组织处理程序

Paraffin sectioning
• Fixation and embedding • Too soft tissue • 切片前需硬化 • 製作薄切 • 以冰凍或包埋劑方式切取組織
Sharpness knife edge
• 需要完美無缺之刀鋒 • 需要平整無樣之刀鋒 • 需要平滑無礙之刀鋒
• 適用於Light and electron microscope • 適用於Resin embedding • 切片厚度為10nm • 適宜很小組織切片
Microtome Knives
• Steel knives • Non-corrosive knives cryostate • Disposable blader • Tungsten carbide • Glass knives • Diamond knives • Sapphire
Correct cleraance angle
• 防止切片壓縮 • 減少刀面摩擦，讓刀可以通行無阻 • 正確Clearance angle,乃是Knife adge與
Block之斜度（距離）
• Paraffin section 2o~4o • Resin,Frozen 5o~7o
Cutting angle
織塊。
• 切片適用於Light microscope • 不能切取Hard resin，因為容易鬆動 • 操作較快速，但危險性較高
Freezing microtome
• 薄切新鮮標本 • 低溫下操作 • Tissue block 上下移動式切片 • 紡織、皮革、紙、塑膠、橡膠、粉末
食物、糊料
Ultramicrotome
Embedding
包埋盒種類：
• L型模子 • 塑膠包埋模子 • 有洞盒包埋模子
Microtome
Introduction
•不限新鮮或固定之標本切片 •薄切應用於光學顯微鏡檢查(1~10μm) •超薄應用於電子顯微鏡檢查（10nm)
Microtome types
•迴轉式切片機（Rotary microtome) • 滑動式切片機（Sliding microtome) • 冰凍切片機（Frozen microtome)
成功切片四要件
• 優良技術之操作者 • 銳利之切片刀 • 適宜切片機 • 適當處理的標本
Sectioning
• 是一門技術亦藝術 • 非依賴經驗累積不可 • 非只由書本所教導
• 斜度太大會壓縮切片 • 斜度太小會震動刀緣 • 調整切刀角度非常關鍵
Hardness embedding compound
• 切片較厚
＊不同包埋劑會不同厚度：
• Paraffin 1~15 μm
• Resin
0.05~1 μm
• Par-wax/Resin mixtures 0.5~2 μm
• Gelatin 5~200 μm
Rotary microtome
• 石蠟切片厚度為3～5 μm • Resin section為0.5～1 μm • 適宜Disposable steel knife • 適宜石蠟包埋傳統切片 • 適宜切取較堅硬之組織 • 操作較緩慢
Sliding microtome
• 切取Paraffin or Resin embedding較大之組
切片干擾因素
• 刀片不銳利 • 刀片角度錯誤 • 組織塊固定器不牢固 • 組織本質及處理效果
切片變形因素
• 石蠟之本性 • 組織之本性 • 切片刀品質
石蠟可塑點
• 不同石蠟不同可塑點 • 不破裂及產生變形之最低溫度 • 低塑點石蠟較透明且不易脆，但較會壓縮 • 石蠟硬度取決於可塑點，其略低於熔點 • 大結晶契型會影響切割或推開切片
Paraffin Sections
2007.04.11
組織處理程序
• 脫水（Dehydration)：85％→95％→95％→
95%→100%→100%→100%Alcohol 1hur/每缸次
• 澄清(Clearing): Xylene（1hur/每缸次/2次）
• 浸潤(Infiltration):Paraffin wax 30’/每次/4缸次
Microtome
三個主要結構：
• The base (microtome body) • The Knife attachment and Knife • The material or tissue holder
Rotary microtome
• 普遍被採用，尤其歐美國家 • 切片適宜於Light microscopy • 手輪活動式，以推進Block向Knifefk 切片 • 以Block上下移動方向切取 • 機器操作範圍很小 • 冰凍切片機幾乎屬Rotary • 切片設定範圍0.5～60 μm
• Ice
Hale Waihona Puke Baidu
5~20 μm
Section
厚度：
• 石蠟切片: 4～6 μm • 1 μm=1/1000mm
特殊需求厚度
• Kidney section 2 μm • Acid fast stain 2 μm • Nerve stain 10~12 μm • Congo red stain 10~12 μm