒸发仪蒸发浓缩，然后慢慢加入氧化铝层 析柱中萃取净化后用丙酮转移定容待测。
苏丹红的分析技术
高效液相色谱法（HPLC）
迄今为止，国际上食品中苏丹染料的常用检测方 法是高效液相色谱法，而高效液相-质谱联用法和 前面所述的电喷雾解析电离质谱法等用于检测结 果的确证。 欧洲委员会推荐的液相色谱法是由样品经匀桨化 或粉碎后，加入乙腈（Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ加入 氯仿）提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪 进行色谱分析。以波长可变的紫外-可见检测器定 性和定量。
苏丹红的结构，合成与危害
合成方法 苏丹红属偶氮染料，可用芳胺做为前体通过重氮 化反应生成重氮离子再通过亲电取代反应和萘酚 偶联体还原酶的作用下在体内生成相应的 胺类物质。在多项化学与生物实验中发现，苏丹 红的致毒性与代谢生成的胺类及萘酚类物质有关。 Sudan I在体内的代谢如下图所示。
苏丹红的结构，合成与危害
分类及结构 苏丹红为亲脂性偶氮化合物，外观呈暗红 色或深黄色片状晶体，难溶于水，主要包 括Ⅰ、Ⅱ、III 和Ⅳ4 种类型。其中II、III 和IV 均为I 的化学衍生物。结构和IUPAC命 名如下所示
苏丹红的结构，合成与危害
Sudan Sudan Sudan Sudan
苏丹红的分析技术
高效液相色谱法（HPLC）
检测波长：Sudan Ⅰ、Sudan Ⅱ在478nm 波长有 最大吸收，Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ在520nm波长有 最大吸收。 Sudan Ⅰ的检测限是13微克/升，定量的最低浓 度为106微克/升，在辣椒粉样品中的添加回收率 高于90％。
三食品中苏丹红染料的测定
实验十、食品中苏丹红染料的测定标准依据：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定（高效液相色谱法）一、目的要求学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。
二、实验原理苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。
苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。
三、仪器与试剂（一）试剂1、乙腈色谱纯2、丙酮色谱纯、分析纯3、甲酸分析纯4、乙醚分析纯5、正己烷分析纯6、无水硫酸钠分析纯7、层析柱管：1cm (内径) 5cm (高)的注射器管。
8、层析用氧化铝（中性100目~200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL 水降活，均匀后密封，放置12h 后使用。
9、氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。
10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。
11、标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。
12、标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg （按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250m L。
（二）仪器1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）2、分析天平：感量0.1mg3、旋转蒸发仪4、均质机或匀浆机5、粉碎机6、离心机7、0.45μm有机滤膜四、实验步骤（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。
（二）样品处理：1、红辣椒粉等粉状样品称取1g ~ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入10mL ~20mL 正己烷，超声处理5min，过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。
红辣椒粉中苏丹红Ⅰ的检测
A
4
u j A u A 4 r A A
r
eff
A
u c W
u A
A
4
W
4
u As
A s
As
4
V W Cs M AS
A=2349、As=2955、Cs=1.52ug/mL、 V=5mL、M=5.0000g代入上式得
W=1.208mg/kg
A
误差分析：
V W Cs M AS A
0.001 u j (M ) 0.00058( g ) 3
2 2 (M) (M) u u j u f (M) 0.00058( g )
有效自由度
eff
4 u C 4 4 4 u A s s uV 4 u M u A As Cs V A M A A M s Cs V
u c W 4 W
公式简化为
其中
A
j
u A 4
样品峰面积 序 号 1
样品
2
3
4
5
6
7381 2290 2229 2345 2465 2437 2316 2349 积
标准工作液峰面积
序 号
1
2
3
4
5
6
7
8
平 均
峰面 2931 2989 3005 2985 2907 2954 2981 2888 2955 积
样品中的苏丹红Ⅰ的含量：
已知：
苏丹红Ⅰ纯度95%±1%；液相色谱面积不确
苏丹红检测方法
苏丹红检测方法检测方法 (中文)欧洲委员会健康与消费者保护综合委员会第四分委员会―生产与流通过环节的食品安全第三部―物理化学危害物监督新方法声明:03/99主题:苏丹红检测方法的更正以前的3/92新方法声明在此更正(原方法4.12.1存在错误:正确的数字是100ml而不是50ml)代办处已收到来自法国的方法声明内容如下:辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析O.Veretout,L.Demesse,L.Szymanski1 应用范围本方法涉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红1号、苏丹红2号、苏丹红3号、苏丹红4号、苏丹橙B、苏丹红7B和胭脂树橙的检测。
2 定义苏丹红是应用于诸如油彩、蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成着色剂，一般不溶于水易溶于有机溶剂，胭脂树橙是一种食品着色剂但不允许在辣椒粉和调味品中使用。
3 方法要点上述着色剂经乙腈提取后，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。
以波长可变的紫外―可见检测器定性与定量。
4 试剂与标准品除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，实验用水均为蒸馏水、去离子水或相同质量的分析用水。
4.1 乙腈色谱纯4.2 水色谱级4.3 冰醋酸4.4 氯仿4.5 苏丹红1号(Aldrich Chemical Company)4.6 苏丹红2号(Acros organics 化工合成有机物)4.7苏丹红3号(Acros organics 化工合成有机物)4.8苏丹红4号(Acros organics 化工合成有机物)4.9苏丹橙B(Acros organics 化工合成有机物)4.10 苏丹红7B(Acros organics 化工合成有机物)4.11 胭脂树橙(特殊合成产品)4.12 标准溶液4.12.1 标准贮备液称取50.0mg着色剂(按产品标明的纯度折算成纯着色剂)并按以下方式移入100ml容量瓶定容。
着色剂溶解和转移溶剂定容溶剂苏丹红1号乙腈乙腈苏丹红2号乙腈乙腈苏丹红3号氯仿乙腈苏丹红4号氯仿乙腈苏丹橙B 乙腈乙腈苏丹红7B 乙腈乙腈胭脂树橙氯仿氯仿 4.12.1 标准工作液取上述标准贮备液各5ml移入50ml容量瓶中以乙腈定容，再分别从以上容量瓶中吸取0.5ml、1ml、2.5ml、4ml和5ml溶液移入50ml容量瓶中以乙腈定容，此时溶液中各种着色剂的浓度分别为0.5,1,2.5,4和5μg/ml。
苏丹红快速检测试剂盒使用说明
苏丹红快速检测试剂盒使用说明一、本方法适用于非食用色素苏丹红（1、2、3、4号）的现场快速检测。
二、样品处理：1、取约1克样品于试管中，加入2～5ml乙酸乙酯，振摇提取1分钟，静置5分钟，2、取一张层析纸，在端底向上1cm处、平行相隔1cm、用铅笔画出将要点样的五个+字线或点五个小点。
3、用四支毛细管分别沾取苏丹红1、2、3、4号对照液少许（毛细管尖端不多于0.5厘米容积距离）点在层析纸1、2、3、4号+字线上，另取1支毛细管沾取静置后已经染色的乙酸乙酯样品溶液（体积不限），将其点在层析纸5号+字线上。
（溶液的颜色较浅时，可在每次点样斑点挥干后重复点样），斑点直径控制在5毫米内。
三、测定：取一个约200ml的烧杯，加入约5ml展开剂，将层析纸（样品端朝下）插入展开剂中靠在杯壁上，待展开剂延层析纸向上平行展开至约 7厘米处时取出层析纸，观察结果。
四、判断：在本实验条件下，如果样品在展开轨迹中出现斑点，其斑点展开（向上跑）的距离与某一对照液展开后的斑点距离相等、形状相同、颜色虽浅却相近时，即可判断样品中加入了这一色素。
五、说明：1、本方法能够判定样品中是否加入了目视可见的苏丹红（1、2、3、4号），同时对判断样品中是否加入了其它非食用色素也有一定的参考价值，论据在于国家标准允许使用的辣椒红天然色素以及允许使用的合成色素在本方法展开过程中不会形成斑点，对出现异常斑点的样品，可用高效液相色谱仪进一步确正。
注意：国家允许使用的红曲天然色素在展开后的前沿顶端会形成斑点，需要时可用对照液作对比实验。
2、苏丹红对照液的点样量不要太多，否则会产生拖尾现象。
在用毛细管沾取对照液后，可在棉花球或一张废弃的层析纸上沾弃多余的溶液，使毛细管尖端留有不超过0.5厘米距离的溶液，将其一次性点到层析纸+字线上。
3、展开剂的使用应适量，液面高度应控制在斑点以下，展开过程中层析纸不能倾倒，每展一张层析纸最好更换一次展开剂。
4、环境温度会影响斑点的展开距离。
DM-P-097 生鸡蛋中苏丹红的测定
生鸡蛋中苏丹红的测定序列号：DM-P-0971、适用范围适用于生鸡蛋中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、苏丹红G和苏丹红7B的检测，方法检出限是10 μg /kg。
2、提取(1) 取2 g样品、2 g NaCl、20 mL乙酸乙酯混合，振荡5 min，超声提取5 min，8000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 将下层残留物用20 mL乙酸乙酯按照步骤(1)重复提取一次，合并两次上清液定容到40 mL；(3) 取10 mL上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至近干，再加入5 mL正己烷混匀，待净化。
3、净化ProElut SDH 6 mL（Cat.#65909）a活化： 5 mL正己烷活化；b上样：加入待净化液，弃去流出液；c淋洗：依次加入5mL正己烷，5 mL1%乙酸乙酯正己烷，弃去流出液；d洗脱：加入10 mL1%甲酸乙酸乙酯，收集流出液；e重新溶解：将洗脱液在40 ℃下减压蒸馏近干，用40%甲基叔丁基醚甲醇溶液定容至1 mL，供HPLC分析。
4、色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(2), 250 mm×4.6 mm, 5 μm（Cat# 99603）流速：1.0 mL/min 进样量：20 μL 柱温：40 ℃检测器：苏丹红G 430 nm 苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、7B 518 nm流动相：0.2% 磷酸水溶液:乙腈=15:855、添加回收结果生鸡蛋中苏丹红的HPLC检测添加回收结果430 nmTime (min)V o l t sTime (min)V o l t s生鸡蛋中苏丹红检测(加标样品)的液相色谱图430 nmTime (min)V o l t s518 nmTime (min)生鸡蛋中苏丹红检测(空白样品)的液相色谱图 430 nm10203040Time (min)0.0000.0100.020V o l t s518 nm10203040Time (min)0.0000.0100.020V o l t s。
苏丹红等油溶性非食用色素的快速纸层析测定法
苏丹红等油溶性非食用色素的快速纸层析测定法方法编号：CDC-20411 适用范围：本方法适用于苏丹红（1、2、3、4号）等油溶性非食用色素的现场快速检测。
2 方法原理：依据苏丹红等油溶性非食用色素的化学极性不同，通过绽开剂在试纸上的绽开距离不同来确定确定组分的存在。
3 检测试材（试剂盒组成）：快速层析纸，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ号系列苏丹红对比液，绽开剂，毛细管。
4 样品处理：取约1g样品于容器中，加入2～4 mL乙酸乙酯，充分混匀，提取1min，静置3min以上。
5 点样：取一张层析纸，在端底向上约1cm处、平行相隔约1cm、用铅笔画出将要点样的+字线或五个小点。
取1支毛细管沾取样品溶液的上层液，将其分别点在五个+字线上（样品溶液颜色较浅时，可在每次点样斑点挥干后重复点样），斑点直径掌握在5毫米以内。
另取四支毛细管分别沾取苏丹红1、2、3、4号对比液少许分别点在样品的原点上。
6 绽开：取一个250mL以上的烧杯，加入约5mL绽开剂，将层析纸（样品端朝下）插入绽开剂中靠在杯壁上，待绽开剂延层析纸向上平行绽开至层析纸顶端约1厘米处时取出层析纸，观看结果。
7 结果推断7.1在本试验条件下，假如样品在绽开轨迹中消失斑点，其斑点绽开（向上跑）的距离与某一对比液绽开后的斑点距离相等、颜色相同或颜色虽浅却相近时，即可推断样品中含有这一色素。
7.2我国允许使用的色素除自然色素外没有油溶性色素，自然色素的化学极性往往很小，样品中即使含有自然色素，绽开后的色斑会在前沿之处消失淡色斑点或淡色条带。
7.3假如对比物已经绽开，而样品色斑在原处未动或绽开的距离很小，表明这一色素为水溶性色素，可用水溶性色素检测试剂来推断其是食用的还是非食用的。
8 留意事项：8.1本方法检出限为点样量10 L,0.08g 目视可见；最低检出浓度8g/mL。
精确定量需要采纳高效液相色谱仪。
8.2 检测的样品数量较多时，不必每张层析纸上都点对比液，可一次点几个样品，当绽开过程中消失斑点后，再做加入对比液试验。
食品中苏丹红的快速检测方法
【检测步骤】 1.样品处理：取约2g样品（辣椒取1g）于研钵中, 加入一瓶提取剂研 磨约3至5分钟，用滤纸过滤后挤干残渣, 收集滤液5mL于100mL量筒 中，用蒸馏水定容至15mL。 2.过层析柱：将50mL注射器与层析柱（层析柱使用前依次用5ml洗 脱液、5ml水激活）连接，将步骤1中收集到的样液倒入注射筒里， 用注射塞加压，加快流速，建议15mL样本通过柱子的时间为3～ 5min。待样液完全流干后加2mL洗涤剂、2ml水洗涤层析柱。 3.观察结果：观察层析柱中吸附剂颜色变化，若吸附剂逐渐形成红色 环带，可初步判断样本中含有苏丹红；向层析柱中加1mL洗脱液； 将其洗脱下来的液体用5mL离心管收集,看液体颜色来判断。 萃取：取步骤3中的5mL离心管，加入1mL萃取剂，加入0.2ml水， 振荡，离心管上层若有明显的红色则可判断样品中含有苏丹红。 4.检测：用1ml注射器取步骤4中离心管中的上层液(注意不要吸到下 层的液体), 加到白色点滴板的一个孔上，样液渐渐ห้องสมุดไป่ตู้干，若在孔上形 成红色斑环则说明样品中含有待检物质。加0.2ml提取剂溶解，滴加 2~3滴定性试剂,试剂红色加深为苏丹红1、2，试剂变蓝色为苏丹红3、 4。（注意及时观察）
实验原理：
分子印迹聚合物是一类新的分子识别物质, 它将待 测物质作为模板分子, 首先, 使功能单体与模板分 子间相互作用形成单体- 模板分子复合物; 然后, 功 能单体与交联剂交联聚合形成聚合物, 将模板分子 固定; 最后再通过一定的物理或化学方法把模板分 子提取出来。从而在聚合物中留下一个与模板分子 特异性结合的功能基的三维空穴, 对模板分子具有 专一性识别作用。这种分子印迹聚合物具有构效预 定性、特异识别性和广泛实用性。其识别能力可以 和生物分子抗原- 抗体、酶- 底物、受体-激素间的 特异性识别相媲美, 同时还具备对恶劣环境(高温、 高压、强酸、强碱)的耐受性。
高效液相色谱法测定食品中苏丹红的研究
068苏丹红是一种化学染料，具有致癌性，不允许在食品中添加。
但有些不法商贩为了让食品颜色更鲜艳，仍会使用苏丹红，因此加强对食品中苏丹红的检测十分必要。
本实验在参考国内外检测方案的基础上，对检测方案进行了改善，实现了简单、迅速、准确的目的。
一、材料及方案1.仪器。
高效液相色谱仪安捷伦1100（二极管阵列检测器）和一些常用仪器。
2.试剂和标准物。
甲醇（色谱纯度）；乙腈（色谱纯度）；有机酸溶剂（CH 3COOH∶HCL∶H 2O=10∶2∶1）；20%NAOH溶液；乙醚+石油醚（1＋1）（分析纯度）。
量取苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红G和苏丹红7B各10.0mg作为标准贮备液（100 μg/mL ），用乙醚将其溶解后，用正己烷配制成100mL 的贮备液，用于标准系列的制备。
3.方法。
（1）样品处理。
在50mL软木管中用20mL有机酸溶液提取约10g样品2-3次，收集并合并低酸溶液，在水浴中蒸发大约2/3的酸。
接下来用20%氢氧化钠溶液调节到微碱性，放入10mL乙醚+石油醚（1+1）在分液漏斗中萃取2-3次，然后将上层醚层收齐，在水浴中蒸发浓缩，甲醇定容至2.0mL，过0.45微米的滤膜，上机。
（2）色谱条件。
色谱柱Phenomenex cl8，250x4.60mm，5μm，流动速度是1.0mL/min。
色谱柱的温度是30℃，流动相内的溶剂是酸性的水溶液（165mL的CH 3COOH溶于1000mL的水）和溶剂B（乙腈）。
它的梯度洗脱见表1。
表1：不同流动相配比在不同时间应用总结果时间（min）溶剂A（%）溶剂B（%）梯度曲线02575线性10.02575线性11.00100线性20.00100线性25.02575线性苏丹橙G是432纳米，苏丹红I是478纳米，苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红7B是520纳米；进样量是20微升，标准溶液浓度是5.0μg/mL。
峰值出现的时间分别是高效液相色谱法测定食品中苏丹红的研究苏丹红G（5.704分钟）、苏丹红I（7.227分钟）、苏丹红Ⅲ（15.470分钟）、苏丹红7B（21.510分钟）、苏丹红IV （22.241分钟）。
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苏丹红检测方法
一、高效液相色谱法
1.高效液相色谱法
目前国内已普及应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。
它采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，制定这项标准时确定了科学的方法流程，这一流程也是实际检测时应遵循的检测流程，即样品制备－称样－分散－提取－离心－分出上清－蒸干－正己烷溶解－固相萃取－洗脱－定容－上机。
据介绍，这种检测易于操作，只要配备了相应的仪器，关键是高效液相色谱仪，我国县级以上技术结构的检测人员均可以依据标准对食品中的苏丹红含量进行有效的检测。
它具有如下特点
适用范围宽。
由于本方法具有高提取率、高纯化性能、高浓缩倍数，既可以用于检测含苏丹红量相对较多的食品，也可以检测含苏丹红量极少的食品。
无论何种基质的样品，都可以应用本标准对食品中的苏丹红进行检测。
高提取率。
对于纯油基的样品（像辣椒油）采用正己烷直接溶解，可保证提取率达95%。
对于水基的食品（像番茄沙司），经水和丙酮分散后采用正己烷提取，也可保证提取率在85%以上。
高纯化性能。
标准确定了中性氧化铝粉作固相萃取，利用了氧化铝对苏丹红的强吸附能力，并对油脂进行饱和性吸附。
在前处理时借助极性固相萃取填料一次性将干扰和污染物最大可能除掉，有助于将油性样品中的大量油脂在随后的清洗步骤中脱除。
实验表明，氧化铝可以有效脱除样品中的干扰成分，使液相谱图干净清晰。
高浓缩倍数。
实际检测中可以根据需要，任意地对目标化合物进行浓缩，目标化合物不因为被浓缩而影响其纯净度，可大大降低检出限，即不会对检测结果的准确性产生影响。
2.反相高效液相色谱法
3.凝胶柱净化-高效液相色谱法
4.固相萃取高效液相色谱法
二、液相色谱发
1.凝胶渗透——液相色谱法
2.液相色谱-质谱/质谱检测方法
3.LC-ESI/MS分析食品中4种苏丹红色素的方法。
三、气相色谱法
气相色谱-质谱(GC-MS)选择离子检测法(SIM) 四、电化学分析方法
极谱法。