流式细胞仪检测正常人类精子细胞的凋亡-第三军医大学学报
流式细胞仪双色术检测机采血小板活化方法
流式细胞仪双色术检测机采血小板活化方法傅晓岚;陈兆珍;成晓玲;赵树铭【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2003(25)18【摘要】目的探讨一种流式细胞仪检测机采浓缩血小板悬液活化状态的方法。
方法用CD41 FITC、CD62 PE双色标记 ,避光反应 15min后加入 1ml 1%多聚甲醛固定 ,上机分析。
结果采用此方法测定2 2℃保存下不同时间的血小板CD62P表达 ,表明随着时间的延长CD62P阳性率增加 ,保存达到 3d及以上 ,CD62P阳性率增加非常显著。
标本以多聚甲醛固定在 2 4h对CD62P测试结果无明显影响 ,样品不固定处理 ,不同时间测定对结果影响非常大。
结论双色标记流式细胞术检测机采血小板活化敏感、特异 ,重复性好 ,操作简便 ,能较好地反映储存中血小板的CD62P的变化。
可方便应用于血小板的保存及输注的质量监控。
【总页数】2页(P1672-1673)【关键词】流式细胞术;血小板活化;CD62P;血小板保存【作者】傅晓岚;陈兆珍;成晓玲;赵树铭【作者单位】第三军医大学高原军事医学系中心实验室;第三军医大学附属西南医院输血科【正文语种】中文【中图分类】R446.11【相关文献】1.机采血小板保存质量控制的主要指标及检测方法 [J], 王鹤;鲍丽;王淑梅2.流式细胞术检测活化血小板采血方法的改良和护理 [J], 王素侠;张华伟;王振芳;郭琼;吕合作3.机采血小板中白细胞碎片定量检测方法的建立及其影响因素 [J], 蒋光明;张林杰;王保龙;叶书来;陈家萍;周建华;王敏;廖艳秋4.全血三色法流式细胞术检测血小板P-选择素的方法 [J], 龚艳春;郭冀珍;史桂英;石学耕5.流式细胞术与三种活化血小板检测方法对比与分析 [J], 吴迪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
利用流式细胞仪分析细胞存活率细胞周期ROS
利用流式细胞仪分析细胞存活率细胞周期ROS 流式细胞仪（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究领域的技术，可用于分析细胞数量、形态、存活率、细胞周期等多个参数。
下面将详细介绍如何利用流式细胞仪来分析细胞存活率、细胞周期和ROS （Reactive Oxygen Species）。
一、分析细胞存活率细胞存活率是研究细胞毒性或细胞凋亡过程中的重要参数。
在流式细胞仪中，常用细胞染色剂PI（Propidium Iodide）来评估细胞的存活率。
PI是一种能够穿透破损细胞膜并结合DNA的染色剂，可以通过荧光检测器来测量。
具体操作步骤如下：1.培养待测试的细胞，并将细胞备样。
可以使用PBS洗涤一遍，以获得单细胞悬浮液。
2. 使用细胞培养基或PBS将细胞悬浮液稀释至合适的细胞浓度，通常在1×10^6 - 1×10^7 cells/mL之间。
3.加入适量的PI染色剂到细胞悬浮液中，一般终浓度为1-10μg/mL。
4.在黑暗条件下，在4°C冷藏室中孵育15-30分钟，避免光照和温度升高。
5.使用流式细胞仪进行测量。
设置PI染色剂的激发波长和检测通道，根据实验需要选择适当的过滤器。
6. 将细胞悬浮液转移到流式细胞仪的样本管中，进行数据采集和分析。
可以设置门控（gating）策略以排除细胞碎片和颗粒物。
通过分析样本中PI染色的细胞数量，可以计算出细胞的存活率。
二、分析细胞周期细胞周期分析是研究细胞增殖和凋亡机制的一项重要实验。
在流式细胞仪中，通过DNA染色剂染色和分析可以了解细胞的周期分布情况。
具体操作步骤如下：1.培养待测试的细胞，并将细胞备样。
可以使用PBS洗涤一遍，以获得单细胞悬浮液。
2. 使用细胞培养基或PBS将细胞悬浮液稀释至合适的细胞浓度，通常在1×10^6 - 1×10^7 cells/mL之间。
3.用酒精或细胞固定液固定细胞，一般在-20°C的环境中固定20-30分钟。
(完整版)流式细胞仪检测细胞凋亡
流式细胞仪检测细胞凋亡:PI单染色法基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。
这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。
研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。
许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。
2. 光散射特性：凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。
在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。
在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。
此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。
细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。
但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。
因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。
根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。
也可用于活细胞的分类。
试剂与仪器PBS溶液；PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。
用棕色瓶4℃避光保存。
70%乙醇400目筛网流式细胞仪实验步骤1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。
2. 3ml PBS洗涤1次。
3. 离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时。
流式细胞术及其在细胞凋亡检测中的应用
流式细胞术及其在细胞凋亡检测中的应用
娜仁图娜拉;闫雷;赵瑞杰;关伟军;马月辉;哈斯苏荣
【期刊名称】《中国组织工程研究》
【年(卷),期】2009(13)27
【摘要】流式细胞术是采用流式细胞仪对单个细胞或其他生物微粒进行快速定性、定量分析与分选的一门技术。
它不仅快速、灵敏和准确,而且还具有客观、直接和
同时进行多参数检测的优点。
细胞在凋亡时产生的一系列形态学、生物化学及分子生物学性质的变化,包括细胞皱缩,核染色质凝聚,细胞膜通透性改变,诱导蛋白酶凋亡分子激活,线粒体跨膜电位降低,膜磷酯酰丝氨酸外化,胞质Ca2+浓度升高,DNA片
段化及含量变化等特点,进行定性、定量测试分析,从而实现对细胞凋亡的准确测定。
【总页数】4页(P5353-5356)
【作者】娜仁图娜拉;闫雷;赵瑞杰;关伟军;马月辉;哈斯苏荣
【作者单位】内蒙古农业大学动物科学与动物医学学院;中国农业科学院北京畜牧
兽医研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R318
【相关文献】
1.应用流式细胞术检测大鼠心肌细胞缺氧/复氧后内质网应急引起细胞凋亡 [J], 王珊;廖杰;于力方;李宁;段秋华
2.流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用和研究进展 [J], 王子兵;崔玉芳
3.应用流式细胞术检测17β-雌二醇对H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡的保护作用 [J], 贾国荣;俞小瑞;李红波;王淑红;韩燕
4.流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用 [J], 张韫;靳耀英;李忻;杨鑫;高福云
5.流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用 [J], 邹全明;何梅;于长青;李文健;鲁东水;徐启旺;朱锡华
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检测细胞凋亡的三种流式方法
检测细胞凋亡的三种流式方法细胞凋亡（apoptosis）是细胞自主性死亡的过程，是正常细胞发育和组织调控的重要途径。
为了研究细胞凋亡的机制和调控，科学家们发展出了许多方法来检测和定量细胞凋亡的发生。
其中流式细胞术（flow cytometry）是最常用的方法之一，根据不同的细胞特征和所需信息，可以有多种方法用于检测细胞凋亡。
下面将介绍三种常用的流式细胞术方法。
1. 荧光标记的Annexin V/PI双染法：Annexin V是一种细胞外结合蛋白，具有高度特异性结合细胞凋亡的特点。
当细胞凋亡发生时，磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞内翻转至细胞外，而Annexin V能够结合在PS上。
Propidium Iodide（PI）能够穿过损伤的细胞膜，结合到细胞核内的DNA分子上。
通过将Annexin V标记为绿色荧光染料，将PI标记为红色荧光染料，通过流式细胞术定量测量荧光信号的强度，可以区分出未凋亡细胞（Annexin V和PI双阴性），早期凋亡细胞（Annexin V阳性，PI阴性），晚期凋亡和坏死细胞（Annexin V和PI双阳性）等不同状态的细胞。
2.荧光标记的DNA碎片染色法：3. 荧光标记的Caspase活性检测法：Caspases是细胞凋亡过程中的关键酶，它们在给定的信号下被激活并参与调节细胞凋亡的执行阶段。
通过使用荧光标记的Caspase底物，如FLICA系列（Fluorochrome Inhibitor of Caspases）、CaspGLOW系列（Caspase-Glo Kits），可以测量细胞中Caspase的活性。
这些底物在被Caspase酶剪切后会释放出荧光信号，通过流式细胞技术可以测量荧光信号的强度。
由于Caspase活性与细胞凋亡过程密切相关，因此可以利用这些荧光标记底物来定量测量细胞凋亡的发生。
总结起来，流式细胞术是一种非常有效的方法用于检测细胞凋亡的发生。
Annexin V/PI双染法可以定量测量不同状态的细胞，DNA碎片染色法可以测量细胞凋亡的程度，荧光标记的Caspase活性检测法可以测量细胞中Caspase的活性。
利用流式细胞仪分析细胞存活率、细胞周期、ROS
利用流式细胞仪分析细胞存活率、细胞周期、ROS1测定细胞存活率1.1取对数生长期的细胞,均以4×105/mL密度接种于6孔细胞培养板上；1.2培养过夜后，用相应药物处理细胞；1.3 消化收集细胞,包括培养液中悬浮的死细胞；1.4 300g离心5 min，去上清；1.5 加1mL PBS缓冲液重悬细胞，再次离心去上清1.6 最后重悬细胞于含5 μg/mL碘化丙啶(propidium iodide, PI)的PBS缓冲液中(PI buffer：3.4 mM 柠檬酸钠(Trisodium Citrate), 9.65 mM NaCl, PI 20 mg/mL, 0.03% Nonidet P-40 , 配于H2O中)；1.7 避光冰上孵育10 min,上流式细胞仪测定细胞存活率。
2测定细胞周期2.1取对数生长期的细胞,均以4×105/mL密度接种于6孔细胞培养板上；2.2培养过夜后，用相应药物处理细胞；2.3 消化收集细胞，包括培养液中悬浮的死细胞；2.2 收集的细胞经PBS缓冲液洗一次后，去上清，将细胞逐滴加入70%预冷的乙醇中，4℃避光固定30 min；2.3 加BSA，离心去上清，重悬细胞于PBS缓冲液，再次离心，去上清；2.4 重悬细胞于含100 unit/mL RNA酶的PBS缓冲液中，避光37℃处理30 min；2.5 加2 mg/mL PI至终浓度50 μg/mL，避光孵育30 min，过滤后上流式细胞仪分析。
3测定胞内ROS的积聚3.1取对数生长期的细胞,均以4×105/mL密度接种于6孔细胞培养板上；3.2培养过夜后，用相应药物处理细胞；3.3 消化收集细胞；3.2 PBS缓冲液清洗一次，随后重悬细胞于1mL的PBS缓冲液中；3.3加荧光探针CM-H2 DCFDA至终浓度1 M/mL，37℃孵育30 min，上流式细胞仪分析活细胞内ROS的积聚情况。
流式细胞仪检测细胞凋亡
流式细胞仪检测细胞凋亡:PI单染色法基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。
这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。
研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。
许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。
2. 光散射特性：凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。
在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。
在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。
此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。
细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。
但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。
因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。
根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。
也可用于活细胞的分类。
试剂与仪器PBS溶液；PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。
用棕色瓶4℃避光保存。
70%乙醇400目筛网流式细胞仪实验步骤1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。
2. 3ml PBS洗涤1次。
3. 离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时。
人正常精液中早期凋亡精子的检测
人正常精液中早期凋亡精子的检测岳焕勋;蒋敏;李福平;林丽;张思孝【期刊名称】《四川医学》【年(卷),期】2007(28)8【摘要】目的通过细胞化学方法观察正常精液中精子早期凋亡发生的程度.方法采用荧光标记的AnnexinV和碘化丙啶对34例具有正常精液分析参数的精子进行染色和显微观察,计数凋亡精子发生率.结果精液中早期凋亡精子发生率为6.5(4.9,7.4)%,个体间存在较大的差异.凋亡精子发生率和年龄和禁欲时间等不相关.结论精液中存在少量的早期凋亡精子且个体间差异较大,荧光标记的AnnexinV和碘化丙啶染色显微镜观察可以有效地对其进行量化观察.【总页数】2页(P826-827)【作者】岳焕勋;蒋敏;李福平;林丽;张思孝【作者单位】四川大学华西第二医院人类精子库,四川,成都,610041;四川大学华西第二医院人类精子库,四川,成都,610041;四川大学华西第二医院人类精子库,四川,成都,610041;四川大学华西第二医院人类精子库,四川,成都,610041;四川大学华西医院泌尿外科,四川,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】R394【相关文献】1.利用细胞块检测少精子症精液增殖与凋亡的研究 [J], 刘悦;张杰;聂树涛2.正常供精者精液检测时间与精子活力的关系研究 [J], 马金霞;钱立新;蒋田华;吕强;吴宏飞3.精液中凋亡精子与精液分析参数的相关性研究 [J], 岳焕勋;李福平;蒋敏;林丽;张思孝4.无精子症病人精液中非精子细胞的检测 [J], 陈怀波;张小平;王志新;冯强;张大虎;郭永莲;丁智勇;王文平;钱铁梅5.双色荧光原位杂交(FISH)检测正常人精子中X精子与Y精子比率 [J], 刘胜勤;郑履康;邓丽霞;张桥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
细胞凋亡的流式细胞仪检测技术研究进展
tween the excretion of thromboxane and prostacyclin metabolites in pulmonary hypertention[J ].N Engl J Med ,1992,327(2):70～759 Hoshikawa Y ,Voelkel NF ,G esell TL ,et al.Prostacyclin receptor 2de 2pendent modulation of pulmonary vascular remodeling[J ].Am J Respir Crit Care Med ,2001,164(2):314～31810 Tuder RM ,Cool CD ,G eraci MW ,et al.Prostacyclin synthase expres 2sion is decreased in lungs from patients with severe pulmonary hyper 2tention[J ].Am J Respir Crit Care Med ,1999,159(6):1925～193211 黄晓颖,王良兴,陈少贤,等1血红素氧合酶1基因表达与慢性低氧高二氧化碳肺动脉高压的关系[J ]1中国病理生理杂志,2001,17(9):870～87412 Christou H ,Morita T ,Hsieh CM ,et al.Prevention of hypoxia 2inducedpulmonary hypertention by enhancement of endogenous heme oxyge 2nase 21in the rat [J ].Circ Res ,2000,86(12):1224～122913 陶清国,张珍祥,徐永健1慢性阻塞性肺病患者肺内细胞增殖与凋亡的研究[J ]1中华医学杂志,1998,78(8):574～57714 Hu R ,Dai A ,Tan S.Hypoxia 2inducible factor 1alpha upregulates theexpression of inducible nitric oxide synthase gene in pulmonary arter 2ies of hyposic rat [J ].Chin Med J ,2002,115(11):1833～183715 Z ielinski J ,Tobiasz M ,Hawrylkiewicz I ,et al.Effects of long 2termoxygen therapy on pulmonary hemodynamics in COPD patients :a 62year prospective study[J ].Chest ,1998,113(1):65～7016 Plywaczewski R ,Sliwinski P ,Nowinski A ,et al.Incidence of noctur 2nal desaturation while breathing oxygen in COPD patients undergoing long 2term oxygen therapy[J ].Chest ,2000,117(3):679～68317 Ashutosh K ,Phadke K ,Jackson J F ,et e of nitric oxide inhala 2tion in chronic obstructive pulmonary disease [J ].Thorax ,2000,55(2):109～11318 Hinderliter AL ,Willis PW ,Barst RJ ,et al.Effects of long 2term infu 2sion of prostacyclin (epoprostenol )on echocardiographic measures of right ventricular and function in primary pulmonary hypertention[J ].Circulation ,1997,95(6):1479～148619 Rubin LJ ,Badesch DB ,Barst RJ ,et al.Bosentan therapy for pul 2monary arterial hypertention[J ].N Engl J Med ,2002,346(12):896～90320 Michelakis ED ,Tymchak W ,Noga M ,et al.Long 2term treatmentwith oral sildenafil is safe and improves functional capacity and hemo 2dynamics in patients with pulmonary arterial hypertention[J ].Circu 2lation ,2003,108(17):2066～206921 Xie QM ,Tang HF ,Chen J Q ,et al.Pharmacological actions of tetran 2drine in inflammatory pulmonary diseases [J ].Acta Pharmacol Sin ,2002,23(12):1107～11133广东医学院附属医院皮肤科细胞凋亡的流式细胞仪检测技术研究进展广东省东莞市常平医院皮肤科(东莞511700) 曾文军 王柳均 综述 樊翌明3 吴志华3 审校 细胞凋亡(apoptosis ,APO )是指细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的规律,通过启动内部机制,主要是内源性DNA 内切酶的激活,自己结束其生命的过程。
三氧化二砷诱导肝癌细胞HepG_2凋亡作用
三氧化二砷诱导肝癌细胞HepG_2凋亡作用闻勤生;罗俊卿;焦成松【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2001(23)8【摘要】目的探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导肝癌细胞ＨｅｐＧ２凋亡作用。
方法应用普通光学显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪观察Ａｓ２Ｏ３对ＨｅｐＧ２细胞株的形态学改变和诱发凋亡率。
结果Ａｓ２Ｏ３作用于细胞后，可看到较典型的细胞凋亡形态学改变，细胞体积缩小、染色质固缩成斑块状、呈半月型紧贴于核膜周边、核碎裂、凋亡小体形成等。
ＡＯ／ＥＢ荧光染色法显示，细胞凋亡率为３．１％－９．１％。
Ａｓ２Ｏ３诱导ＨｅｐＧ２细胞凋亡作用呈时间依赖性，最佳浓度为２μｍｏｌ／Ｌ。
流式细胞仪ＤＮＡ直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。
Ａｓ２Ｏ３主要作用于细胞周期的Ｇ２／Ｍ期。
结论Ａｓ２Ｏ３具有诱导ＨｅｐＧ２细胞凋亡作用，具有治疗肝癌的潜在价值。
【总页数】2页(P913-914)【关键词】三氧化二胂;肝癌;细胞凋亡;抗癌药【作者】闻勤生;罗俊卿;焦成松【作者单位】第四军医大学唐都医院消化内科;第四军医大学唐都医院传染科【正文语种】中文【中图分类】R735.7;R979.1【相关文献】1.叶下珠复方对人肝癌HePG_2细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用 [J], 鲁玉辉;符林春2.复方肝癌宁含药血清诱导肝癌HepG_2细胞凋亡的实验研究 [J], 袁冬生;王新华;李常青;刘妮3.硒-甲基硒代半胱氨酸诱导肝癌HepG_2细胞凋亡作用 [J], 魏振利;戴灵4.三氧化二砷对肝癌细胞株HLE的细胞毒和诱导凋亡作用 [J], 韩继武;刘铁夫;徐洪雨;庄丽维因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
流式细胞凋亡结果解读
流式细胞凋亡结果解读
流式细胞凋亡结果解读是通过流式细胞术来评估细胞中的凋亡程度。
凋亡是一种正常的细胞死亡形式，它在维持机体内细胞平衡中起着重要的调节作用。
在流式细胞凋亡结果解读中，我们通常会关注两个参数：细胞凋亡率和凋亡程度。
细胞凋亡率是指在一定细胞总数中凋亡细胞数量所占的比例。
常用的流式细胞仪会使用特定的荧光探针，如Annexin V和PI，以区分细胞的生死状态。
Annexin V可以结合在凋亡细胞表面的磷脂，而PI则能够进入已损伤的细胞。
通过流式细胞仪的检测和分析，我们可以确定细胞的凋亡率。
凋亡程度是指凋亡细胞中发生的具体变化。
在凋亡过程中，细胞会发生DNA 断裂和染色质凝固，体积也会减小。
通过流式细胞仪可以进一步评估这些变化。
例如，可以使用荧光染料如Hoechst 33342染色核酸，以观察DNA断裂。
同时，还可以使用其他荧光探针或标记特定蛋白来检测凋亡相关的分子信号途径。
通过准确评估细胞凋亡率和凋亡程度，我们可以了解细胞对于各种刺激的响应和机体内细胞死亡的调节情况。
这对于研究疾病的发生机制、药物研发以及评估治疗效果都具有重要意义。
总之，流式细胞凋亡结果解读是通过流式细胞术来评估细胞中的凋亡程度和凋亡细胞比例。
这种评估可以为我们研究细胞死亡的机制和判断治疗效果提供重要的参考。
PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡的影响因素
基本内容
、特异性和自动化程度，从而为细胞凋亡研究提供更加可靠的工具。
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解决方法：熟练掌握流式细胞仪数据分析的方法和技巧，理解细胞凋亡的生 物学过程。在数据分析中，应选择经验证的参数设置，并结合研究目的进行调整。 对于结果的解读，应结合凋亡相关文献和实验数据进行综合分析，避免主观偏见。
4、数据分析与解读
总结：使用PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡时，需要注意多个影响因素。这 些因素包括PI染料的浓度和作用时间、样本处理过程、流式细胞仪的操作和维护 以及数据分析与解读等。为了获得准确的实验结果，需要对这些因素进行严格的 控制和优化。
1、PI染料的浓度和作用时间
1、PI染料的浓度和作用时间
PI（Propidium Iodide）是一种常用的细胞凋亡染色剂，可以与DNA结合并 使其发出红色荧光。然而，PI的浓度和作用时间对实验结果有很大影响。如果PI 浓度过低，则不能有效地染色细胞；而如果浓度过高，则可能导致细胞膜通透性 改变，
基本内容
结果可以以图表形式展示，如散点图、柱状图和曲线图等，以便直观地反映 细胞凋亡状态。
基本内容
总之，流式细胞术在细胞凋亡检测中具有广泛的应用价值，可以提供快速、 准确和多参数的结果。随着生物学和医学研究的不断发展，流式细胞术在细胞凋 亡检测中的应用将不断完善和拓展。未来，随着技术的进步，流式细胞术有望实 现更高的灵敏度
第二部分：双脱氧核苷酸法
与DAPI、PMA-RPN和IBF-IP等其他几种方法相比，双脱氧核苷酸法在检测细 胞凋亡方面具有较高的灵敏度和特异性。然而，双脱氧核苷酸法操作较为繁琐， 且需要使用较多的双脱氧核苷酸，可能会增加实验成本。
第三部分：聚合酶链反应法
第三部分：聚合酶链反应法
细胞生物学中的细胞凋亡检测和分析技术
细胞生物学中的细胞凋亡检测和分析技术细胞凋亡是细胞生物学中的一个重要概念，指的是受到外界刺激或内部因素导致细胞自我死亡的生理过程。
细胞凋亡检测和分析技术对于研究细胞生命周期、生物发育、癌症等多个领域都具有重要意义。
本文将介绍几种常见的细胞凋亡检测和分析技术。
1. 流式细胞术流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究的技术，可以同时分析大量细胞的生物学特性。
在细胞凋亡检测方面，流式细胞术可以通过荧光标记检测凋亡细胞的数量和活性。
常用的凋亡指示剂有ANNEXIN V和PI（Propidium Iodide）。
2. TUNEL（端粒末端脱氧核糖核酸酶介导的dUTP尾标记）法TUNEL法是一种能够直接检测细胞凋亡的技术。
该方法利用末端转移酶将dUTP标记于凋亡细胞的DNA断口上，并通过荧光标记展示凋亡细胞的数量和特性。
TUNEL法对于体外和组织切片等多种样品形式均适用。
3. DNA Ladder实验DNA Ladder实验是一种常用的凋亡分析方法，通过检测DNA断裂形成的DNA Ladder模式来确定细胞是否发生了凋亡。
这种方法可以通过电泳分析DNA和碱性磷酸酶染色来获得结果。
4. caspase活性检测caspase是一类重要的细胞凋亡启动酶，因此检测和分析caspase的活性是判断细胞是否凋亡的有效方法。
常见的检测方法包括荧光检测和免疫印迹法。
5. 神经胶质酸性成纤维细胞酶染色法（Nissl染色法）神经胶质酸性成纤维细胞酶（Nissl体）是神经细胞体内的一个特殊结构，被广泛应用于神经细胞凋亡检测。
Nissl染色法通过对组织切片进行染色，可以观察到凋亡细胞和正常细胞的差异。
综上所述，细胞凋亡检测和分析技术在细胞生物学的研究中具有重要地位。
不同的技术手段可以提供不同的信息，帮助研究人员深入了解细胞凋亡及其在生物体内的功能及机制。
未来随着技术的不断发展，相信细胞凋亡检测和分析技术将进一步发展和完善，为细胞生物学领域的研究提供更好的工具和方法。
一种流式细胞仪同时检测多个凋亡参数的方法
一种流式细胞仪同时检测多个凋亡参数的方法
刘莉;张军;方超平;李闻捷;沈茜
【期刊名称】《重庆医学》
【年(卷),期】2004(33)10
【摘要】目的建立一种同时检测多个细胞凋亡参数的方法.方法在一个检测中,加入罗丹明123检测细胞凋亡时线粒体膜电位的变化,采用PE标记的ANNEXIN V检测细胞膜的对称性,采用7-AAD检测死亡细胞.结果采用该方法成功检测了低温条件下的淋巴细胞凋亡.结论罗丹明123、PE-ANNEXIN V、7-AAD同时染色是一种检测多个凋亡参数的实用方法.
【总页数】3页(P1562-1564)
【作者】刘莉;张军;方超平;李闻捷;沈茜
【作者单位】第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433;第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433;第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433;第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433;第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433
【正文语种】中文
【中图分类】R446.113
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流式细胞仪分离精子法的研究进展
流式细胞仪分离精子法的研究进展
陆阳清;张明;卢克焕
【期刊名称】《生物技术通报》
【年(卷),期】2005(000)003
【摘要】以X精子和Y精子的DNA含量差别为基础的流式细胞仪分离精子技术是有效的哺乳动物性别控制方法.目前,流式细胞仪分离精子的速度与上世纪90年代初期相比已提高了30多倍,以3000个/秒的常规速度分离X精子或Y精子的准确率可达到85%～90%.迄今,用分离精子人工授精已产下了数万头的动物后代,而分离人的精子也开始应用到了避免X染色体连锁遗传疾病的生殖医学工程中.【总页数】5页(P26-30)
【作者】陆阳清;张明;卢克焕
【作者单位】广西大学动物繁殖研究所,南宁,530005;广西大学动物繁殖研究所,南宁,530005;广西大学动物繁殖研究所,南宁,530005
【正文语种】中文
【中图分类】Q95
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正常男性精子凋亡的流式细胞仪检测
王芳1，罗婧，王丽婷，孙玮，张正治，潘峰
（第三军医大学基础部中心实验室,重庆400038）
摘要：目的检测重庆市近郊男性精子细胞凋亡率，以了解在目前生活环境下男性的生育力是否有改变。
方法用Annexin –V凋亡试剂盒对30例精子细胞样本进行染色后，用流式细胞仪检测其凋亡率。
结果重庆近郊30例男性的精子细胞的凋亡率与国内外文献报道无明显差别。
结论流式细胞仪检测精子细胞凋亡，Annexin-V是一种有效、准确、快速的方法。
关键词：流式细胞仪；精子细胞；细胞凋亡
中图法分类号：文献标识码：
随着工业化进程加快，人们生活更加方便快捷，生活水平也不断提高，不过人们在享受现代科技成果的同时，也在经受环境污染对健康的危害。
特别是大量使用除草剂、杀虫剂、去污剂、洗涤剂等，这些物质被统称为内分泌干扰物（endocrine disrupting, EDs）。
它们对男性生殖功能的影响，已引起社会各界的广泛关注[1]。
细胞凋亡存在于细胞的增殖、分化中，是一种正常的现象。
检测精子细胞凋亡，是从分子水平评价精子功能的重要指标，精子细胞凋亡率与男性生育能力密切相关[2]。
本实验用流式细胞术检测重庆市近郊男性精子细胞的凋亡，以了解目前生态环境下男性生育能力的变化。
1．材料与方法
1．1精液样本
受试者来自于重庆市近郊，以社区为单位进行收集，以25~45岁的青壮年男性为目标人群进行收集，共30例。
禁欲3~5 d，手淫法采集精液，37°Ｃ水浴箱保存，3h内送达实验室。
1．2方法和染色
用Annexin-V FITC/PI试剂盒（碧云天公司），小心吸取上层云雾状细胞50μl，加入145μl 结合缓冲液，加入5μl FITC ，避光室温孵育10min，1500r/min离心10min，沉淀用200μl结合缓冲液重悬，加入10μl PI ，1h 内上机检测。
1.3流式细胞仪检测条件及参数
采用美国Becton Dickinson 公司的FACS Calibur 型流式细胞仪，激发光源，5mW氩离子激光器，激光波长为488nm 。
应用CellQuest 软件收集及分析，用
作者简介：王芳，女，重庆市北碚区人，助理实验员。
电话：（023）68752353，
E-mail :wangfangcxdoris@
通信作者：潘峰,电话：（023）68752349
FL1通道收集FITC 的信号，FL2收集PI 信号。
将光电二极管的电压设为E01，前向散射（FSC）参数设阈值为60，将进样速度控制在400~500个/s。
精子细胞的FSC为横坐标、侧向散射（SSC）为纵坐标，以正常男性精子细胞为正常对照，获取精子细胞的散点图。
调节FSC、SSC ，把目标细胞群调在收集框中央位置，设门选取目标细胞群（图1）；然后调节FL1，FL2补偿值，获取荧光信号的双参数点图，FITC-PI-为双阴性细胞，FITC+PI-为凋亡细胞（图1），并将对照凋亡率调至4.9% 以下，每个样品收集2万个细胞，逐一收集样品（图1）。
1.4 统计学处理
采用SPSS 10.1统计软件进行？检验？
2．结果
流式细胞检测结果见图1，统计结果见表1。
散点图对照样本
图1 精子细胞流式图
表1 精子细胞统计结果（改文字说明）
N Minimum Maximum Mean Std.Deviation 凋亡率30 1.86 14.85 5.8773 2.7982
表2 国内外文献与本次实验所测凋亡率（改文字说明）
受测男性精子细胞国内文献正常生育男性[5]国外文献正常男性[6]
经单侧t 检验两两比较均显示p＞0.05 ，结果示差异不显著。
3．讨论
3．1 荧光染色方法对检测的影响.
按Annexin-VFITC/PI试剂盒说明书操作步骤，在精子细胞悬液中，加入5μl Annexin-V/FITC和10μl PI混匀，于室温避光孵育15min后，加400μl PBS，作流式细胞分析。
FITC的信号太弱，对照及实验样品的凋亡率<1%，与实验结果不符。
其原因是加入PI后，使液体局部碱性浓度过高而造成Ca2+析出，导致FSC及SSC 散点图的改变和细胞凋亡率的下降[3]。
改用1.3染色方法，检测结果见图1。
统计结果（n=30）见表1。
3．2 Annexin-V在检测细胞凋亡的作用。
Annexin-V是一种Ca2+依赖性磷脂蛋白，含319个氨基酸，相对于分子质量35.8×103。
凋亡早期，Ca2+浓度升高，磷脂酰丝氨酸(phosphotidy lserine, Ps)由质膜内层转移至外层，Annexin-V与Ps有高特异性结合。
因此，用标记了的Annexin-V 作为荧光探针，与凋亡细胞外侧暴露的Ps特异性结合，用流式细胞仪检测其凋亡，Annexin-V是一种灵敏、准确、快速的方法[4]。
3．3 结果分析
本实验测出重庆市近郊社区30例精子细胞凋亡率为（5.87±2.80）%，与王光荣等[5]及Ricci等[6]检测结果无明显差异。
说明在目前的生态环境下，重庆近郊男性生育能力未受到明显影响。
已有专家发出警告：全球性人类精子质量再在不断下降，男性不育症患者正在不断增多，其原因与全球环境污染有很大的关系。
研究发现，在精子的发生过程中，始终都存在着细胞凋亡，在精子发生过程中起到重要的调节作用，从而维持睾丸发挥正常的功能。
临床发现，生精功能低下和生精阻滞的患者睾丸生精细胞凋亡明显高于正常生精功能的不育患者。
所以本实验用Annexin-V FITC/PI荧光染色，流式细胞检测精子凋亡率的方法，为检测精子凋亡提供了较为理想的手段，在评估精子功能和男性生育力的研究方向有广阔的应用前景。
参考文献
[1] 张信连. 环境内分泌干扰物对生物和人体健康的影响[J].国外医学临床生物医学与检验
学分册，2005，26（6）：349-351.
[2] Jurjen E. Oosterhuis M D, Andre B, et al . Measuring apoptosis in human spermatozoa :a
biological assay for seman quality [J]. Fertility and Sterility, 2000,74(2):245-250.
[3] 尹琰，寿伟璋. 流式细胞术Annexin-V细胞凋亡检测方法探讨[J].东南大学学报（医学
版），2003，22（3）：169-170.Z
[4] Vernes I, Haanen C, Steffens-Nakken H, et al. A novel assay for apoptosis-flow cytometric
detection of phosphatidylserine expression on early appoptic cell using fluorescein labeled
Annexin-V [J] .J Immunol Methods ,1995,184(1):39-51.
[5] 王光荣，周曾娣，葛争鸣，等. 精子凋亡与男性不育关系初探[J].中华男科学，2002，8（1）：
25-28.
[6] Ricci G, Perticarari S, Giolo E, et al. Apoptosis in human sperm : Its correlation with semen
quality and the presence of leukocytes [J].Hum Reprod, 2002, 17(10): 2665-2672.。